黃健中 陳冬萍 石艷 肖建民

在脂質(zhì)代謝中，載脂蛋白E（Apolipoprotein E，ApoE）作為配體與LDL受體（ApoE受體）結(jié)合，可影響血脂水平，尤其是LDL-C的重要遺傳因素之一[1]。但不同人群和個(gè)體，在控制血脂水平方面，存在著明顯的差異[2]。這種差異可能與不同個(gè)體間藥物受體基因多態(tài)性、藥物轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因多態(tài)性、藥物代謝酶基因多態(tài)性有關(guān)[3]。近年來，關(guān)于ApoE不同基因亞型對調(diào)脂藥物相關(guān)性研究有很多，特別針對他汀類藥物[4]。本研究擬觀察不同ApoE基因型高脂血癥患者，在應(yīng)用阿托伐他汀前后的血脂水平的變化程度，以探討ApoE基因多態(tài)性對阿托伐他汀調(diào)脂作用的影響，為未來個(gè)體化治療方案建立供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 研究對象

入選標(biāo)準(zhǔn)：入選對象選自2017年3月—2018年3月在東莞市第五人民醫(yī)院心血管內(nèi)科門診或住院患者301例，符合《中國成人血脂異常防治指南（2016年修訂版）》[5]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并符合以下條件之一：空腹血清檢查總膽固醇（TC）≥5.18 mmol/L或低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）≥3.37 mmol/L。

1.2 排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）近3月內(nèi)服用過降脂藥物；（2）家族性高膽固醇血癥者或藥物引起的高脂血癥者；（3）存在內(nèi)分泌相關(guān)疾病；（4）嚴(yán)重的肝、腎功能損害；（5）嚴(yán)重高血壓不能控制和/或未控制的糖尿??；（6）妊娠或準(zhǔn)備懷孕、哺乳期婦女；（7）過敏體質(zhì)及急性炎癥期患者；（8）有嚴(yán)重?zé)煛⒕剖群谜摺?/p>

1.3 研究對象一般資料

所有研究對象采集個(gè)人信息如：年齡、性別、體質(zhì)量、身高、家庭住址、聯(lián)系方式等，對患者病史資料進(jìn)行問詢?nèi)纾焊哐獕翰∈?、冠心病病史、糖尿病病史、吸煙史等資料。

1.4 藥物治療

首次抽采外周血后開始服用阿托伐他汀鈣片，每次20 mg，每晚1次，飯后服。治療期間維持低脂飲食。

1.5 血液樣本采集與測定

所有研究對象均在空腹8 h后次日早晨抽采外周靜脈血6 mL。3 mL立即送化驗(yàn)室應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀測定總膽固醇（Total cholesterol，TC）、甘油三酯（Triglyceride，TG）、高密度脂蛋白膽固醇（High density lipoprotein-cholesterol，HDL-C）低密度脂蛋白-膽固醇（Low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C），并于第12周末空腹8 h抽采外周靜脈血3 mL復(fù)查上述指標(biāo)。3 mL置于乙二胺四乙酸（Ethylene Diamine Tetraacetic Acid，EDTA）管中，送中心實(shí)驗(yàn)室于低溫冰箱中保存，3天內(nèi)分離血清后用基因分型芯片法測定ApoE基因并分型。主要儀器及試劑：ApoE基因分型芯片法檢測試劑盒（珠海賽樂奇生物）；聚合酶鏈鎖反應(yīng)（Polymerase chain reaction，PCR）擴(kuò)增儀（ABI2720）；基因芯片閱讀儀（Sinochips-PGA，珠海賽樂奇生物技術(shù)）。根據(jù)ApoE基因表型分型的結(jié)果進(jìn)行分組。

1.6 基因分型

基因芯片可檢測出6種ApoE基因表型，本研究依據(jù)各基因表型的堿基對應(yīng)位點(diǎn)將各基因表型分三組做比較，即為ε2（E2/2+E2/3）、ε3（E2/4+E3/3）和ε4（E3/4+E4/4）。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，所有計(jì)量資料采用（s）表示，兩組間計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，三組間計(jì)量資料采用ANVOA法分析比較，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基因頻率的分布

301名高脂血癥患者中ApoE基因型分布如下：E2/2型2例，E2/3型50例，E3/3型205例，E2/4型8例，E3/4型34例，E4/4型2例。各基因表型基因頻率分布如下：E2/2型為0.66%，E2/3型為16.61%，E3/3型為68.11%，E2/4型為2.66%，E3/4型為11.30%，E4/4型為0.66%，見表1。通過計(jì)算，ApoE各等位基因ε2、ε3、ε4樣本數(shù)分別是52、213、36；等位基因頻率分別是：17.3%、70.8%、11.9%，見表2。ApoE基因表型E3/3占總數(shù)的68.11%，等位基因ε3比例為70.8%，分別為最常見的基因表型及等位基因型。

