付玉潔,鄭從森,孫代鵬,沈 銘,王婷婷,鄧素丹,劉 田,胡玉苗

(1.沈陽(yáng)工學(xué)院生命工程學(xué)院,遼寧 撫順 113122；2.沈陽(yáng)森林動(dòng)物園管理有限公司,遼寧 沈陽(yáng) 110165)

動(dòng)物干制標(biāo)本不僅能夠真實(shí)、直觀的反映動(dòng)物的骨骼、肌肉、腸道和內(nèi)臟器官等組織的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、分布和解剖位置[1],而且其作為教學(xué)材料和直觀教具在動(dòng)物解剖教學(xué)中也發(fā)揮著重要作用。目前,已報(bào)道的現(xiàn)有動(dòng)物干制標(biāo)本技術(shù)主要是高分子多聚物塑化法[2-3]、甘油半干燥法[4]、聚乙二醇-浸漬法[5]、低溫凍干法[1]等方法,而將松香應(yīng)用于動(dòng)物全身肌肉干制標(biāo)本的制作技術(shù)尚未見(jiàn)報(bào)道。筆者參考上述方法中以特定試劑置換取代組織細(xì)胞水分的技術(shù)原理；結(jié)合乙醇的固定置換脫水性；松節(jié)油的透化能力,松香的疏水防潮、防腐、防霉、驅(qū)蟲(chóng)、黏性佳等特點(diǎn)；在解剖上利用這些特性,探索性將松香應(yīng)用于犬的全身干制標(biāo)本的制作。將犬尸體經(jīng)梯度乙醇脫水徹底,再用自制封固液滲入并置換組織細(xì)胞內(nèi)無(wú)水乙醇,隨著無(wú)水乙醇、松節(jié)油的揮發(fā),松香粘附滯留在組織細(xì)胞內(nèi)外,取代組織中水分,保存其組織形態(tài),達(dá)到長(zhǎng)久防腐保存標(biāo)本目的。其制作過(guò)程介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料 成年雄性金毛犬,體重23 kg,犬瘟熱后期無(wú)繼續(xù)治療價(jià)值,由沈陽(yáng)森林動(dòng)物園動(dòng)物醫(yī)院提供。

1.2 試劑及器械 速眠新Ⅱ注射液,購(gòu)自敦化市圣達(dá)動(dòng)物藥品有限公司(批號(hào)：20170801)；37%甲醛溶液(分析純)、冰乙酸(分析純)、無(wú)水乙醇(分析純)、松節(jié)油(分析純),均購(gòu)自沈陽(yáng)瑞豐精細(xì)化學(xué)品有限公司；醇酸清漆、松香,購(gòu)自撫順五金建材市場(chǎng)；防腐液(市售甲醛、水和冰乙酸的體積比為,市售甲醛∶水∶冰乙酸 =100∶870∶30)；封固液(松香、松節(jié)油和無(wú)水乙醇的質(zhì)量比為,松香∶松節(jié)油∶無(wú)水乙醇=12∶5∶4)；常規(guī)手術(shù)器械,購(gòu)自上海聯(lián)輝醫(yī)療用品有限公司；常規(guī)玻璃儀器,購(gòu)自泰州市飛躍玻璃儀器廠；塑料盆、收納箱,購(gòu)自撫順生活用品批發(fā)商場(chǎng)。

1.3 取材及灌注定形 將犬保定確實(shí)后,以0.08 mL/kg·bw,肌肉注射“速眠新”深度麻醉。將頭、胸部和腹部用紗布吊起,四肢加以固定,使其處于自然站立狀態(tài)。沿頸正中線切開(kāi)皮膚,找到并分離右側(cè)頸動(dòng)脈、頸靜脈,靜脈注射肝素500 IU/kg·bw,使全身肝素化；絲線結(jié)扎動(dòng)脈遠(yuǎn)心端、動(dòng)脈夾鉗夾近心端,間距3 cm～5 cm；在已封閉血管上,作V字形斜切口,將插管導(dǎo)管由切口向心臟方向插入,用絲線扎緊并固定放血插管,將放血插管出口連接盛血容器,緩慢放開(kāi)動(dòng)脈夾,使犬失血致死。采用吊桶灌注法,向動(dòng)脈灌注防腐固定液,灌注量約為體重的20%,灌至皮下微呈水腫,口鼻涌出藥液,用手按壓有堅(jiān)實(shí)的彈性感時(shí)停止。最后通過(guò)肛門(mén)、口腔和胸腹腔作局部補(bǔ)充灌注。將犬以躍起姿勢(shì)固定在固定架上,放置3 d,使防腐固定液充分滲透到機(jī)體組織內(nèi)。

