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1.西北農(nóng)林科技大學(xué)化學(xué)與藥學(xué)院藥學(xué)系，陜西 楊凌 712100；2.空軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)教研室，陜西 西安 710032；3.國(guó)家中醫(yī)藥管理局中藥胃腸藥理重點(diǎn)研究室，陜西 西安 710032

中藥蠐螬是朝鮮黑金龜子(HolotrichiadiomphaliaBates)及同屬近緣昆蟲(chóng)的干燥幼蟲(chóng)，是較為常用的動(dòng)物藥[1]。蠐螬首次收載于《神農(nóng)本草經(jīng)》：“味咸微溫。主惡血、血瘀(《御覽》作血瘴)，痹氣，破折、血在脅下堅(jiān)滿痛，月閉，目中淫膚，青翳白膜。”其后歷代典籍如《名醫(yī)別錄》《金匱要略》《證類本草》《本草綱目》等多有收載[2]，如《名醫(yī)別錄》曰：“生河內(nèi)人家積糞草中。取無(wú)時(shí)，反行者良?！薄蹲C類本草》云：“味咸，微溫、微寒，有毒。主惡血，血瘀痹氣，破折血在脅下堅(jiān)滿痛，月閉，目中淫膚，青翳白膜，療吐血在胸腹不去及破骨折，血結(jié)，金瘡內(nèi)塞，產(chǎn)后中寒，下乳汁?！薄侗静菥V目》中記載：“蠐螬，釋名地蠶、乳齊、應(yīng)條，氣味咸，微溫，有毒?！毕擉┯衅蒲鹩?，明目退翳的功效，可用于折損瘀痛、破傷風(fēng)、喉痹、目翳等病癥[3]?，F(xiàn)代藥理研究表明該藥具有抗腫瘤、保肝、治療口瘡等多種生物活性[4-7]。近些年隨著研究的深入，蠐螬的化學(xué)成分不斷得到闡明，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)脂肪酸[8-9](油酸、棕櫚酸、棕櫚油酸等)、氨基酸(谷氨酸、甘氨酸等)、糖類(多糖)、礦物元素(鈣、鎂、鉻等)、維生素(維生素A、維生素B)等[10]。同時(shí)，越來(lái)越多的研究證實(shí)蠐螬多糖是一種新活性成分，具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、降血脂等多種作用，是蠐螬的藥效活性成分之一。但是，蠐螬多糖的其它作用還有待于進(jìn)一步發(fā)掘，毒副作用的研究目前也尚未見(jiàn)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道。為此，本研究對(duì)蠐螬多糖一般藥理作用，包括其對(duì)心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)的影響進(jìn)行了系統(tǒng)評(píng)價(jià)，同時(shí)對(duì)其亞急性毒性也進(jìn)行了初步探討，旨在為蠐螬物效基礎(chǔ)研究及蠐螬多糖的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 BP-2010A型無(wú)創(chuàng)血壓分析儀和BPEditU數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(北京軟隆)；D3024R型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)(北京大龍)；Chemray 240全自動(dòng)生化分析儀(深圳雷杜)；IX73倒置顯微鏡(奧林巴斯)；LT502T型電子秤(常熟市天量?jī)x器有限責(zé)任公司)，AX224ZH/E分析天平(奧豪斯)；自制曠野箱(無(wú)蓋紙箱55cm×40 cm×30 cm，格子數(shù)6 × 10)。

蠐螬多糖由本實(shí)驗(yàn)室制備[1]。地西泮(山東信誼制藥有限公司)；戊巴比妥鈉(美國(guó)英杰生命技術(shù)有限公司)，鹽酸氯丙嗪注射液(上海禾豐制藥有限公司)；生理鹽水(陜西圣奧動(dòng)物藥業(yè)有限公司)。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、直接膽紅素(D-BIL)、總膽紅素(T-BIL)、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)、白蛋白(ALB)、糖化血清蛋白(GSP)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、總膽固醇(TC)、葡萄糖(GLU)、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)、血清總膽汁酸(TBA)、堿性磷酸酶(ALP)、尿酸(UA)、血清乳酸脫氫酶同工酶(LDHi)、血清乳酸脫氫酶L(LDH-L)、肌酸激酶(CK)、肌酐(CRE)試劑盒均購(gòu)自中生北控生物科技股份有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 BALB/c小鼠，雌雄各半，18～22 g；SD大鼠，雌雄各半，180～250 g，購(gòu)于第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)合格證號(hào)：SCXK(軍)字第2007-007號(hào)。

1.3 一般藥理學(xué)評(píng)價(jià)給藥劑量與方法 按照一般藥理學(xué)研究的藥物劑量設(shè)置原則，以藥效學(xué)有效劑量為一般藥理研究的低劑量，高劑量設(shè)置為不產(chǎn)生嚴(yán)重毒性反應(yīng)的劑量，兩者取平均值設(shè)為中劑量。則小鼠蠐螬多糖低、中、高劑量依次為50、225、400 mg/kg；根據(jù)大鼠、小鼠與人的給藥換算比例，大鼠給藥低、中、高劑量依次為33、150、267 mg/kg。給藥途徑：與臨床用藥途徑一致，采用注射給藥；給藥次數(shù)和容積：一次性按體重計(jì)算給藥量，小鼠給藥體積為0.2 mL/(10 g)，大鼠給藥體積為0.5 mL/(100 g)[11-12]。

