王德功，任麗花，劉 冬，李卓偉，張 沛，呂 讓，楊國輝

（河北遠征藥業(yè)有限公司，河北省獸藥工程技術(shù)研究中心，河北石家莊050041）

1 前言

豬傳染性胸膜肺炎 （porcine infectious pleuropneumonia，PCP) 是一種具有高傳染性的呼吸道疾病，以急性出血性和慢性纖維素壞死為特征。該病于1957 年首次報道，在世界各國家廣泛流行， 是養(yǎng)豬業(yè)公認的世界性的細菌性疾病，同時該病與豬丹毒、 豬肺疫等病原易發(fā)生混合感染，致使該病一旦發(fā)生，發(fā)病率及死亡率明顯升高，給養(yǎng)殖業(yè)帶來重大損失。

2 試驗材料與方法

2.1 試驗動物、藥品及菌株

2月齡、 體重10kg 左右的二元雜 （長白公豬×土母豬）仔豬54 頭（雌雄各半），購自四川省名山縣興農(nóng)養(yǎng)豬場。豬群健康，未曾接種豬胸膜肺炎放線桿菌疫苗， 也無傳染性胸膜肺炎感染史。豬群購入實驗動物房圈舍適應性飼養(yǎng)7日后開展試驗。

受試藥物：10%鹽酸多西環(huán)素預混劑，（以多西環(huán)素計）， 由河北遠征藥業(yè)有限公司提供。規(guī)格：5kg/袋；批號：090805。

對照藥物：3%土霉素預混劑 （以土霉素計），由河北正大鴻福動物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。規(guī)格：5kg/袋；批號：090623。

胸膜肺炎放線桿菌（App，編號為259），血清I 型，購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

2.2 試驗方法

2.2.1 疾病模型的建立 菌株啟用與菌懸液制備：凍干菌種用適量無菌生理鹽水溶解、混勻，恒溫箱接種于TSA（胰胨大豆瓊脂）培養(yǎng)基，置于5%CO2，37℃恒溫箱中培養(yǎng)24h，對菌落進行染色觀察， 并進行胸膜肺炎放線桿菌16S rRNA 基因PCR 鑒定。

挑取3-5 個鑒定確認并純化的App 單菌落，于TSB（胰胨大豆肉湯）培養(yǎng)基上接種，在37℃恒溫條件下培養(yǎng)12～16h；用平版計數(shù)法得到每1ml原菌液的菌落形成單位(CFU)。用無菌生理鹽水稀釋原菌液后進行染毒建立疾病模型。

染毒途徑與染毒量：參考文獻并預試，確定3.5～4.5×107 CFU/ml 的App 菌液， 按0.25ml/kg體重的染毒量， 采用一次性鼻腔噴霧法染毒，可獲得癥狀明顯、病變典型的放線桿菌胸膜肺炎疾病模型。

染毒：將新鮮制備并計數(shù)的App 原菌液用無菌生理鹽水稀釋成3.5～4.5×107 CFU/ml 的染毒菌液， 按0.25ml/kg 體重的染毒量給50 頭試驗豬進行一次性鼻腔噴霧法染毒；另外4 頭試驗豬給予相同劑量的無菌生理鹽水。建立放線桿菌胸膜肺炎疾病模型。

2.2.2 試驗分組

將染毒的50 頭試驗豬隨機分成5 組， 每組10 頭。其中I、II、III 組為試驗組， 分別給予添加125ppm、250ppm 和500ppm（劑量以多西環(huán)素計）鹽酸多西環(huán)素預混劑的飼料；IV 組為藥物對照組，給予添加500ppm 土霉素的飼料；Ⅴ組為感染對照組， 給予不含任何藥物的飼料；4 頭未染毒（給予無菌生理鹽水）的試驗豬作為健康對照，給予不含任何藥物的飼料。

2.2.3 給藥和飼養(yǎng)管理 染毒6h 后開始給藥。每天飼喂2 次（試驗豬日糧用標準配制的仔豬全價日糧）， 每次添加飼料量以食后槽內(nèi)有少量余料為準，自由飲水。連續(xù)飼喂7d，停藥后觀察7d。整個試驗期間每日觀察記錄豬的臨床表現(xiàn)；每日清掃圈舍，保持清潔干燥；每隔3d 對圈舍及周圍用百毒殺噴霧消毒。

2.3 試驗評價指標

2.3.1 臨床癥狀 觀察記錄染毒后24h、 給藥第7d、停藥后第7d 各組病豬的臨床癥狀，如食欲、精神狀態(tài)、呼吸道癥狀、體溫、排泄物等。根據(jù)相對應指標標準對各病豬進行評分（0—正常狀態(tài)，1—輕度，2—中度，3—嚴重），計算各組內(nèi)病豬的評分均值，比較組內(nèi)和組間的差異顯著性。

