侯舒倩　肖瑤

【摘要】 目的 探討Masson染色在肝纖維化診斷中的輔助作用。方法 89例慢性肝炎、肝硬化患者的石蠟包埋肝組織標(biāo)本， 連續(xù)切片并行HE染色及Masson染色， 染色完成后行單盲閱片， 根據(jù)染色結(jié)果分別對(duì)HE染色及Masson 染色的標(biāo)本進(jìn)行G-S分級(jí)分期， 并作出初步診斷。統(tǒng)計(jì)HE染色和Masson 染色的染色結(jié)果;比較HE染色和Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況;比較HE染色和Masson 染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分與臨床分度的吻合程度。結(jié)果 標(biāo)本染色完成后， HE染色標(biāo)本胞漿均被染成紅色， 胞核均被染成紫色， 膠原纖維與肝細(xì)胞團(tuán)分界不清楚;Masson染色標(biāo)本膠原纖維被染成藍(lán)色， 包繞紅色的肝細(xì)胞團(tuán)， 顏色對(duì)比明顯， 分界清楚。HE染色和Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HE染色結(jié)果與臨床診斷相符78例， 不吻合11例;Masson 染色結(jié)果與臨床診斷相符86例， 其中3例臨床診斷為慢性肝炎-重度， 經(jīng)Masson染色確診為早期肝硬化;Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化的吻合程度高于HE染色， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論 Masson 染色能更清楚地顯示肝纖維化病變中的膠原纖維， 提高早期肝硬化的檢出率， 具有重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

【關(guān)鍵詞】 慢性肝炎、肝硬化;肝纖維化;HE染色;Masson染色;G-S分級(jí)分期

肝纖維化作為一個(gè)病理過(guò)程， 常見(jiàn)于病毒性肝炎、酒精肝、脂肪肝等多種慢性疾病， 其本質(zhì)是肝臟持續(xù)性損傷， 導(dǎo)致以膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)合成增多、肝星狀細(xì)胞被激活轉(zhuǎn)化為肌成纖維樣細(xì)胞和成纖維細(xì)胞[1]。肝纖維化是慢性肝病的重要病理特征， 如持續(xù)發(fā)展， 則會(huì)導(dǎo)致肝硬化的發(fā)生。傳統(tǒng)的HE染色使組織細(xì)胞的胞核均染成紫色， 胞漿均染成紅色， 沒(méi)有特異性， 不能明顯區(qū)分病變組織和正常組織， 特別是對(duì)病變?cè)缙诘妮p度纖維化組織分辨更為困難， 而Masson染色法是顯示膠原纖維的重要染色方法之一， 使膠原纖維呈綠色或藍(lán)色， 肌纖維呈紅色， 紅細(xì)胞呈橘紅色。本研究就Masson染色在輔助診斷肝纖維化中的臨床價(jià)值進(jìn)行探究， 取得了滿(mǎn)意的結(jié)果， 現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料來(lái)源 收集2017年8～12月本院89例慢性肝炎、肝硬化患者的石蠟包埋肝組織標(biāo)本作為研究對(duì)象， 連續(xù)切片并行HE染色及Masson 染色， 所有患者的病情確診均符合《中國(guó)慢性乙肝防治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1. 2 試劑 Masson染色試劑盒由北京索萊寶科技有限公司提供， 主要包括：試劑A1：蘇木素染色液;試劑A2：三氯化鐵水溶液;試劑B：鹽酸乙醇分化液;試劑C：氨水水溶液;試劑D：麗春紅酸性品紅染色液;試劑E：乙酸水溶液;試劑F：磷鉬酸水溶液;試劑G：苯胺藍(lán)染色液。使用前取A1和A2等量混合， 即為試劑A。

1. 3 Masson染色法 ①石蠟切片常規(guī)脫蠟至水;②用試劑A染色10 min， 蒸餾水沖洗;③用試劑B分化1 min， 水洗;④用試劑C反藍(lán)1 min， 水洗1 min;⑤試劑D染色10 min， 用試劑E洗1 min;⑥用試劑F洗1 min， 再用試劑E洗1 min;⑦放入試劑G中染色2 min， 試劑E洗1 min;⑧95%酒精、無(wú)水乙醇脫水， 二甲苯透明， 中性樹(shù)膠封片。所有標(biāo)本同時(shí)做HE染色對(duì)照。

1. 4 觀察指標(biāo) 統(tǒng)計(jì)HE染色和Masson 染色的染色結(jié)果。比較HE染色和Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況;比較HE染色和Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分與臨床分度的吻合程度。采用單盲閱片方式分別對(duì)HE染色和Masson染色切片進(jìn)行G-S分級(jí)分期， 其中慢性肝炎根據(jù)炎性活動(dòng)度（G）可分為G0～4級(jí)， 根據(jù)纖維化程度（S）可分為S0～4級(jí)[2]。根據(jù)G-S分級(jí)分期結(jié)果將病理診斷劃分為正常（G0， S0）、慢性肝炎-輕度（G1～2， S0～2）、慢性肝炎-中度（G3， S1～3）、慢性肝炎-重度（G4， S2）、早期肝硬化（G3， S4）和肝硬化[3]。

1. 5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 染色結(jié)果 標(biāo)本染色完成后， HE染色標(biāo)本胞漿均被染成紅色， 胞核均被染成紫色， 膠原纖維與肝細(xì)胞團(tuán)分界不清楚;Masson染色標(biāo)本膠原纖維被染成藍(lán)色， 包繞紅色的肝細(xì)胞團(tuán)， 顏色對(duì)比明顯， 分界清楚。

2. 2 HE染色和Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況比較 HE染色和Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分情況比較， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表1。