1.4 分離肌肉 將已硬化的犬尸體放于解剖臺(tái)上,用帶針頭氣筒刺入皮下鼓氣,使全身皮膚與肌肉分離,用手術(shù)器械逐塊分離皮膚與肌肉[6]。分離原則：順著肌纖維的方向分離肌肉,避免起毛,剔除貼敷于肌肉的淺筋膜、皮下脂肪和其他無(wú)關(guān)組織,保留淺在主要淋巴結(jié)。根據(jù)目的和需要顯示頭、頸、軀干和四肢的淺層主要肌肉和部分深層肌肉。具體操作方法：前肢,環(huán)切腕部皮膚,依次分離暴露腕尺側(cè)屈肌、指外側(cè)伸肌、指內(nèi)側(cè)伸肌、指總伸肌、腕橈側(cè)伸肌、臂肌、臂三頭肌、三角肌、岡上肌、岡下肌、肩胛下肌等。頸部和頭部,分離斜方肌、臂頭肌、胸頭肌等,切除一側(cè)部分頸部肌肉,暴露食管、氣管、頸靜脈、頸動(dòng)脈等；剔除頭頸部皮下脂肪、淺筋膜和多余結(jié)締組織,分離頭皮肌、頸皮肌、面肌、咬肌、頜下腺和顳?。画h(huán)切眼和口唇部皮膚,暴露眼闊匝肌及牙齒。軀干,分離背闊肌、胸肌、腹外斜肌、胸升肌、腹側(cè)鋸肌、肋間外肌、肋間肌、腹直肌等肌肉。后肢,分離闊筋膜張肌、臀中肌、臀淺肌、臀股二頭肌、半膜肌、半腱肌、股四頭肌、腓骨長(zhǎng)肌、趾外側(cè)伸肌、腓腸肌等,環(huán)切跖部皮膚。剔除右側(cè)胸部部分第4至第10肋間肌肉,顯示肋外斜肌、肋間內(nèi)肌、肋骨、肺臟、心臟、膈肌等；作右腹壁切口,上部沿腰錐橫突頂端,前部沿肋弓,下部沿腹白線上5 cm～8 cm的平行線,后部沿骨盆腔前口切除腹壁,保留腹底壁肌肉,充分暴露出肝臟、腸管、腎臟等。應(yīng)當(dāng)注意的是：對(duì)已分離的肌肉應(yīng)裹以濕毛巾或紗布,防止肌肉失水皺縮。

1.5 防腐固定 將上述制作完成的犬全身肌肉標(biāo)本,完全浸沒(méi)于防腐固定液中,覆蓋一層脫脂棉,密封固定10 d,期間更換防腐固定液1次,換液時(shí)剔除肌肉表面殘存的筋膜、脂肪、結(jié)締組織。

1.6 梯度乙醇脫水 經(jīng)上述處理完畢,將犬依次在乙醇體積濃度為70%、85%、95%、100%、100%乙醇溶液中密封脫水處理7 d左右。以酒精比重計(jì)測(cè)得乙醇濃度不在變化為更換乙醇梯度原則。應(yīng)當(dāng)注意的是：犬肌肉組織脫水須徹底。

1.7 封固液滲透 按照封固液配方(質(zhì)量比,松香∶松節(jié)油∶無(wú)水乙醇 =12∶5∶4),在常溫下充分?jǐn)嚢枞芙獠⒚芊忪o置1 d,用雙層紗布過(guò)濾除去雜質(zhì)后待用。取出脫水完全的犬尸體,完全浸沒(méi)在封固液中,覆蓋一層脫脂棉,密封浸泡4 d左右。應(yīng)當(dāng)注意的是：須保持封固液在滲透過(guò)程中松香始終處于飽和狀態(tài),并以松節(jié)油滲至深層肌肉3/4厚度為宜。

1.8 固化定型 經(jīng)上述處理完畢,吊起,清理干凈殘余封固液,固定姿勢(shì),擺放在陰涼通風(fēng)處干燥固化定型5 d,對(duì)犬的表層肌肉進(jìn)行修整。當(dāng)肌肉組織整體呈90%左右固化程度時(shí)刷漆包被。

1.9 刷漆包被 用紗布蘸取無(wú)水乙醇擦拭上述步驟犬的肌肉組織表面析出的白色松香結(jié)晶,均勻涂刷一遍清漆,通風(fēng)晾干4 d,再次涂刷一遍清漆,晾干后對(duì)標(biāo)本進(jìn)行最終整體修整,標(biāo)注各部位肌肉名稱(chēng),裝在玻璃罩中密封保存。