2.3.2 X 光診斷 染毒后12h， 各組隨機選取1 頭豬進行肺部X 光檢查并拍片。

2.3.3 日增重及飼料轉(zhuǎn)化率 稱量并記錄用藥前（第0d）及停藥后第7d 各組試驗豬的體重，以及試驗期間各組豬的耗料情況，計算各組豬的平均日增重和飼料轉(zhuǎn)化率，并進行統(tǒng)計學分析。

2.3.4 病變觀察與病原菌分離 停藥后第7d，各試驗組豬中隨機選擇5 頭剖檢，觀察胸腔臟器的病變，按標準進行評分，得出組內(nèi)評分均值，比較各組間的差異顯著性。同時采集肺及胸腔積液進行病原菌檢查。

胸腔臟器評分標準：①色澤正常，無明顯的眼觀病變（0 分）；②色澤基本正常，只有分散的、小面積的紫紅色區(qū)域（1 分）；③有水腫、充血甚至分散出血，胸腔有少量的積液（2 分）；④有大面積的病灶，肺出現(xiàn)實變甚至粘連；胸腔有大量積液和纖維蛋白滲出物（3 分）。

2.4 療效判定標準

1）治愈：連續(xù)給藥7d 后，試驗豬的食欲、精神、呼吸、體溫恢復正常（癥狀評分=0），體重明顯升高； 剖檢時胸腔臟器沒有特異性的病變 （評分≤1）；病料中無病原菌的檢出。

治愈率= 組內(nèi)治愈頭數(shù)／組內(nèi)給藥頭數(shù)×100%

2）有效：連續(xù)給藥7d 后，試驗豬的食欲、精神、呼吸、體溫基本恢復正常（癥狀評分≤1 分），體重有所升高； 剖檢時胸腔臟器病變的評分＜2分；病料中無病原菌的檢出。

有效率=組內(nèi)有效頭數(shù)／組內(nèi)給藥豬頭數(shù)×100%

3）無效：連續(xù)給藥7d 后，試驗豬的食欲、精神、呼吸、體溫癥狀未見好轉(zhuǎn)甚至惡化或死亡（癥狀評分＞1 分）； 剖檢時胸腔臟器病變的評分≥2分；病料中有病原菌檢出。

3 試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理

用SPSS 分析軟件進行統(tǒng)計分析， 計量用±SD 表示，采用方差分析，其中死亡率、有效率、治愈率等使用卡方檢驗分析。

4 試驗結(jié)果及分析

4.1 疾病模型建立結(jié)果

4.1.1 臨床表現(xiàn) 試驗豬染毒前精神、 食欲良好。鼻腔噴霧給予胸膜肺炎放線桿菌培養(yǎng)液4h 后，陸續(xù)出現(xiàn)短暫性嘔吐、活動少、喜臥、呼吸急促、直腸溫度升高（0.5～1.0℃）等臨床癥狀；染毒12h后，50 頭給予胸膜肺炎放線桿菌培養(yǎng)液的豬只都發(fā)病，表現(xiàn)為精神沉郁，攝食減少，呼吸困難，鼻腔內(nèi)有泡沫樣血性或膿性鼻液， 呼吸出現(xiàn)啰音、喉狹窄音，豬的體溫大多升高1.0～2.5℃，部分豬只發(fā)生腹瀉癥狀。攻毒后36～48h，感染對照組2頭豬死亡。以相同方式給予無菌生理鹽水的4 頭豬未發(fā)病。

4.1.2 X 光診斷 染毒12h 后，各試驗組豬中隨機選取1 頭檢查肺部X 光。檢查結(jié)果，健康豬的心、肺視野都無異常；染毒豬的肺部都會出現(xiàn)不同程度的炎癥性病變。

4.1.3 剖檢與病原菌分離 對死亡豬剖解時發(fā)現(xiàn)，胸腔內(nèi)有大量的積液和纖維蛋白滲出物，肺部充血和出血嚴重，心包腔外附著有大量纖維蛋白滲出物，腹腔臟器沒有明顯眼觀變化。無菌采集死亡豬的肺組織和胸腔積液用TSA 培養(yǎng)基進行分離培養(yǎng)并鏡檢，可獲得革蘭氏陰性小球桿菌；PCR檢測分離菌株的16S rRNA 基因， 得到豬胸膜肺炎放線桿菌16S rRNA 基因片段。