2. 3 HE染色和Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化程度劃分與臨床分度的吻合程度比較 HE染色結(jié)果與臨床診斷相符78例， 不吻合11例;Masson染色結(jié)果與臨床診斷相符86例， 其中3例臨床診斷為慢性肝炎-重度， 經(jīng)Masson染色確診為早期肝硬化;Masson染色對(duì)慢性肝炎、肝硬化的吻合程度高于HE染色， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

肝纖維化的發(fā)生機(jī)制非常復(fù)雜， 是由肝細(xì)胞、肝星狀細(xì)胞、枯否細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞因子等多方面因素的共同作用引起。其中， 肝星形細(xì)胞的激活和轉(zhuǎn)化是肝纖維化發(fā)生的中心環(huán)節(jié)[4]， 其結(jié)果是使細(xì)胞外基質(zhì)合成增多， 降解減少， 沉積于肝內(nèi)而引起纖維化。肝纖維化的主要病理特征為肝組織正常結(jié)構(gòu)遭到破壞， 肝細(xì)胞減少， 血管結(jié)構(gòu)紊亂， 至肝硬化階段可有假小葉的形成， 假小葉是指由廣泛增生的纖維組織分割原來(lái)的肝小葉并包繞成大小不等的圓形或類(lèi)圓形的肝細(xì)胞團(tuán)， 假小葉內(nèi)肝細(xì)胞排列紊亂， 可有變性、壞死及再生， 中央靜脈竇缺如， 偏位或兩個(gè)以上[5]。

傳統(tǒng)的HE染色使各種組織的胞漿都染成紅色， 胞核都染成紫色， 缺乏特異性， 不利于區(qū)分病變組織和正常組織結(jié)構(gòu)， 纖維化中晚期因病變較明顯尚可確切診斷， 但對(duì)早期纖維化的診斷還是有一定的困難。Masson染色法是指用兩種或三種陰離子染料混合， 顯示組織中纖維及炎性因子的染色方法， 其原理是利用不同組織對(duì)染料分子的滲透性不同及染料分子本身的大小來(lái)實(shí)現(xiàn)， 小分子能進(jìn)入結(jié)構(gòu)比較致密， 滲透性比較低的組織， 而苯胺藍(lán)等大分子只能進(jìn)入結(jié)構(gòu)較疏松， 滲透性高的組織， 從而使肌纖維呈紅色， 膠原纖維呈藍(lán) 色[6， 7]。鏡下可清晰看到圍繞在紅色肝細(xì)胞團(tuán)外的藍(lán)色膠原纖維， 而且， 纖維增生程度不同， 染色深淺也不同， 鮮明的顏色對(duì)比更有助于肝纖維化的診斷和分期。本研究也表明經(jīng)Masson染色后做出的病理G-S分級(jí)分期與患者的臨床分度基本一致， 且較HE染色更能顯示早期纖維化病變， 有助于輕度慢性肝炎和早期肝硬化的診斷， 提高早期隱匿性肝硬化的檢出率， 為臨床早期診斷及治療提供了重要依據(jù)[8-12]。

綜上所述， Masson染色能夠更清楚地顯示肝纖維化中的膠原纖維， 提高早期纖維化病變的檢出率， 為臨床作出精確診斷及G-S分級(jí)分期提供可靠的依據(jù)， 具有非常重要的臨床應(yīng)用價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1] 劉平. 肝纖維化肝硬化的中西醫(yī)結(jié)合診療發(fā)展問(wèn)題. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志， 2015， 35（3）：268-271.

[2] 李鵬， 王躍. 利用Masson染色聯(lián)合Ⅱ型膠原蛋白免疫組化染色對(duì)嚴(yán)重骨關(guān)節(jié)炎骨贅的組織學(xué)研究. 實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志， 2017， 33（5）：762-766.

[3] 張弘， 陶森， 郝彧， 等. 國(guó)外肝纖維化診斷的研究熱點(diǎn)分析. 首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， 2016， 37（1）：83-88.

[4] 周冬青. 改良Masson染色法在慢性乙型肝炎及肝硬化病理學(xué)診斷中應(yīng)用. 中外醫(yī)療， 2017， 36（8）：46-48.

[5] 周文策， 王芳紅， 李營(yíng). 肝纖維化診療方法的研究進(jìn)展. 中國(guó)普通外科雜志， 2015， 24（7）：1032-1037.

[6] 高鵬， 李俊峰， 周偉， 等. 乙型肝炎病毒對(duì)不同ALT狀態(tài)下慢性乙型肝炎患者肝功和肝纖維化以及肝臟病理分期的影響. 西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版）， 2017， 38（4）：564-568.

[7] 周光德， 趙景民. 不同病因致肝纖維化/肝硬化的病理特點(diǎn). 臨床肝膽病雜志， 2016， 32（6）：1086-1091.

[8] 顧怡瑾， 陸新元， 付華輝，等. Masson染色在輔助診斷肝纖維化中應(yīng)用. 臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志， 2012， 28（1）：101-102.

[9] 胡錫琪. 慢性肝炎肝纖維化病理分期和評(píng)估. 中華肝臟病雜志， 2008， 16（3）：169-170.

[10] 陸倫根， 曾民德. 肝纖維化的診斷和評(píng)估. 中華肝臟病雜志， 2005， 13（8）：603-604.

[11] 曾民德， 王泰齡， 王寶恩. 肝纖維化診斷及療效評(píng)估共識(shí). 肝臟， 2002， 7（2）：265-266.

[12] 劉成海. 肝纖維化的基礎(chǔ)研究進(jìn)展. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志， 2006， 26（1）：11-12.

[收稿日期：2018-11-15]