貴陽市食品藥品檢驗檢測中心，貴州 貴陽 550081

艷山姜Alpiniazerumbet(Pert)Burtt et.Smith為姜科山姜屬植物艷山姜的藥用植物，生于海拔400～650 m的林中蔭處[1]，別名玉桃、草扣、大良姜、大草蔻、土砂仁[2]，是貴州省少數(shù)民族地區(qū)的傳統(tǒng)習(xí)用藥物，廣泛分布于我國東南部至西南部各地。最早記載于《廣州常見經(jīng)濟(jì)植物》，收錄于《全國中草藥匯編》《中華本草》和2003版《貴州省中藥、民族藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中，以新鮮或者干燥成熟果實入藥，具有溫中燥濕、行氣止痛、截瘧等功效，主治心腹冷痛，胸腹脹滿，消化不良，嘔吐腹瀉，瘧疾[3]等病癥?，F(xiàn)代藥理研究艷山姜具有抗炎鎮(zhèn)痛[4]、抗氧化、抗菌、殺蟲驅(qū)蟲、抗動脈粥樣硬化[5]、抗胃及十二指腸潰瘍[6]等作用。

艷山姜與砂仁、草豆蔻及同科同屬的藥用植物等易于混淆，導(dǎo)致藥材出現(xiàn)互用的現(xiàn)象?，F(xiàn)對艷山姜的基源、藥材性狀、分果橫切面和粉末的顯微鑒別特征進(jìn)行生藥學(xué)研究，旨在建立艷山姜的真?zhèn)舞b別方法，并為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂奠定研究基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 材料 實驗用艷山姜采集于貴州貞豐、羅甸等地，經(jīng)貴州中醫(yī)藥大學(xué)魏升華教授鑒定為姜科植物艷山姜Alpiniazerumbet(Pert)Burtt et.Smith的干燥成熟果實。

1.2 儀器 Leica DM2500光學(xué)生物顯微鏡和Leica S60立體顯微鏡(德國Leica Microsystems)；Leica RM2245半自動輪轉(zhuǎn)切片機(jī)(德國Leica Biosystems)。

1.3 試劑試藥 無水乙醇、乙醇、二甲苯、番紅、固綠等。

2 方法

2.1 基原鑒定 通過對采集地原植物形態(tài)進(jìn)行觀察、測量和拍攝記錄，采集原植物標(biāo)本制作成蠟葉標(biāo)本，核對艷山姜在《中國植物志》和《貴州植物志》中植物形態(tài)的描述，對其進(jìn)行原植物鑒定，描述其植物形態(tài)特征。

2.2 性狀鑒別 使用游標(biāo)卡尺測量艷山姜果實和種子的長度、直徑，采用肉眼、嗅覺和Leica S60立體顯微鏡觀察艷山姜的形狀、大小、顏色、表面特征、質(zhì)地、斷面、氣味等。

2.3 顯微鑒別 采用石蠟切片法[7]研究艷山姜的顯微結(jié)構(gòu)。取成熟的艷山姜果皮和種子在溫水中浸泡24～48 h，然后放入70%FAA固定液(70%的乙醇90 mL，冰醋酸5 mL，37%甲醛5 mL)中固定24 h，依次在不同濃度的乙醇中逐級脫水，乙醇濃度按順序依次為70%、80%、90%、95%、100%、100%，每次1 h。脫水后先用無水乙醇-二甲苯(1∶1)浸泡1 h；再用二甲苯浸泡1 h，反復(fù)2次至種子透明。透明后的材料置于65 ℃恒溫箱中浸蠟，每隔30 min加固體石蠟1次，反復(fù)3次，后置換成純石蠟后在恒溫箱中放置6 h，使石蠟充分浸入種子中。包埋后修塊、切片，片厚度18 μm。切好的蠟片在展片臺上展開、貼片，再置50 ℃烘箱中烘干。在二甲苯中脫蠟，乙醇復(fù)水后番紅染色1h左右，60%、70%、80%、90%的乙醇逐級脫水后，入固綠溶液中染色2 min，脫水后二甲苯透明封片。采用Leica DM2500光學(xué)生物顯微鏡觀察、拍照記錄艷山姜的果皮、種皮、胚、胚乳等顯微結(jié)構(gòu)，圖片均用Leica LAS V4.3顯像系統(tǒng)處理。

3 結(jié)果

3.1 植物形態(tài)特征 多年生常綠草本，株高1～2 m。葉片披針形，長30～60 cm，寬 5～10 cm，頂端漸尖而有一旋卷的小尖頭，基部漸狹，邊緣具短柔毛，兩面均無毛；葉柄長1～1.5 cm；葉舌長5～10 mm，外被毛。圓錐花序呈總狀花序式，下垂，長達(dá)30 cm，花序軸紫紅色，被絨毛，分枝極短，在每一分枝上有花1～2(3)朵；小苞片橢圓形，長3～3.5 cm，白色，頂端粉紅色，蕾時包裹住花，無毛；小花梗極短；花萼近鐘形，長約2 cm，白色，頂粉紅色，一側(cè)開裂，頂端又齒裂；花冠管較花萼為短，裂片長圓形，長約3 cm，后方的1枚較大，乳白色，頂端粉紅色；側(cè)生退化雄蕊鉆狀，長約2 mm；唇瓣匙狀寬卵形，長4～6 cm，頂端鄒波狀，黃色而有紫紅色紋彩；雌蕊長約2.5 mm；子房被金黃色粗毛；腺體長約2.5 mm。蒴果卵圓形，直徑約2 cm，被稀疏的粗毛，具顯露的條紋，頂端常冠以宿萼，熟時朱紅色；種子有棱角?；ㄆ冢?～6月；果期；7～10月[1-8]。如圖1所示。

