吳國(guó)謙 謝福權(quán) 康喜訊

[摘要] 目的 探討EB病毒DNA、ABCG2（乳腺癌耐藥蛋白）聯(lián)合檢測(cè)對(duì)鼻咽癌發(fā)病和預(yù)后的臨床意義。 方法 方便選取該科2016年7月—2017年12月收治的110例鼻咽腫瘤疾病患者為研究對(duì)象，所有患者均在鼻內(nèi)鏡下采集鼻咽組織，送檢驗(yàn)科進(jìn)行EB病毒DNA熒光定量PCR檢查，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果分為正常組41例、EB病毒DNA陽(yáng)性非鼻咽癌組6例、鼻咽癌組63例。將鼻咽癌組織送病理科進(jìn)行ABCG2免疫組化分析，對(duì)EB病毒DNA進(jìn)行原位雜交。將ABCG2陽(yáng)性癌組織設(shè)為A組32例，將ABCG2陰性癌組織設(shè)為B組31例，比較兩組組織對(duì)應(yīng)患者的疾病復(fù)發(fā)率和生存率。結(jié)果 共采集110例患者的鼻咽組織，正常組、EB病毒DNA陽(yáng)性非鼻咽癌組、鼻咽癌組的構(gòu)成比分別為37.27%、5.45%、57.28%，鼻咽癌組EB病毒DNA陽(yáng)性為100.00%。A組組織對(duì)應(yīng)患者的疾病復(fù)發(fā)率為31.25%，較B組的6.45%高（P<0.05），生存率為75.00%，較B組的96.77%低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.795、4.186，P=0.029、0.041<0.05）。結(jié)論EB病毒DNA和ABCG2的陽(yáng)性表達(dá)均為鼻咽癌發(fā)病和預(yù)后變差的促進(jìn)因素，兩者聯(lián)合檢測(cè)可用于鼻咽癌的早期診斷和預(yù)后評(píng)估。

[關(guān)鍵詞] 鼻咽癌；EB病毒DNA；ABCG2；發(fā)??；早期診斷；預(yù)后評(píng)估

[中圖分類(lèi)號(hào)] R739.63 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2019）03（c）-0004-03

[Abstract] Objective To investigate the clinical significance of combined detection of Epstein-Barr virus DNA and ABCG2 （breast resistance protein） in the pathogenesis and prognosis of nasopharyngeal carcinoma. Methods 110 patients with nasopharyngeal neoplasms admitted to our department from July 2016 to December 2017 were convenient selected and enrolled. All patients underwent endoscopic nasopharyngeal tissue collection and sent to the laboratory for EBV DNA quantitative PCR. According to the test results， there were 41 cases in the normal group， 6 cases in the EB virus DNA positive non-nasopharynx cancer group and 63 cases in the nasopharyngeal carcinoma group. The nasopharyngeal carcinoma tissues were sent to the pathology department for ABCG2 immunohistochemical analysis， and the Epstein-Barr virus DNA was in situ hybridized. The ABCG2 positive cancer tissues were set to 32 cases in group A， and the ABCG2 negative cancer tissues were set to 31 cases in group B. The disease recurrence rate and survival rate of the corresponding groups were compared. Results The total nasopharyngeal tissues of 110 patients were collected. The composition ratios of normal group， EBV DNA positive non-nasopharynx cancer group and nasopharyngeal carcinoma group were 37.27%， 5.45% and 57.28%， respectively. The EB virus DNA positive in the nasopharyngeal carcinoma group was 100.00%.The recurrence rate of disease in group A was 31.25%， which was higher than group B 6.45% （P<0.05）， and the survival rate was 75.00%， which was lower than group B 96.77%，The difference was statistically significant （χ2=4.795， 4.186， P=0.029， 0.041<0.05）. Conclusion The positive expression of Epstein-Barr virus DNA and ABCG2 are the promising factors for the worsening of the pathogenesis and prognosis of nasopharyngeal carcinoma. The combined detection can be used for the early diagnosis and prognosis evaluation of nasopharyngeal carcinoma.

