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GC法測(cè)定牛黃上清丸中冰片的含量

2019-06-19 07:39王學(xué)濤王曉云
食品與藥品 2019年3期
關(guān)鍵詞:龍腦樟腦牛黃

龐 靜,王學(xué)濤,王 健,王 昱,王曉云*

(1.秦皇島市食品藥品檢驗(yàn)中心,河北 秦皇島 066000;2.秦皇島市藥品不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)中心,河北 秦皇島 066000)

牛黃上清丸為甲類(lèi)OTC藥物,1977至2015年版《中國(guó)藥典》均有收載,處方來(lái)源于明代李梃《醫(yī)學(xué)入門(mén)》牛黃上清丸加減方,處方由人工牛黃、薄荷、菊花、荊芥穗、白芷、川芎、梔子、黃連、黃柏、黃芩、大黃、連翹、赤芍、當(dāng)歸、地黃、桔梗、甘草、石膏、冰片十九味藥組成,具有清熱瀉火,散風(fēng)止痛的功效。用于熱毒內(nèi)盛、風(fēng)火上攻所致的頭痛眩暈、目赤耳鳴、咽喉腫痛、口舌生瘡、牙齦腫痛、大便燥結(jié)[1-2]。

方中冰片為傳統(tǒng)常用中藥,首載于《新修本草》,具有開(kāi)竅醒神,清熱止痛的功效,在方中為佐藥[2]。冰片來(lái)源較為復(fù)雜,成分亦有所不同,為龍腦香科植物龍腦香樹(shù)脂的加工品或?yàn)檎聊X、松節(jié)油等用化學(xué)方法合成的加工制成品[3],前者稱(chēng)為天然冰片,后者稱(chēng)為合成冰片。天然冰片的成分幾乎為純粹的右旋龍腦,而合成冰片中同時(shí)含有龍腦與異龍腦,是現(xiàn)階段商品冰片的主要來(lái)源[4-5]。牛黃上清丸現(xiàn)執(zhí)行2015年版《中國(guó)藥典》(一部)標(biāo)準(zhǔn),標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)冰片含量控制項(xiàng),為保證原藥材質(zhì)量,保證制劑成品質(zhì)量穩(wěn)定,有效控制臨床療效,在現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道的基礎(chǔ)上[5-9],本文采用氣相色譜法測(cè)定牛黃上清丸中龍腦和異龍腦的含量,以其總和計(jì)算冰片的含量,同時(shí)測(cè)定了冰片中樟腦的含量,并對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了分析與探討,為制訂完善的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 7890A氣相色譜儀、FID檢測(cè)器(美國(guó)安捷倫公司),AG-135型十萬(wàn)分之一電子天平(Mettler Toledo),DL-1028H型超聲波清洗器(Bandelin)。

1.2 試藥

龍腦對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)110881-201107,含量99.3 %)、異龍腦對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào)111512-200802,含量97.5 %)、樟腦對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào):110747-201008,含量:99.0 %);牛黃上清丸樣品(均為大蜜丸)由1~9藥廠提供;無(wú)水乙醇為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Agilent DB-FFAP(30 m×0.320 mm,0.25 μm);柱溫:120 ℃;進(jìn)樣口溫度:160 ℃;柱流量:1.0 ml/min;進(jìn)樣方式:分流進(jìn)樣;進(jìn)樣量:1 μl;分流比:10:1;載氣:高純氮?dú)?;檢測(cè)器:FID檢測(cè)器;檢測(cè)器溫度:200 ℃;氮?dú)猓簹錃猓嚎諝猓?:1:10)。

2.2 溶液的制備

2.2.1 混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取龍腦對(duì)照品37.53 mg,置25 ml量瓶中,加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得龍腦對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密稱(chēng)取異龍腦對(duì)照品25.37 mg,置25 ml量瓶中,加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得異龍腦對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密稱(chēng)取樟腦對(duì)照品10.15 mg,置100 ml量瓶中,加無(wú)水乙醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,即得樟腦對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取5 ml龍腦對(duì)照品儲(chǔ)備液、5 ml異龍腦對(duì)照品儲(chǔ)備液和1 ml樟腦對(duì)照品儲(chǔ)備液,置50 ml量瓶中,加無(wú)水乙醇稀釋至刻度,搖勻,即得149.069 μg/ml龍腦、98.943 μg/ml異龍腦和2.010 μg/ml樟腦的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 取牛黃上清丸適量,剪碎,混勻,取約1 g,精密稱(chēng)定,置具塞錐形瓶中,精密加入無(wú)水乙醇25 ml,密塞,稱(chēng)定重量,放置過(guò)夜,超聲處理(功率1200 W,頻率25 kHz)30 min,取出,放冷,再稱(chēng)定重量,用無(wú)水乙醇補(bǔ)足減失的重量,搖勻,用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

圖1 HPLC色譜圖

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按牛黃上清丸處方比例及制備工藝,取冰片以外的18味中藥材適量,按照質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]中[制法]項(xiàng)依法操作,制成大蜜丸,并按2.2.2項(xiàng)下方法制備陰性樣品溶液。

2.3 專(zhuān)屬性試驗(yàn)

取2.2項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液,按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜圖,見(jiàn)圖1。結(jié)果表明,供試品溶液的色譜圖中,在與混合對(duì)照品溶液的色譜圖相應(yīng)的位置上,有相同保留時(shí)間的色譜峰,且3種成分與相鄰共存成分均可達(dá)到基線(xiàn)分離(R≥1.5);而陰性樣品溶液在此保留時(shí)間處無(wú)干擾。