4.2 藥物療效的結(jié)果

4.2.1 臨床癥狀改善 試驗過程中每日觀察記錄各組豬的臨床癥狀，得出染毒后24h、給藥第7d、停藥后第7d 各組的癥狀評分均值， 分析比較組內(nèi)各時間點和組間各時間點癥狀評分之間的差異，結(jié)果見表1。

表1 各組試驗豬的癥狀評分結(jié)果

上述結(jié)果表明， 連續(xù)7d 混飼鹽酸多西環(huán)素和土霉素，均可有效改善人工感染豬傳染性胸膜肺炎的攝食減少、精神沉郁、體溫升高、呼吸困難等癥狀。其中鹽酸多西環(huán)素高劑量的作用效果最顯著；中、低劑量的作用效果也較好，與土霉素相當。

4.2.2 日增重及飼料轉(zhuǎn)化率 稱量各組試驗豬在給藥前（給藥第0d）和停藥后第7d 的體重，記錄試驗期間各組豬的耗料情況，計算出平均日增重和飼料轉(zhuǎn)化率（料肉比），結(jié)果見表2。

表2 試驗期間各組豬的日增重及料肉比

上述結(jié)果表明，感染胸膜肺炎放線桿菌的病豬連續(xù)7d 混飼鹽酸多西環(huán)素和土霉素， 均能提高病豬的日增重和飼料轉(zhuǎn)化率 （料肉比）。其中中、高劑量鹽酸多西環(huán)素的效果為最佳，二者無顯著差異，均顯著優(yōu)于土霉素。低劑量鹽酸多西環(huán)素的效果與土霉素接近。

4.2.3 病變愈合與病原菌消除 停藥后第7d，各試驗組豬中隨機選擇5 頭剖檢，觀察胸腔臟器病變并按標準評分，得出組內(nèi)評分均值，比較各組的差異顯著性；同時采集各豬的肺組織及胸腔積液進行病原菌檢查。結(jié)果見表3。

上述結(jié)果表明， 病豬連續(xù)7d 混飼鹽酸多西環(huán)素和土霉素，可有效清除感染豬體內(nèi)胸膜肺炎放線桿菌，并可促進病豬體內(nèi)胸腔臟器病變的好轉(zhuǎn)和痊愈。高、中、低劑量組的鹽酸多西環(huán)素的上述作用都比土霉素效果好，且高劑量鹽酸多西環(huán)素的效果略優(yōu)于低、中劑量，但低、中劑量之間無顯著差異。

4.2.4 有效率及治愈率 綜合停藥7d 后各組試驗豬的臨床癥狀改善和恢復、日增重和飼料轉(zhuǎn)化率、胸腔病變和病原菌檢出的情況，按標準進行試驗療效判定，可得到各試驗組豬的有效率和治愈率，結(jié)果見表4。

表3 停藥后第7d 部分病豬胸腔臟器病變評分及病原菌檢出情況（n=5）

表4 停藥7d 后各試驗組豬的有效率和治愈率

上述結(jié)果表明， 連續(xù)7d 混飼鹽酸多西環(huán)素和土霉素，對感染豬傳染性胸膜肺炎的病豬均有良好治療效果。其中鹽酸多西環(huán)素的中、高劑量組的有效率均為100%，治愈率90%以上；低劑量鹽酸多西環(huán)素和土霉素的有效率均為100%，治愈率80%。鹽酸多西環(huán)素的中、高劑量組對豬傳染性胸膜肺炎的治療效果相當，均優(yōu)于鹽酸多西環(huán)素低劑量組和土霉素組。

5 結(jié)論

該鹽酸多西環(huán)素制劑預混劑對人工感染豬放線桿菌傳染性胸膜肺炎有良好治療效果。低（125ppm）、中（250ppm）、高（500ppm）劑量組均可有效清除感染豬體內(nèi)的胸膜肺炎放線桿菌，并可促進病豬體內(nèi)胸腔臟器病變的好轉(zhuǎn)和痊愈，顯著改善病豬的臨床癥狀，并能提高給藥豬的日增重和飼料轉(zhuǎn)化率，因此，鹽酸多西環(huán)素預混劑對豬傳染性胸膜肺炎具有治療作用。

考慮到鹽酸多西環(huán)素中 （250ppm）、高（500ppm）劑量的治療效果無明顯差異，均優(yōu)于低劑量（125ppm），故臨床使用該鹽酸多西環(huán)素預混劑治療豬傳染性胸膜肺炎時，推薦劑量為中劑量（250ppm），即每噸飼料添加10%鹽酸多西環(huán)素預混劑2.5kg，連用7日。