[Key words] Nasopharyngeal carcinoma； EB virus DNA； ABCG2； Onset； Early diagnosis； Prognosis evaluation

本課題組前期研究結(jié)果已經(jīng)證實(shí)，EB病毒DNA在鼻咽癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率較高，但也有小部分非鼻咽癌患者鼻咽組織中的EB病毒DNA呈陽(yáng)性表達(dá)[1-3]。ABCG2陽(yáng)性表達(dá)與鼻咽癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期均密切相關(guān)。結(jié)合已有的上述研究基礎(chǔ)，方便選取該院2016年7月—2017年12月收治的110例鼻咽腫瘤疾病患者作為研究對(duì)象，以探討EB病毒DNA和ABCG2聯(lián)合檢測(cè)對(duì)鼻咽癌發(fā)病和預(yù)后的臨床意義，旨在為鼻咽癌的早期診斷和預(yù)后評(píng)估提供參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取該院收治的110例鼻咽腫瘤疾病患者作為研究對(duì)象。該組患者中，男59例，女51例，年齡32～70歲，平均年齡（50.19±4.07）歲，其中鼻咽良性腫瘤患者47例，鼻咽癌患者63例。根據(jù)EB病毒DNA熒光定量PCR檢查結(jié)果將110例患者分為正常組41例、EB病毒DNA陽(yáng)性非鼻咽癌組6例、鼻咽癌組63例，其中正常組男20例，女21例，年齡30～73歲，平均（50.21±3.97）歲。EB病毒DNA陽(yáng)性非鼻咽癌組男4例，女2例，年齡29～70歲，平均（50.17±4.04）歲。鼻咽癌組男35例，女28例，年齡29～72歲，平均（50.19±4.02）歲。3組患者一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。將鼻咽癌組織送病理科進(jìn)行ABCG2免疫組化分析，對(duì)EB病毒DNA進(jìn)行原位雜交。將ABCG2陽(yáng)性癌組織設(shè)為A組32例，將ABCG2陰性癌組織設(shè)為B組31例，該研究在通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核、獲取研究對(duì)象及其家屬知情、同意后實(shí)施。

1.2 方法

鼻內(nèi)鏡下采集研究對(duì)象鼻咽組織，送檢驗(yàn)科進(jìn)行EB病毒DNA熒光定量PCR檢查，陰性對(duì)照為雙蒸水，陽(yáng)性對(duì)照為合成的DNA片段，反應(yīng)條件：95℃，預(yù)變性，10 min；92℃，30 s；72℃，延伸，30 s，共40個(gè)循環(huán)。EB病毒DNA陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)[4]：拷貝數(shù)≥1×103copy/mL。

根據(jù)EB病毒DNA熒光定量PCR檢查結(jié)果將110例患者分為正常組、EB病毒DNA陽(yáng)性非鼻咽癌組、鼻咽癌組。將鼻咽癌組織送病理科進(jìn)行ABCG2免疫組化分析，主要步驟為：組織脫水，石蠟包埋，連續(xù)切為厚度為4 μm的切片，二甲苯及乙醇脫蠟、水化后，枸櫞酸緩沖液（pH 6.0）進(jìn)行抗原熱修復(fù)，滴加一抗、二抗，DBA顯色，蘇木精復(fù)染，脫水、透明、中性樹(shù)膠封片，在高倍鏡下觀察。ABCG2陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)[5]：高倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野觀察，細(xì)胞膜呈黃色或棕黃色、褐色為陽(yáng)性細(xì)胞，陽(yáng)性細(xì)胞比例>10%判定ABCG2為陽(yáng)性。對(duì)EB病毒DNA進(jìn)行原位雜交。將ABCG2陽(yáng)性癌組織設(shè)為A組，將ABCG2陰性癌組織設(shè)為B組，比較兩組組織對(duì)應(yīng)患者的疾病復(fù)發(fā)率和生存率。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

研究數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理應(yīng)用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，計(jì)數(shù)資料采用[n（%）]描述，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 110例鼻咽疾病患者鼻咽組織的EB病毒DNA檢出情況

110患者中，正常組（EB病毒DNA陰性非鼻咽癌）共41例，所占比例為37.27%，EB病毒DNA陽(yáng)性非鼻咽癌組共6例，所占比例為5.45%，鼻咽癌組共63例，病理組織EB病毒DNA陽(yáng)性率為100.00%，所占比例為57.28%。

2.2 兩組患者隨訪期間的疾病復(fù)發(fā)率、生存率比較

鼻咽癌組中，病理組織ABCG2陽(yáng)性患者共32例，病理組織ABCG2陰性患者共31例，均接受放療+手術(shù)+化療，術(shù)后平均隨訪時(shí)間（8.12±0.96）個(gè)月。A組隨訪期間的疾病復(fù)發(fā)率較B組高（P<0.05），生存率較B組低（P<0.05），見(jiàn)表1。