表1 ApoE基因表型分布

表2 ApoE等位基因分布

表3 各基因組合臨床資料比較

表4 各組治療前后血脂水平比較（mmol/L，

表4 各組治療前后血脂水平比較（mmol/L，

組別 TC TG LDL-C HDL-C 0周 12周 0周 12周 0周 12周 0周 12周ε2（52）ε3（213）ε4（36）F值P值5.52±0.38 5.21±0.43 5.37±0.35 3.08 0.214 9 4.03±0.21 5.12±0.25 4.29±0.23 529.76 0.000 0 2.26±0.17 2.42±0.19 2.33±0.19 0.99 0.610 3 1.97±0.14 2.11±0.13 2.08±0.14 303.11 0.000 0 3.20±0.22 4.22±0.25 3.57±0.23 1.48 0.476 0 2.32±0.17 3.95±0.21 2.65±0.18 33.40 0.000 0 1.59±0.11 1.55±0.10 1.48±0.10 0.79 0.672 4 1.91±0.13 1.65±0.11 1.68±0.12 107.62 0.000 0

2.2 不同基因組合間的一般資料比較

入選的高膽固醇血癥患者共301例，其中男性136例，女性165例，平均年齡（65.31±12.56）歲。各基因組合間的年齡、性別、BMI、高血壓、糖尿病等，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表3。

2.3 不同基因組合治療后血脂水平比較

所有研究對象治療前血脂水平差異均無意義（P＞0.05）。經(jīng)12周阿托伐他汀治療后：（1）TC：ε2組優(yōu)于ε3組、ε4組優(yōu)于ε3組，數(shù)據(jù)對比差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），ε2組與ε4組間對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；（2）LDL-C：ε2組優(yōu)于ε3組、ε4組優(yōu)于ε3組，數(shù)據(jù)對比差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），ε2組與ε4組間對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；（3）HDL-C：ε2組優(yōu)于ε3組、ε2組優(yōu)于ε4組，數(shù)據(jù)對比差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），ε3組與ε4組對比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；（4）TG治療后各組間數(shù)據(jù)比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。

3 討論

高脂血癥為臨床常見疾病，任意原因引起的膽固醇含量增高或甘油三酯含量增高，都稱之為高脂血癥[6]。高脂血癥可發(fā)展為動(dòng)脈粥樣硬化，動(dòng)脈粥樣硬化可引發(fā)心腦血管疾病。載脂蛋白E（ApoE）為一種主要在肝臟與大腦中合成的富含精氨酸的堿性蛋白，其主要參與人體脂質(zhì)代謝、神經(jīng)元重塑/修復(fù)、神經(jīng)元突觸生長[7-8]。其在機(jī)體內(nèi)分布較廣，外周血漿中ApoE由肝臟、腎臟、骨骼、卵巢、巨噬細(xì)胞合成，中樞神經(jīng)系統(tǒng)中則由星形膠質(zhì)細(xì)胞合成[9]。ApoE基因多態(tài)性與心腦血管疾病的可能發(fā)病機(jī)制為ε4基因攜帶組增加了腦淀粉樣病理改變，繼而引發(fā)心腦血管疾病[10]。

本研究結(jié)果提示ApoE3/3及ε3為最常見的基因表型和等位基因，這與目前其他研究顯示的基因頻率是相符合的[11]。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，治療前各基因型組合間血脂水平差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。經(jīng)12周阿托伐他汀治療后，ε3組TC均值水平高于其他2組；ε3組LDL-C均值水平同樣高于ε2組和ε4組；ε2組HDL-C均值水平高于其余2組。提示治療后攜帶ε3等位基因的患者血脂水平高于非攜帶ε3等位基因的患者，尤其表現(xiàn)在TC和LDL-C的血脂水平上。并通過對治療前后血脂變化程度的觀察中，我們可以發(fā)現(xiàn)治療前后TC、HDL-C、LDL-C的變化程度存在差異，ε2在降低TC、LDL-C的水平以及升高HDL-C方面，均優(yōu)于ε3組。Gar cí a-o tí n AL等[12]發(fā)現(xiàn)，攜帶ε2等位基因的歐洲人群，服用阿托伐他汀后LDL-C下降較明顯，提示ApoE基因ε2與阿托伐他汀降脂效果有關(guān)。

綜上所述，他汀具有良好的調(diào)脂作用，其效果在一定程度上受到ApoE基因多態(tài)性的影響。若能明確這些基因與藥物療效差異的關(guān)聯(lián)性，對今后臨床用藥將具有指導(dǎo)意義，更好地為動(dòng)脈粥樣硬化患者，尤其心腦血管疾病患者，起到早期針對性用藥，取得更好地疾病預(yù)防及治療作用。