吳 潔， 田亞麗， 伍宏宇， 張之

(新疆醫(yī)科大學1藥學院； 2臨床醫(yī)學16-4班, 烏魯木齊 830011)

酒精性肝病(alcoholic 1iver disease，ALD)是由于過量酒精攝入導致的肝臟損害及其一系列病變,初期表現(xiàn)為酒精性脂肪肝，后期可發(fā)展為酒精性肝炎、肝硬化甚至肝癌[1]。西藥治療酒精性肝病以對癥治療為主，療效甚微，不良反應(yīng)較多[2]，而中藥及中成藥類解酒藥一方面具有疏肝理氣、健脾消食、降低轉(zhuǎn)氨酶及加快乙醇代謝的功效，另一方面對酒精造成的肝細胞損傷還具有一定的修復(fù)作用，可有效減輕酒精代謝物對臟器的損害[3-4]。包葛顆粒劑由包爾胡特和葛根制成，包爾胡特(RhamnuscatharticaL.)為鼠李科鼠李屬植物新疆鼠李的果實，主要生長于新疆伊犁地區(qū)[5]。本課題組前期有研究表明[6-7]，包爾胡特提取物對高脂血癥大鼠具有降血脂作用，能夠增強機體自由基清除能力和抗脂質(zhì)過氧化能力，從而改善氧化應(yīng)激反應(yīng)對肝臟的損傷，保護肝細胞的結(jié)構(gòu)和功能，發(fā)揮對急性酒精性肝損傷的治療作用。葛根(Puerarialobata)為豆科葛屬多年生的落葉藤本植物甘葛或野葛藤的干燥根，在我國大部地區(qū)均有生長，主產(chǎn)于河南、湖南、浙江、四川等地，具有一定的解酒護肝功效[8-10]。已有研究表明，葛根素可以預(yù)防大鼠急性酒精性肝損傷[11]，對肝臟具有保護作用[12]。本研究采用小鼠急性酒精性肝損傷模型，研究包葛顆粒劑對小鼠醉酒的預(yù)防作用和對急性酒精性肝損傷的保護作用，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 動物取雄性昆明種小鼠40 只，6～8周齡，清潔級，體質(zhì)量(20±2)g，購買于新疆醫(yī)科大學動物實驗中心。飼養(yǎng)于溫度22～25℃、濕度50%～80%環(huán)境，自由進食。

1.2 儀器CF-1型勻漿機(北京格瑞德曼儀器設(shè)備有限公司)，MULTIFUGE X3R型離心機(烏魯木齊鵬程達商貿(mào)有限公司)，1510型酶標儀(賽默飛世爾上海儀器有限公司)。

1.3 試藥包葛顆粒劑自制，水飛薊賓膠囊(天津天士力圣特制藥有限公司，批號：600709125)，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Alanine aminotransferase，ALT，南京建成生物工程研究所，批號：20180630),天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Aspartate aminotransferase，AST，南京建成生物工程研究所，批號：20180630)；紅星二鍋頭白酒(北京紅星二鍋頭股份有限公司，批號：02-2AQ8-75)。

1.4 分組和給藥方法[13]將40只小鼠隨機分為包葛顆粒劑低、高劑量組(2.4、4.8 g/kg體質(zhì)量)，陽性對照組(水飛薊賓47 mg/kg體質(zhì)量)，酒精肝損傷模型組(蒸餾水 0.1 mL/10 g體質(zhì)量)和空白對照組(蒸餾水 0.1 mL/10 g體質(zhì)量)，每組8只。各組小鼠均灌胃相應(yīng)藥物，給藥2 h后，除空白對照組灌胃蒸餾水，其他各組小鼠灌胃白酒(紅星二鍋頭12 mL/kg體質(zhì)量)，每天1次，連續(xù)7 d，制備急性酒精性肝損傷模型。

1.5 觀察指標觀察各實驗組小鼠灌酒后從醉酒至醒酒的狀況，分為醉酒潛伏期、醉酒期和醉酒睡眠期。醉酒潛伏期：從灌酒后小鼠出現(xiàn)爬行不穩(wěn)至睡著的時間，小鼠翻正反射消失(以將小鼠背部朝下輕放在光滑的桌面上，保持背部向下的姿勢30 s以上)，翻正反射消失為醉酒期開始，以翻正反射出現(xiàn)為醉酒期結(jié)束(醒酒時間)。醉酒期：翻正反射消失和翻正反射出現(xiàn)之間的時間。醉酒睡眠期：從小鼠睡著到睜眼醒來的時間。

1.6 指標測定

1.6.1 小鼠處理及肝指數(shù)計算 第7天禁食不禁水，稱取體質(zhì)量，給酒6 h后小鼠麻醉后頸椎脫臼處死，取肝臟，在生理鹽水中進行洗滌并用濾紙吸干多余水分，稱取肝重，計算肝指數(shù)/%=肝質(zhì)量(g)/體質(zhì)量(g)×100%。

1.6.2 肝功指標檢測 取小鼠肝組織，制成10%肝勻漿，3 000 r/min離心10 min后，取上清液，按試劑盒說明書方法測定小鼠肝組織ALT、AST含量。