3 討論

鼻咽癌為發(fā)生在鼻咽腔側(cè)壁或頂部的惡性腫瘤，具有預(yù)后不佳的特點(diǎn)。我國(guó)為鼻咽癌的高發(fā)國(guó)家，且近年來(lái)人群的鼻咽癌發(fā)病形勢(shì)仍呈現(xiàn)出不斷嚴(yán)峻的趨勢(shì)[6]。因此，探索能夠輔助該疾病早期診斷和預(yù)后評(píng)估的客觀指標(biāo)具有重要意義[7]。早期提出的腫瘤干細(xì)胞學(xué)說(shuō)認(rèn)為腫瘤組織內(nèi)有一小群細(xì)胞與干細(xì)胞具有類(lèi)似的廣泛增殖、自我更新及分化潛能等特性，并能表達(dá)于某些正常干細(xì)胞相同的標(biāo)記蛋白[8-9]?，F(xiàn)階段研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤干細(xì)胞的細(xì)胞膜上多有ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白表達(dá)，其中ABCG2參與異外源性物質(zhì)新陳代謝的第三階段，被認(rèn)為是代謝物排出的“泵”，也是腫瘤干細(xì)胞亞群細(xì)胞的分選標(biāo)志，與細(xì)胞增殖密切相關(guān)[10-11]。

該課題組早期研究結(jié)果顯示，鼻咽癌組織的ABCG2陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)58%，且與鼻咽癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，EB病毒DNA在鼻咽癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)100%。該研究主要探討EB病毒DNA和ABCG2聯(lián)合檢測(cè)對(duì)鼻咽癌發(fā)病和預(yù)后的臨床意義。研究?jī)?nèi)容共分為兩部分，第一部分為分析鼻咽疾病患者鼻咽組織的EB病毒DNA檢出情況，結(jié)果顯示小部分非鼻咽癌患者的鼻咽組織中EB病毒DNA也呈陽(yáng)性表達(dá)，正常組、EB病毒DNA陽(yáng)性非鼻咽癌組、鼻咽癌組的構(gòu)成比分別為37.27%、5.45%、57.28%，鼻咽癌組EB病毒DNA陽(yáng)性為100.00%，與早期研究結(jié)果基本保持一致，表明鼻咽組織EB病毒DNA陽(yáng)性為鼻咽癌發(fā)生的危險(xiǎn)因素。第二部分為根據(jù)ABCG2免疫組化檢測(cè)結(jié)果對(duì)EB病毒DNA陽(yáng)性鼻咽癌組織進(jìn)行分組，分為ABCG2陽(yáng)性（A組）、陰性（B組），比較ABCG2陽(yáng)性（A組）、陰性（B組）鼻咽癌組織患者的預(yù)后情況，分析兩者聯(lián)合檢測(cè)的作用，結(jié)果顯示A組組織對(duì)應(yīng)患者的疾病復(fù)發(fā)率為31.25%，較B組的6.45%高，生存率為75.00%，較B組的96.77%低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），表明ABCG2陽(yáng)性表達(dá)可導(dǎo)致鼻咽癌患者預(yù)后變差。這與葉倩等人[12]在相關(guān)研究中得出，根據(jù)ABCG2免疫組化檢測(cè)結(jié)果對(duì)EB病毒DNA陽(yáng)性鼻咽癌組織分組后，ABCG2陽(yáng)性對(duì)應(yīng)患者的疾病復(fù)發(fā)率為29.12%，生存率為78.43%，其疾病復(fù)發(fā)率高于ABCG2陰性，生存率低于ABCG2陰性，與該文所得結(jié)論一致，具有臨床意義。

綜上所述，該研究得出EB病毒DNA和ABCG2的陽(yáng)性表達(dá)均為鼻咽癌發(fā)病和預(yù)后變差的促進(jìn)因素，兩者聯(lián)合檢測(cè)可用于鼻咽癌的早期診斷和預(yù)后評(píng)估。但由于現(xiàn)階段國(guó)內(nèi)外尚無(wú)較多相關(guān)研究報(bào)道，且該次研究選取的樣本量較小。因此，所得研究結(jié)果的客觀性還有待日后開(kāi)展更多實(shí)踐研究進(jìn)行檢驗(yàn)。

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（收稿日期：2019-01-03）