閆 麗，王曉婷，高 慧

（遼寧中醫(yī)藥大學藥學院，遼寧 大連 116600）

知母為百合科植物知母 Anemarrhena asphodeloides Bge.的干燥根莖，有清熱瀉火、滋陰潤燥功效，可用于治療外感熱病、高熱煩渴、肺熱燥咳、骨蒸潮熱、內(nèi)熱消渴、腸燥便秘等癥[1]。鹽知母是知母歷代的主流炮制品種，前期研究發(fā)現(xiàn)，知母鹽炙后降血糖作用顯著增強，且其醇提物作用優(yōu)于水煎液[2-3]。目前公認的2型糖尿病血脂異常是由于血液中游離脂肪酸增多引起三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白（LDL）增加，高密度脂蛋白（HDL）減少，導致糖尿病發(fā)病增多[4]。本試驗中以糖尿病模型大鼠的血糖血脂因子活性為指標進行研究，觀察不同體積分數(shù)鹽知母醇提物對其的影響，優(yōu)選鹽知母醇提物降血糖的最佳體積分數(shù)?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動物

儀器：Multiskan MK3型酶標儀（美國賽默飛世爾科技有限公司）；TGL-16C型臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；搖擺式高速萬能粉碎機（溫嶺市吉大機械有限公司）；Milli-Q Integral一體機純水儀（大連烽木源科技有限公司）；血糖儀（上海健臻醫(yī)療科技有限責任公司）；FSH-2型可調(diào)高速電動勻漿機（江蘇金壇市佳美儀器有限公司）；H1650-W型臺式離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）；SHA-C型臺式恒溫振蕩器（常州國華電器有限公司）；pH酸度計（上海鵬順科學儀器有限公司）。

試藥：知母（四川新荷花中藥飲片股份有限公司，批號為 1702083）；胰島素（INS）試劑盒（批號為PE30620）、TG試劑盒（批號為 BPE30046）、HDL試劑盒（批號為BPE30048）、LDL 試劑盒（批號為 BPE30047）、總膽固醇（TC）試 劑 盒 （批 號 為 BPE30045）、糖 化 血 紅 蛋 白（HbA1C）試劑盒（批號為 BPE30395），均由上海朗頓生物科技有限公司提供；鏈脲佐菌素（STZ，北京博愛港商貿(mào)中心）；其余試劑均為分析純，水為純化水。

動物：SPF級SD大鼠60只，雄性，體質(zhì)量180～220g，由遼寧長生生物技術(shù)有限公司提供，實驗動物許可證號為SCXK（遼）2015-0001。于室溫25℃、相對濕度50%的環(huán)境下適應性飼養(yǎng)7 d。

1.2 方法

1.2.1 樣品溶液制備

STZ 緩沖液：取檸檬酸 2.1 g，檸檬酸鈉 2.94 g，分別溶于 100 mL 水中，測得 pH 介于 4.2～4.5，經(jīng) 0.22微孔濾膜濾過，加入STZ適量，避光，充分混勻，備用。

脂肪乳：取20 g豬油，加熱至熔化，加入5 g膽固醇，待膽固醇全熔后加入吐溫-80、甘油各10 mL，加水至100 mL，加入蔗糖和果糖各5 g[5]。

鹽知母醇提液：按前期工藝炮制鹽知母[6]。稱適量鹽知母，分別以65%，75%，85%，95%乙醇回流提取3次，每次1 h，濾過，合并濾液，濃縮得醇浸膏。用水混懸浸膏，分別制備成質(zhì)量濃度為0.25 g／mL的溶液。

1.2.2 建模與給藥

隨機取10只SD大鼠作為空白組，其余大鼠用高脂飼料和脂肪乳交替喂養(yǎng)。當大鼠體質(zhì)量在300 g以上時，禁食 12 h，腹腔注射 STZ 緩沖液（40 mg／kg），72 h后測空腹血糖（FBG）≥11.7 mmol為建模成功。將建模成功的50只大鼠，隨機均分為65%乙醇組、75%乙醇組、85%乙醇組、95%乙醇組（分別予相應體積分數(shù)乙醇提取物）及模型組，各組大鼠均連續(xù)灌胃給藥(2.5 g／kg)2周，每天1次。試驗期間，空白組與模型組大鼠根據(jù)體質(zhì)量給予等體積的0.9%氯化鈉溶液。定期測量大鼠體質(zhì)量，以調(diào)整給藥劑量。