2 結(jié)果

通過(guò)松香法干制技術(shù),制得了犬的全身肌肉干制標(biāo)本,見(jiàn)中插彩版圖1。與原尸體相比,干制后標(biāo)本整體呈淡琥珀色,組織器官皺縮不明顯,可清晰反映出其肌肉、器官位置、解剖學(xué)構(gòu)造與形態(tài)特點(diǎn),標(biāo)本形態(tài)栩栩如生,適合在解剖教學(xué)中使用。經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間放置不曾出現(xiàn)蟲(chóng)蛀、霉變、油脂滲出以及腐敗等現(xiàn)象,且標(biāo)本全身肌肉及相關(guān)組織固有形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰,提高了標(biāo)本質(zhì)量和保存效果,收到滿意效果。

圖1 松香法犬的全身肌肉干制標(biāo)本(右側(cè))

3 討論

3.1 制作原理和效果探討 松香法干制技術(shù)是依據(jù)相似相溶原理及松節(jié)油的透化性,將封固液中松香短時(shí)間內(nèi)快速滲入脫水徹底的肌肉組織細(xì)胞內(nèi),利用乙醇和松節(jié)油易揮發(fā)性加速松香對(duì)機(jī)體組織細(xì)胞的支撐和固化定形過(guò)程,有效減緩肌肉組織細(xì)胞皺縮,維持結(jié)構(gòu)形態(tài)特征[7],達(dá)到長(zhǎng)期保存標(biāo)本的目的。從制作原理上,松香法干制標(biāo)本與高分子多聚物塑化標(biāo)本和甘油半干燥標(biāo)本,既相似又有區(qū)別；三者都是以特定試劑置換取代組織細(xì)胞水分的技術(shù)原理,松香法干制法是用松香,而高分子多聚物塑化法是高分子多聚物(如硅膠),甘油半干燥標(biāo)本是甘油。從效果上,松香法干制標(biāo)本與塑化標(biāo)本在外觀和形狀上相似,經(jīng)長(zhǎng)時(shí)間放置組織器官皺縮不明顯,可清晰反映出其肌肉、器官等生理解剖位置,且基于松香的理化性質(zhì),標(biāo)本呈淡琥珀色且具有很強(qiáng)驅(qū)蟲(chóng)、防腐、防潮和防滲脂效果,無(wú)需額外防腐措施,能有效解決標(biāo)本保存中蟲(chóng)蛀、霉變、腐敗和滲脂等問(wèn)題,是可以達(dá)到塑化標(biāo)本的防腐效果。從制作周期和成本上,松香法干制標(biāo)本最快可2個(gè)月內(nèi)完成,設(shè)備要求和試劑成本比高分子多聚物塑化標(biāo)本和甘油半干燥標(biāo)本便宜得多。此外,封固液配方組分簡(jiǎn)單,可重復(fù)利用,適于制作中、大型動(dòng)物全身或局部組織的干制標(biāo)本制作,也便于實(shí)驗(yàn)教學(xué)和示教。

3.2 操作步驟中注意事項(xiàng) (1)采用皮下臌氣方法能使皮膚與肌層分開(kāi),既便于剝皮又減少肌肉損傷[6]；(2)分離肌肉時(shí),順著肌纖維的方向分離,避免起毛,對(duì)已分離肌肉要注意保濕,防止組織失水干化(因?yàn)榻铍?、筋膜和管道組織失水干化后會(huì)阻礙松香滲入)；(3)乙醇梯度脫水浸泡時(shí)間要足夠,材料脫水要徹底；(4)務(wù)必保證在封固液中滲透過(guò)程中松香始終處于飽和狀態(tài),滲透深度以深層肌肉3/4厚度處為宜；(5)配置封固液時(shí),應(yīng)選擇淺色、不宜結(jié)晶、雜質(zhì)少的松香,保證標(biāo)本的質(zhì)量和色澤。

4 小結(jié)

松香法與高分子多聚物塑化法和甘油半干燥法都有各自的優(yōu)缺點(diǎn)。相較于塑化技術(shù)與甘油半干燥技術(shù),松香法干制技術(shù)更具資金優(yōu)勢(shì),該標(biāo)本組織器官皺縮不明顯,組織形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰,適于普通院校制作中、大型動(dòng)物的全身或局部組織的干制標(biāo)本,也便于實(shí)驗(yàn)教學(xué)和示教；尤其是松香法干制標(biāo)本中松香、松節(jié)油和乙醇等試劑綠色無(wú)毒性,制得的標(biāo)本呈淡琥珀色,基于松香的理化性質(zhì),標(biāo)本具有較高皮膚親和性,防腐效果優(yōu)越。因此,松香法干制標(biāo)本技術(shù)是一種很好的動(dòng)物組織器官保存方法,很適合在動(dòng)物解剖教學(xué)中作為直觀教具和教學(xué)材料。