杜愛(ài)芳劉連瑞

(1.浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310058；2.嘉興市供銷合作社聯(lián)合社，3.嘉興市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局)

1 材料與方法

1.1樣品的采集與處理 按不同地理位置分散選取嘉興市7個(gè)縣(市、區(qū))14家養(yǎng)雞場(chǎng)進(jìn)行采樣。在每個(gè)養(yǎng)雞場(chǎng)隨機(jī)采集新鮮糞便一份(如果有血便則優(yōu)先采樣)，將采取的糞便樣品分別存放于干凈的塑封袋內(nèi)，將每一份塑封袋進(jìn)行編號(hào)，并做好標(biāo)記，詳細(xì)記錄采樣信息，本次研究共采集280份糞便樣品。

1.2雞球蟲陽(yáng)性樣品及感染強(qiáng)度判定 每份取2 g放入小燒杯中，加適量飽和鹽水，攪拌均勻后、移入試管中加滿蓋上蓋玻片，漂浮15 min，然后用鑷子取下蓋玻片，在顯微鏡下觀察球蟲卵囊并做記錄，樣品先置于40倍顯微鏡視野下觀察，確定視野范圍后調(diào)整至100倍。顯微觀察若無(wú)雞球蟲蟲卵，則判定為此樣品為陰性，顯微觀察若有雞球蟲蟲卵，則判定此樣品為陽(yáng)性。

隨機(jī)調(diào)取3個(gè)100倍顯微鏡視野，將這3個(gè)視野內(nèi)的雞球蟲數(shù)量進(jìn)行計(jì)數(shù)，求其平均值。感染強(qiáng)度判定依據(jù)表1。

表1 雞球蟲感染情況判定表

1.3雞球蟲蟲種鑒定 觀察樣品中在顯微鏡下肉眼可見(jiàn)的卵囊的形態(tài)、顏色。在顯微鏡下測(cè)量每種卵囊大小，計(jì)算出它們的平均值，計(jì)算卵囊指數(shù)，并進(jìn)行顯微照像。參照雞球蟲卵囊圖譜和有關(guān)文獻(xiàn)資料進(jìn)行初步蟲種鑒定[1]。

1.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析 統(tǒng)計(jì)所采集樣品的有無(wú)雞球蟲卵囊,并將檢測(cè)到的雞球蟲卵囊進(jìn)行分類,按照采樣區(qū)域進(jìn)行統(tǒng)計(jì),匯總嘉興市各個(gè)采樣區(qū)域內(nèi)雞球蟲感染的種類、所占比例、感染情況等等，然后對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1雞球蟲感染率及感染情況 14家養(yǎng)雞場(chǎng)共280份雞糞便樣品，根據(jù)顯微鏡下肉眼可見(jiàn)的卵囊的形態(tài)、顏色，在顯微鏡下測(cè)量每種卵囊大小，通過(guò)計(jì)算卵囊指數(shù)確定本次研究所發(fā)現(xiàn)的雞球蟲種類。在此次雞球蟲病流行病學(xué)調(diào)查中，共發(fā)現(xiàn)了4種雞球蟲，它們分別是：柔嫩艾美耳球蟲(Eimeriatenella)、堆型艾美耳球蟲(Eimeriaacervulina)、巨型艾美耳球蟲(Eimeriamaxima)、和緩艾美耳球蟲(Eimeriamitis)。部分檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1～3。

圖1 雞球蟲卵顯微鏡檢測(cè)照片

圖2 雞球蟲卵顯微鏡檢測(cè)照片

圖3 雞球蟲卵顯微鏡檢測(cè)照片

在采樣調(diào)查的280份樣品中，共檢測(cè)有53份雞球蟲陽(yáng)性樣品，占比為18.93%(見(jiàn)表2)，其中嘉善縣雞球蟲感染率最高，為27.50%，海鹽縣雞球蟲感染率最低為12.50%，南湖區(qū)、秀洲區(qū)、平湖市、海寧市、桐鄉(xiāng)市雞球蟲感染情況分別為：22.50%、20.00%、17.50%、15.00%、17.50%。