1.6.3 肝臟組織病理形態(tài)學觀察 取小鼠肝臟用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋、切片，HE染色，光學顯微鏡下觀察各組小鼠肝臟病理組織學變化并拍照。

2 結(jié)果

2.1 包葛顆粒劑對急性酒精性肝損傷小鼠醉酒指標的影響與酒精肝損傷模型組比較，包葛顆粒劑低、高劑量組小鼠醉酒潛伏期延長，醉酒期和醉酒睡眠期縮短,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；陽性對照組小鼠醉酒睡眠期縮短，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，醉酒潛伏期延長，醉酒期縮短，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與陽性對照組比較，包葛顆粒劑低劑量組小鼠醉酒潛伏期延長，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，醉酒睡眠期和醉酒期縮短，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；包葛顆粒劑高劑量組小鼠醉酒潛伏期延長，醉酒睡眠期縮短，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，醉酒期縮短，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 各組小鼠醉酒實驗結(jié)果比較

注：與酒精肝損傷模型組比較，*P<0.05，**P<0.01； 與陽性對照組比較，△P<0.05，△△P< 0.01。

2.2 包葛顆粒劑對急性酒精性肝損傷小鼠體質(zhì)量、肝重、肝指數(shù)的影響與空白對照組比較，酒精肝損傷模型組小鼠體質(zhì)量降低，肝指數(shù)升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。與酒精肝損傷模型組比較，包葛顆粒劑低、高劑量組小鼠體質(zhì)量升高，肝指數(shù)降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；陽性對照組小鼠肝指數(shù)降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，體質(zhì)量差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。與陽性對照組比較，包葛顆粒劑高劑量組肝指數(shù)下降，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 各組小鼠體質(zhì)量、肝重、肝指數(shù)比較

注：與空白對照組比較，#P<0.05，##P<0.01； 與酒精肝損傷模型組比較，*P<0.05，**P<0.01； 與陽性對照組比較，△P<0.05。

2.3 包葛顆粒劑對急性酒精性肝損傷小鼠肝組織ALT、AST水平的影響與空白對照組比較，酒精肝損傷模型組小鼠ALT、AST含量升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；與酒精肝損傷模型組比較，包葛顆粒劑低、高劑量組ALT、AST含量降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；陽性對照組ALT、AST含量降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。與陽性對照組比較，包葛顆粒劑高劑量組ALT含量降低，AST含量降低，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表3。

表3 各組小鼠肝組織ALT、AST水平比較

注：與空白對照組比較，##P<0.01； 與酒精肝損傷模型組比較，**P<0.01； 與陽性對照組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

2.4 包葛顆粒劑對急性酒精性肝損傷小鼠肝臟病理組織學的影響空白對照組小鼠肝細胞結(jié)構(gòu)正常；酒精肝損傷模型組小鼠肝組織有明顯變化：肝細胞結(jié)構(gòu)紊亂，水腫，脂肪變性明顯，胞質(zhì)疏松不緊密，可見非常多大小不一的脂滴；包葛顆粒劑低劑量組肝組織結(jié)構(gòu)輕度紊亂，有少量小脂滴，包葛顆粒劑高劑量組肝組織結(jié)構(gòu)有一定紊亂，無脂滴出現(xiàn)；陽性對照組肝組織結(jié)構(gòu)紊亂明顯，有一定數(shù)量脂滴；與陽性對照組比較，包葛顆粒劑低、高劑量組肝組織結(jié)構(gòu)和脂肪病變有一定程度減輕，見圖1。

a空白對照組

b酒精肝損傷模型組

c陽性對照組

d 包葛顆粒劑低劑量組

e 包葛顆粒劑高劑量組

圖1 各組小鼠肝組織病理形態(tài)顯微圖(× 200倍)

3 討論

本實驗結(jié)果表明，包葛顆粒劑預(yù)防給藥對小鼠具有防醉作用，能夠有效延長小鼠醉酒潛伏期時間，縮短醉酒期和睡眠期時間，隨著包葛顆粒劑給藥濃度的升高，其醒酒功能也相對提高。ALT和AST是存在于肝臟中重要的轉(zhuǎn)氨酶，肝細胞無論損傷還是壞死，都會使這2種轉(zhuǎn)氨酶的活性升高，因此是臨床上顯示肝臟受損的指標[14-15]。本實驗發(fā)現(xiàn)酒精肝損傷模型組小鼠肝指數(shù)增大，肝組織ALT和AST水平升高，表明小鼠肝細胞嚴重損傷，而包葛顆粒劑低、高劑量對急性酒精性肝損傷小鼠的肝損傷均有一定改善作用，使ALT、AST水平趨向正常。病理結(jié)果顯示，酒精肝損傷模型組小鼠肝細胞水腫，脂肪變性明顯，包葛顆粒劑低、高劑量組肝細胞腫脹和脂肪變性較酒精肝損傷模型組明顯改善。病理切片結(jié)果和各實驗指標結(jié)果一致，表明包葛顆粒劑可以減輕肝細胞損傷，具有保護肝臟功能的作用。與陽性對照組飛薊賓比較，包葛顆粒劑改善小鼠肝細胞損傷、防醉醒酒作用更優(yōu)，但包葛顆粒劑對酒精性肝損傷的保護機制仍不清楚，對其藥效機制有待進一步研究。