2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察

分別精密量取2.2.1項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液0.5,1.0,2.5,5.0,7.5,10.0 ml,置10 ml量瓶中,加無(wú)水乙醇稀釋至刻度,搖勻,即得不同濃度系列的對(duì)照品溶液,按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣,測(cè)定峰面積。分別以龍腦、異龍腦及樟腦的濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)(X),以其各自的峰面積為縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),得回歸方程:龍腦Y=25.0049X-1.5701(r=1.0000);異龍腦Y=24.0310X-1.7772(r=1.0000);樟腦Y=22.97052X+0.63483(r=0.9991)。結(jié)果表明,龍腦、異龍腦、樟腦分別在7.453~149.069 μg/ml、4.947~98.943 μg/ml、0.100~2.010 μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取2.2.1項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液5.0 ml,置于10 ml量瓶中,加無(wú)水乙醇稀釋至刻度,搖勻,按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,測(cè)得龍腦、異龍腦、樟腦峰面積的RSD分別為0.72 %,0.65 %,0.80 %(n=6)。結(jié)果表明,儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取2.2.2項(xiàng)下制備的供試品溶液,按2.1項(xiàng)下色譜條件,分別于配制后在室溫下放置0,4,12,24,30 h各精密吸取1 μl進(jìn)樣測(cè)定,測(cè)得龍腦、異龍腦、樟腦峰面積的RSD分別為0.92 %,1.10 %,1.10 %(n=5)。結(jié)果表明,供試品溶液在30 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同批號(hào)(批號(hào):15015669)的樣品6份,精密稱(chēng)定,按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定,測(cè)得龍腦、異龍腦、樟腦的平均含量分別為2.7380,2.1540,0.01356 mg/g,RSD分別為1.07 %,0.98 %,1.08 %(n=6)。結(jié)果表明,方法重復(fù)性良好。

表1 加樣回收率測(cè)定結(jié)果

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量(龍腦2.7380 mg/g、異龍腦2.1540 mg/g、樟腦0.01356 mg/g)的牛黃上清丸(批號(hào)為15015669)9份,每份約0.5 g,精密稱(chēng)定,置具塞錐形瓶中,制備3個(gè)濃度的供試品溶液,每個(gè)濃度平行制備3份,分別按供試品含量的50 %,100 %,150 %精密加入按2.2.1項(xiàng)下方法配制的混合對(duì)照品溶液(龍腦1.3008 mg/ml、異龍腦1.0023 mg/ml、樟腦6.116 μg/ml)0.5,1.0,1.5 ml,按2.2.2項(xiàng)下方法自“精密加入無(wú)水乙醇25 ml,……”起,制備供試品溶液,按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,測(cè)得龍腦、異龍腦、樟腦的平均回收率分別為100.34 %,98.13 %,98.49 %,RSD分別為1.15 %,1.01 %,0.80 %(n=9)。結(jié)果表明,本方法回收率較好。

2.9 樣品含量測(cè)定

取9個(gè)廠家樣品,分別按2.2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液,再按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄峰面積并計(jì)算樣品含量,結(jié)果見(jiàn)表2

表2 牛黃上清丸的含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 檢測(cè)指標(biāo)的選擇

天然冰片中主要含右旋龍腦;合成龍腦中,以樟腦的還原反應(yīng)得到的合成冰片,異龍腦和樟腦含量均較高;而以松香油中α-蒎烯為原料經(jīng)酯化、水解得到的合成冰片,含有較多的左旋龍腦和較少的右旋龍腦[10]。由于冰片來(lái)源復(fù)雜,藥物制劑中冰片通常為合成品,在生產(chǎn)過(guò)程中有異龍腦生成,用氣相色譜分析為龍腦和異龍腦兩個(gè)峰,又經(jīng)查閱文獻(xiàn),2015年版《中國(guó)藥典》(一部)牛黃解毒軟膠囊[1]含量測(cè)定項(xiàng)下及付萍萍等的《氣相色譜法測(cè)定醋酸氟輕松冰片乳膏中冰片含量》[8]、林染等的《氣相色譜法測(cè)定田七痛經(jīng)膠囊中冰片含量》中均以龍腦與異龍腦總量來(lái)計(jì)算冰片的含量,本文最終選擇以龍腦與異龍腦總量來(lái)計(jì)算冰片的含量,以控制冰片的質(zhì)量。另有報(bào)道稱(chēng),樟腦的成分具有一定的毒性,對(duì)嬰幼兒的影響最為嚴(yán)重[11],因此同時(shí)測(cè)定了冰片中樟腦的含量,但沒(méi)有制定樟腦的限量,可為制定牛黃上清丸中樟腦的限量檢查方法提供參考。

3.2 提取時(shí)間的選擇

在供試品溶液制備試驗(yàn)中分別以超聲20 min、30 min、40 min進(jìn)行提取時(shí)間的篩選,經(jīng)考察龍腦、異龍腦、樟腦的含量無(wú)明顯差異,最終綜合考慮到提取率和操作簡(jiǎn)便,確定提取時(shí)間為30 min。

3.3 檢驗(yàn)結(jié)果分析及建議

在含量測(cè)定中發(fā)現(xiàn),所有檢驗(yàn)結(jié)果中均存在異龍腦、樟腦,說(shuō)明所搜集的牛黃上清丸中使用的冰片均為合成冰片;有2個(gè)廠家冰片含量較低,可能與原藥材的質(zhì)量差異有關(guān),故對(duì)牛黃上清丸中冰片的含量進(jìn)行測(cè)定是非常有必要的。

綜上所述,本方法操作簡(jiǎn)單、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性良好,可用于牛黃上清丸中冰片的質(zhì)量控制,并可為冰片中樟腦的相關(guān)檢查及限度制定提供參考。

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