從感染強(qiáng)度上來(lái)分：普遍感染強(qiáng)度為+，少數(shù)樣品為++，總體感染強(qiáng)度不高。

表2 雞球蟲感染強(qiáng)度情況

2.2感染球蟲種類 在鏡檢發(fā)現(xiàn)雞球蟲感染陽(yáng)性的53份樣品中，單一蟲種感染的為13份，占比為24.53%，兩種及兩種以上球蟲感染的樣品數(shù)為40份，占比為75.47%，說(shuō)明雞球蟲感染情況中，以混合感染為主要情況。

3 討論

雞球蟲病在全世界范圍內(nèi)分布廣泛，在我國(guó)，許多地區(qū)養(yǎng)雞場(chǎng)也都存在雞球蟲病感染情況。嘉興市的氣候環(huán)境條件非常適宜雞球蟲的傳播和蔓延，存在雞球蟲病疫情爆發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。因此，制定合理有效的雞球蟲病防治策略的前提是必須要清晰地掌握本市內(nèi)雞球蟲病流行情況。而了解嘉興市雞球蟲的感染情況，對(duì)指導(dǎo)雞球蟲病的預(yù)防治療工作尤為重要。

表3 陽(yáng)性樣品中單一感染和混合感染占比情況

當(dāng)前雞球蟲病的防治主要依賴于藥物防治，在用藥過(guò)程中尤其要注意采取穿梭用藥、聯(lián)合用藥方式，以避免雞球蟲耐藥性的產(chǎn)生[2]。此外，應(yīng)積極引導(dǎo)養(yǎng)殖場(chǎng)合理規(guī)范用藥，切忌濫用藥，科學(xué)系統(tǒng)的做好雞球蟲病的防控。對(duì)此，筆者通過(guò)查閱資料，得出如下幾條經(jīng)驗(yàn)。

3.1做好飼養(yǎng)管理工作 加強(qiáng)消毒滅原工作，要對(duì)進(jìn)入養(yǎng)殖區(qū)域的材料、用具、設(shè)備以及人員進(jìn)行嚴(yán)格徹底的消毒，防止外界雞球蟲通過(guò)上述途徑帶入到本養(yǎng)殖場(chǎng)區(qū)域。此外在飼料添加環(huán)節(jié)上要注重增添植物類飼料添加劑來(lái)抑制球蟲的生長(zhǎng)發(fā)育，參照其他養(yǎng)殖場(chǎng)已取得的良好經(jīng)驗(yàn)做法，比如口服青蒿素、檸檬提取物、紫錐花、甜菜堿、大蒜提取物等，結(jié)合自身養(yǎng)雞場(chǎng)實(shí)際情況，在養(yǎng)殖過(guò)程中進(jìn)一步優(yōu)化該類飼料添加劑的成分、配比等[3]。

3.2合理的使用藥物防治 大量的研究表明，雞球蟲病大多通過(guò)藥物的防治來(lái)誘導(dǎo)其自身免疫的發(fā)生，從而清除雞體內(nèi)寄生的病原體。在世界上不同的國(guó)家和地區(qū)，真正實(shí)際應(yīng)用于生產(chǎn)的抗球蟲藥物只有二十余種左右，大致可以分為三大類：聚醚類離子載體抗生素、化學(xué)合成的抗球蟲藥以及中草藥類藥物。聚醚類離子載體抗生素主要包括：莫能霉素、鹽霉素、拉沙霉素、那拉霉素、馬杜拉霉素和山度拉霉素，它們能使陽(yáng)離子易于進(jìn)入球蟲細(xì)胞膜內(nèi)從而改變滲透壓，引起內(nèi)外離子失衡，最終球蟲由于過(guò)多水分進(jìn)入膜內(nèi)，細(xì)胞破裂導(dǎo)致死亡，達(dá)到作用效果[4]；化學(xué)合成的抗球蟲藥主要包括：磺胺類藥、酰胺類、吡啶類、喹啉類、胍類、抗硫胺素類、均苯脲類和均三嗪類，它包括多種模式的作用途徑，例如抑制葉酸合成的磺胺類藥物，抑制球蟲線粒體呼吸作用的碳酸奎尼丁、氯吡啶醇，與雞球蟲競(jìng)爭(zhēng)硫胺素吸收的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑氨芐西林等；中草藥類藥物主要是如常山酮、青蒿素、大蒜菌素等。它們主要是通過(guò)抑制球蟲卵囊的孢子化并殺死已經(jīng)孢子化的卵囊，增加T、B淋巴細(xì)胞的數(shù)量與活性，達(dá)到提高機(jī)體自身免疫力的目的[5]。由此可見(jiàn)，當(dāng)前市面上抗球蟲藥物的種類很多，并且作用的方式也不盡相同。鑒于此，要做到有效地控制雞球蟲病的發(fā)生，必須要做到根據(jù)需要來(lái)選擇用藥，并且合理、適量的使用藥物，對(duì)防治雞球蟲病也很關(guān)鍵。

