孫偉健，于 野

(長(zhǎng)春東方職業(yè)學(xué)院，吉林 長(zhǎng)春 130000)

綠升麻，為毛茛科植物類葉升麻的根莖。具有散風(fēng)熱，祛風(fēng)濕等功效[1]。研究表明黃酮類物質(zhì)具有較強(qiáng)的生理活性，且無(wú)毒無(wú)害，具有抗癌、抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛等作用[2]。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，綠升麻屬植物植株各部分均含有黃酮類化合物，并為本屬植物最主要的化學(xué)成分[3]。采用超聲波法提取綠升麻中的黃酮，因?yàn)樗魇咸崛≈参锏挠行С煞?，操作?jiǎn)便快捷、提取率高、速度快、提取物的結(jié)構(gòu)未被破壞、效果好[4]。大孔吸附樹(shù)脂吸附分離技術(shù)是采用大孔樹(shù)脂從中藥中選擇性吸附目標(biāo)成分、分離其它成分的一種綠色與節(jié)能技術(shù)，具有選擇性好、吸附容量大、再生處理方便、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)[5-6]。本實(shí)驗(yàn)選用AB-8型大孔吸附樹(shù)脂對(duì)提取物進(jìn)行了純化。

1 儀器與材料

SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化學(xué)儀器廠)；Agilent-1100型高效液相色譜儀(美國(guó)Agilent公司)；FA2004電子天平(上海恒平科學(xué)儀器有限公司)；有機(jī)溶劑為國(guó)藥集團(tuán)上海試劑廠產(chǎn)品，其它試劑為分析純。

蘆丁、槲皮素、芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)食品藥品檢定研究院)。

2 提取與分離

稱取90 g綠升麻粉末，甲醇浸泡24 h，溫度40℃，索氏提取4 h，將提取液合并，冷卻，蒸餾，得浸膏3.4838 g。浸膏甲醇溶解，分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到4種萃取物。

采用濕法裝柱，乙醇為洗脫劑。加入1 g浸膏的醇溶液，用30%、40%、45%、70%乙醇梯度洗脫，得粉末狀樣品0.0988 g。

取蘆丁，槲皮素，芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品，精密稱定10 mg，置于10 mL容量瓶中，加入少量甲醇，得對(duì)照品溶液。精密稱取干燥的樣品粉末10 mg，三份，分別置于10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻得待測(cè)溶液。

色譜柱ZORBAX Eclipse XDB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm ID，5 μm)及保護(hù)(12.5 mm×4.6 mm ID，5 μm)流動(dòng)相為色譜級(jí)乙腈和0.4%的磷酸水溶液，比例為13:87；流速1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)327 nm；柱溫25℃；進(jìn)樣量10 μL。根據(jù)色譜條件繪制譜圖。結(jié)果見(jiàn)圖1～3。

分別取配制好的對(duì)照品溶液0.5、0.75、1.0、1.25、1.5mL，分別置于10 mL容量瓶中，以甲醇定容，制成系列混合對(duì)照品溶液。以濃度C為橫坐標(biāo)，峰面積A為縱坐標(biāo)，求出線性回歸方程，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

精密量取蘆丁，槲皮素，芹菜素樣品適量。置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容，濃度分別為1.0、0.5、0.5 mg/mL，取0.2、0.4、0.8、1.6、3.2 mL于10 mL容量瓶中定容，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算黃酮的含量。

3 結(jié)果與討論

3.1 最佳的純化洗脫條件

研究發(fā)現(xiàn)，乙酸乙酯層黃酮的含量最高，三倍量體積的萃取效果最好。使用AB-8型大孔吸附樹(shù)脂純化，用不同濃度的乙醇洗脫黃酮后，70%的乙醇洗脫的黃酮最多。

夫妻倆當(dāng)然也有不同的地方，張?jiān)屎褪恰霸?shī)化的人”，富于傳統(tǒng)文化韻味，周有光則是“科學(xué)的人”，條理明晰，滔滔善辯。性格不同，并不相互抵觸，而是相互補(bǔ)充，以音樂(lè)為例，他跟著她去聽(tīng)昆曲，她則跟著她一起聽(tīng)西洋音樂(lè)。

3.2 高效液相色譜法含量測(cè)定的結(jié)果

3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)品測(cè)定圖譜

圖1 氯仿層中黃酮含量的高效液相色譜圖

圖2 乙酸乙酯層中黃酮含量的高效液相色譜圖

圖3 正丁醇中黃酮含量的高效液相色譜圖

3.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備的結(jié)果

表1 綠升麻中的黃酮成分線性回歸方程

用HPLC法在波長(zhǎng)320 nm處測(cè)定，進(jìn)行一元線性回歸，得回歸方程見(jiàn)表1。

蘆丁在62.5～1000 g·mL-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，芹菜素在31.25～0.5 g·mL-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，槲皮素在31.25～0.5 g·mL-1范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系，工作曲線結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 蘆丁、槲皮素、芹菜素工作曲線測(cè)定結(jié)果

3.2.3 精密度試驗(yàn)的結(jié)果

準(zhǔn)確量取同一質(zhì)量濃度的供試液連續(xù)測(cè)定5次，測(cè)定峰面積，結(jié)果：蘆丁RSD=0.16 %，槲皮素RSD=0.12%，芹菜素RSD=0.39%(n=5)，表明精密度良好。詳細(xì)結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 芹菜素、蘆丁、槲皮素精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.2.4 重現(xiàn)性試驗(yàn)的結(jié)果

取供試品溶液中的樣品5份，按照上述色譜條件操作，含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 蘆丁、槲皮素、芹菜素重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 (n=5)

計(jì)算得RSD為0.06%(n=5)。測(cè)定結(jié)果顯示，本試驗(yàn)測(cè)定方法的槲皮素含量重復(fù)性良好。

計(jì)算RSD為0.06%(n=5)。測(cè)定結(jié)果顯示,本試驗(yàn)測(cè)定方法的芹菜素含量重復(fù)性良好。

3.2.5 穩(wěn)定度試驗(yàn)的結(jié)果

取同一供試液，在相同的色譜條件下分別在0,1,2,3,4,5 h按上述色譜條件測(cè)定峰面積(見(jiàn)表5)，蘆丁RSD值為0.16%，槲皮素RSD值為0.15%，芹菜素RSD值為0.36%，符合有關(guān)規(guī)定。

表5 蘆丁、槲皮素、芹菜素穩(wěn)定度試驗(yàn)結(jié)果表

3.2.6 樣品含量測(cè)定的結(jié)果

由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算含量。純化前綠升麻中蘆丁含量為1.5%，槲皮素含量為1.3%，芹菜素的含量為1.0%。純化后樣品中氯仿層中的黃酮類成分含量在81.7%，乙酸乙酯層中的黃酮類成分含量在97%，正丁醇中黃酮類成分的含量在84.6%。