3.2 性狀特征 呈橢圓形、卵圓形或球形，兩端略尖，長約2～3 cm，直徑1～2 cm，表面黃棕色，略有光澤，有十?dāng)?shù)條隆起的縱棱，頂端具一突起，為花被殘基，基部有的具果柄斷痕。果皮質(zhì)較脆，易縱向撕裂。剝?nèi)ネ馄ぃ杏邪咨裟?，將種子團(tuán)分成3瓣，每瓣有種子4～15粒，排列疏松，易散落。種子為圓錐狀多面體，長4～5 mm，直徑3～4 mm，表面棕褐色，外被白色膜質(zhì)假種皮，種脊為一條縱溝，一端有凹狀種臍；質(zhì)硬，將種子沿種脊縱剖兩瓣，縱斷面觀呈斜心形，種皮沿種脊向內(nèi)伸入部分約占整個表面積的1/2；胚乳灰白色。氣香，味辛、微苦。如圖2所示。

3.3 顯微特征

3.3.1 果皮橫切面 類“齒輪”型。外果皮為1列扁平細(xì)胞，外被角質(zhì)層，可見非腺毛基部鑲嵌在扁平細(xì)胞中，其下為1列類方形石細(xì)胞。中果皮寬廣，其中為薄壁細(xì)胞，內(nèi)含有草酸鈣方晶；在每個小“齒輪”中部靠上或靠近內(nèi)果皮處散有維管束。內(nèi)果皮為1列扁平的薄壁細(xì)胞，易破碎。如圖3所示。

3.3.2 種子橫切面 呈類圓形。假種皮有時殘存，為長方形或類方形薄壁細(xì)胞；種皮表皮細(xì)胞1列，類方形，壁較厚；表皮下為2～3列切向延長的薄壁細(xì)胞；色素層為數(shù)列棕色細(xì)胞，形態(tài)不一，其間散有類圓形油細(xì)胞2～3列；內(nèi)種皮為1列柵狀細(xì)胞，棕紅色，內(nèi)壁與側(cè)壁極厚，胞腔小，內(nèi)含類圓形硅質(zhì)塊。外胚乳細(xì)胞含淀粉粒和草酸鈣方晶。內(nèi)胚乳細(xì)胞含糊粉粒。如圖4所示。

3.3.3 粉末特征 粉末灰棕色。果皮石細(xì)胞類圓形或不規(guī)則多角形，偶見長條形，單個或成群，直徑12～38 μm，長18～72 μm，壁甚厚，胞腔狹小，孔溝明顯，具層紋；可見螺紋導(dǎo)管；非腺毛單細(xì)胞或多細(xì)胞，基部膨大含棕色物，常斷裂。種皮表皮細(xì)胞表面觀呈多角形，直徑約10～30 μm，壁稍厚，常與下皮細(xì)胞上下層垂直排列；下皮為1～3列薄壁細(xì)胞，略切向延長；色素層細(xì)胞皺縮，界限不清楚，含紅棕色物，易碎裂成不規(guī)則色素塊；油細(xì)胞散生于色素層細(xì)胞間，呈類圓形或長圓形，含黃色油狀物；內(nèi)種皮厚壁細(xì)胞黃棕色或紅棕色，表面觀多角形，直徑約9～24 μm，壁厚，非木化，胞腔內(nèi)含硅質(zhì)塊。外胚乳細(xì)胞充滿淀粉粒集結(jié)成的淀粉團(tuán)，常破裂，淀粉團(tuán)散落在外，呈橢圓形或圓型，含細(xì)小草酸鈣方晶。如圖5所示。

4 討論

通過比較研究，艷山姜有以下鑒別要點：①植物形態(tài)上：艷山姜和草豆蔻的植物形態(tài)相似，葉片均為披針形，頂端漸尖，總狀花序，具小苞片，花萼鐘狀，唇瓣卵形，果實球形；不同點在于艷山姜花序下垂，花序軸紫紅色，唇瓣頂端黃色具有紫紅色紋彩，果實表面被稀疏的粗毛、有棱角。②性狀鑒別上，其果皮表面黃棕色，有十?dāng)?shù)條隆起的縱棱，而砂仁中的陽春砂和綠殼砂有不明顯三棱，表面棕褐色，密生刺狀突起[9]；艷山姜種子團(tuán)比草豆蔻連接緊密，略光滑[9]的種子團(tuán)較疏松，易散落。③組織構(gòu)造上，姜科藥材的種子均是由種皮表皮、色素層、油細(xì)胞層、內(nèi)種皮細(xì)胞以及胚乳細(xì)胞構(gòu)成，不同點主要為艷山姜種子的油細(xì)胞散生于色素層細(xì)胞間，陽春砂和草果的油細(xì)胞層為單獨1列油細(xì)胞[9]。④粉末顯微上：艷山姜的種皮表皮細(xì)胞表面觀呈多角形，而草豆蔻種皮表皮細(xì)胞表面觀呈長條形[9]。⑤質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)上，相對2003年版《貴州省中藥、民族藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中艷山姜的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[3]而言，增加了果皮的石細(xì)胞、螺紋導(dǎo)管、非腺毛和薄壁細(xì)胞的草酸鈣方晶；完善了種子的種皮表皮細(xì)胞形狀，大小，油細(xì)胞與色素層細(xì)胞的排列關(guān)系，內(nèi)含物顏色，內(nèi)種皮細(xì)胞顏色以及胚乳細(xì)胞所含淀粉團(tuán)形狀和草酸鈣方晶等鑒別要點。