3.3疫苗防治 雖然抗球蟲藥物已被廣泛的用于預(yù)防球蟲病，在許多有大型家禽業(yè)的國(guó)家(如巴西、中國(guó)和美國(guó))，抗球蟲藥是家禽抵抗雞球蟲感染的主要防控手段[6]。但藥物耐藥性以及耐藥蟲株的出現(xiàn)使藥物預(yù)防效果明顯降低，導(dǎo)致球蟲病無(wú)所不在，大大降低了生產(chǎn)效率。人們也采取了輪換給藥(1種藥物投放時(shí)間為2個(gè)育肥期)、穿梭給藥(1個(gè)育肥期內(nèi)投放不同藥物)、聯(lián)合給藥等各種措施，這對(duì)球蟲耐藥性產(chǎn)生的副作用有一定作用，但球蟲病仍然肆虐橫行。因此通過(guò)疫苗防治來(lái)抵抗球蟲感染顯得尤為重要。目前大多數(shù)商品化的疫苗主要是活疫苗。

隨著科研人員對(duì)球蟲免疫機(jī)理研究的不斷深入，有效的抗球蟲疫苗也隨之被開(kāi)發(fā)出來(lái)。到現(xiàn)在為止，市場(chǎng)上銷售的抗雞球蟲疫苗多為含有多種有一定致病力的球蟲混合制成的活苗。然而這些疫苗均存在一定的局限性，比如在免疫途徑和免疫程序的控制方面難以把握；活苗毒力返強(qiáng)的潛在危險(xiǎn)；生產(chǎn)量的限制難以滿足日益擴(kuò)大的養(yǎng)雞業(yè)的需求等[7]。另外活苗在安全性和免疫效果方面也是目前令人擔(dān)憂的地方。活苗得不到廣泛推廣的另一個(gè)重要原因是由于其存在的致病性很可能在雞群免疫力低下的時(shí)候?qū)е虑蛳x病的爆發(fā)[8]。

在分子生物技術(shù)飛速發(fā)展的今天，對(duì)雞球蟲免疫機(jī)理和入侵機(jī)制的不斷認(rèn)識(shí)和理解，科研人員將防治雞球蟲病的眼光放在了DNA疫苗的研制上?？闺u球蟲的基因工程疫苗是通過(guò)DNA重組的生物學(xué)技術(shù)，將天然的或人工合成的具有抗球蟲效應(yīng)的遺傳物質(zhì)定向插入表達(dá)載體中，使之在宿主細(xì)胞中表達(dá)并將相應(yīng)的抗原呈遞給宿主的免疫系統(tǒng)引起相應(yīng)的免疫效應(yīng)，從而起到抗球蟲的作用[9]。因此，能夠作為基因工程疫苗的載體必須具備以下兩個(gè)功能：首先，可以表達(dá)球蟲抗原；其次，是可以將表達(dá)的抗原呈遞給宿主的免疫系統(tǒng)[10]。最近的一些研究指出，DNA疫苗能夠激發(fā)宿主的體液免疫和細(xì)胞免疫[11]。與此同時(shí)，細(xì)胞因子作為佐劑應(yīng)用于抗球蟲免疫可以延長(zhǎng)DNA疫苗的保護(hù)時(shí)間，提高免疫質(zhì)量[12]。相比傳統(tǒng)的活苗預(yù)防，DNA疫苗在安全性、保護(hù)性、持續(xù)性、穩(wěn)定性、免疫效果等多方面具有明顯的優(yōu)勢(shì)[13]。