1.2.3 指標檢測

末次給藥后，行腹主動脈取血，靜置 30 min，3 800 r／min離心15 min，取上清液，嚴格按試劑盒說明檢測大鼠血清空腹胰島素(FINS)，TG，TC，HbA1C含量。

取部分肝組織，稱定質(zhì)量后放入10 mL EP管中，按質(zhì)量（g）∶體積（mL）為 1∶9的比例，用移液槍吸取磷酸鹽緩沖液（PBS，pH 介于 7.2 ～ 7.4），加入 EP 管中并用高速勻漿機勻漿，勻漿后將其放入高速離心機中，3 800 r／min離心20 min，取上清液檢測大鼠肝組織HDL和LDL。并按公式計算胰島素敏感指數(shù)(ISI)[7]、胰島 素 抵 抗 指 數(shù) （HOMA-IR）[8]。ISI＝ln[1／（FBG ×FINS）]；HOMA-IR ＝ FBG × FINS ／22.5。

1.3 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件分析，計量資料以 X±s表示，行 t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

結(jié)果見表1和表2。與模型組比較，各給藥組大鼠給藥7，14 d后FBG均明顯降低，其中75%乙醇組FBG降低作用最顯著；各給藥組大鼠血糖、血脂水平均不同程度改善，其中75%乙醇組降血糖、調(diào)血脂效果最顯著。

3 討論

糖尿病屬中醫(yī)“消渴”范疇，與素體肥胖、飲食失節(jié)、過食肥甘厚味等密切相關(guān)[9]，從而導致陰津虧耗、燥熱偏盛、痰濁濕熱、肝失疏泄等現(xiàn)象[10]。本研究中通過高脂飼料及脂肪乳灌胃輪流喂養(yǎng)，從而使大鼠飲食過度，進而導致肥胖，然后腹腔注射STZ的方法建立2型糖尿病模型。建模后大鼠出現(xiàn)尿多、尿液黏膩、飲水量增加、精神萎靡、活動松散、體質(zhì)量減輕等現(xiàn)象；給藥后大鼠飲水量及尿量減少，體質(zhì)量有所控制，精神有所好轉(zhuǎn)。

表1 不同體積分數(shù)鹽知母醇提物對糖尿病模型大鼠FBG 的影響（X ± s，mmol／L，n ＝10）

現(xiàn)代研究認為，脂肪組織的胰島素抵抗可降低胰島素介導的抗脂解效應和葡萄糖攝取，由于糖尿病患者游離脂肪酸增多，干擾了胰島素在周圍組織中與受體結(jié)合，使胰島素作用下降，造成不同程度的胰島素抵抗[11]。TG的水解需要脂蛋白脂肪酶（LPL），LPL的合成、分泌和活性均依賴胰島素的作用，而2型糖尿病患者因其出現(xiàn)胰島素抵抗，故其TG水平升高[12]。因此，本試驗中研究了鹽知母不同體積分數(shù)醇提物對糖尿病大鼠血糖、血脂作用的影響，選取了 LDL，TG，HDL等考察指標，結(jié)果表明，75%鹽知母醇提物可顯著降低TG水平，肝臟可正常合成LDL，使LDL進入正常的代謝途徑，從而減少糖尿病的產(chǎn)生。HDL及其主要成分載脂蛋白A-I對血管內(nèi)皮具有多重保護功能，也可阻止一系列病變的產(chǎn)生，從而改善脂肪代謝的紊亂狀態(tài)。

研究發(fā)現(xiàn)，不同體積分數(shù)醇提物對糖尿病模型大鼠的血糖、血脂均有不同程度的改善作用，且75%醇提物降糖效果較顯著。本研究中，經(jīng)炮制后的鹽知母治療糖尿病效果好，這為鹽知母醇提物降血糖活性部位的選擇提供了藥理學依據(jù)，且對鹽知母降血糖的臨床開發(fā)、應用提供了進一步研究的基礎(chǔ)。