1.4 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的影響

1.4.1 一般行為和自主活動(dòng) 50只小鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為5組：空白組(與給藥體積相同的生理鹽水)，20 mg/kg戊巴比妥鈉(陽(yáng)性藥物)組，蠐螬多糖低、中、高劑量組；每組10只。腹腔注射給藥后，觀察小鼠一般行為、姿勢(shì)、步態(tài)、有無(wú)流涎、肌顫、眼球震顫和分泌物等變化。給藥1 h后，將小鼠放入曠野箱，適應(yīng)1 min后，計(jì)數(shù)10 min以內(nèi)，小鼠在箱內(nèi)活動(dòng)的格數(shù)(小鼠四肢都進(jìn)入同1格內(nèi)才算走動(dòng)了1格)。

1.4.2 機(jī)體協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn) 將一根光滑豎立的金屬棒(直徑為1.27 cm、長(zhǎng)80 cm)，與地面垂直放置，并固定底部，保持直立。將小鼠放在金屬棒的頂端上，讓其自然向下爬行，篩選能夠一步一步向下爬的小鼠50只，每組10只，雄雌各半，隨機(jī)分為5組：空白組(與給藥體積相同的生理鹽水)，2.5 mg/kg鹽酸氯丙嗪注射液(陽(yáng)性藥物)組，蠐螬多糖低、中、高劑量組；每組10只。腹腔注射給藥1周后，30、60、120 min分別進(jìn)行爬桿試驗(yàn)。觀察小鼠協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)能力，并進(jìn)行評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[13-14]：0分，一步一步向下爬；1分，向下滑行；2分，不能爬住棒；3分，翻正反射消失。

在大學(xué)階段，新生最容易出現(xiàn)的問(wèn)題就是目標(biāo)迷失，隨著生活環(huán)境和學(xué)習(xí)環(huán)境的改變，新生在適應(yīng)新環(huán)境的過(guò)程中，在學(xué)習(xí)動(dòng)力和學(xué)習(xí)目標(biāo)方面會(huì)出現(xiàn)茫然的情況。在這種情況下，新生必須給自己尋找一個(gè)明確的人生目標(biāo)，并為之制定合理的職業(yè)生涯發(fā)展規(guī)劃。同時(shí)，可根據(jù)自身情況制定在校期間的一個(gè)短期目標(biāo)。

1.4.3 小鼠鎮(zhèn)靜催眠實(shí)驗(yàn)[15-16]

1.4.3.1 入睡率 50只小鼠隨機(jī)分為5組：空白組、10 mg/kg地西泮組(陽(yáng)性藥物，使用時(shí)用去離子水配制，灌胃給藥)組、蠐螬多糖低、中、高劑量組，每組10只。各組給藥1次，1 h后每組小鼠腹腔注射25 mg/kg(催眠閾下劑量)戊巴比妥鈉。觀察30 min，小鼠翻正反射消失達(dá)1 min以上者計(jì)為睡眠發(fā)生，計(jì)數(shù)各組睡眠發(fā)生的數(shù)目，計(jì)算入睡率，比較藥物對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠的催眠作用[17]。

1.4.3.2 睡眠時(shí)間 50只小鼠隨機(jī)分為5組：空白組、5.0 mg/kg地西泮組(陽(yáng)性藥物)，蠐螬多糖低、中、高劑量組。各組給藥1 h后，小鼠腹腔注射45 mg/kg戊巴比妥鈉。觀察和記錄小鼠睡眠持續(xù)時(shí)間(翻正反射消失至恢復(fù)的時(shí)間)。

1.5 對(duì)心血管系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的影響 將40只大鼠隨機(jī)分成4組：空白組、蠐螬多糖低、中、高劑量組，每組10只，雄雌各半。大鼠仰臥位固定于鼠臺(tái)上，BP-2010A型無(wú)創(chuàng)血壓分析儀記錄動(dòng)物血壓及心率，呼吸頻率通過(guò)觀察大鼠胸腹部的收縮和隆起情況測(cè)得。動(dòng)物各記錄指標(biāo)穩(wěn)定后開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，分別記錄大鼠給藥前、給藥后1 h，2 h的血壓、心率和呼吸的情況。

1.6 亞急性毒性試驗(yàn)評(píng)價(jià)及給藥方法 將30只大鼠隨機(jī)分成3組：設(shè)對(duì)照組和給藥組，給藥組按267 mg/kg、33 mg/kg分別腹腔注射給藥，對(duì)照組以生理鹽水腹腔注射，每組10只，雄雌各半。連續(xù)給藥14 d，各組均自由飲水進(jìn)食，末次給藥1 h后，進(jìn)行臟器系數(shù)測(cè)定、血常規(guī)檢查、血液生化指標(biāo)檢查以及組織病理學(xué)檢查。

1.6.1 血液細(xì)胞分析 連續(xù)給藥14 d，末次給藥1 h后，由腹主動(dòng)脈取血，血液細(xì)胞分析儀測(cè)定血液中白細(xì)胞(WBC)、紅細(xì)胞(RBC)、血小板(PLT)數(shù)目、血紅蛋白量和紅細(xì)胞積壓。

1.6.2 生化分析心臟、肝臟、腎臟重要指標(biāo) 連續(xù)給藥14 d，末次給藥1 h后，由腹主動(dòng)脈取血，3000 r/min離心15 min，取血清，生化分析儀測(cè)定AST、ALT、ALB、GLU、TG、TC、HDL-C、BUN和CRE等水平。

1.6.3 組織病理觀察 連續(xù)給藥14 d，末次給藥1 h后麻醉處死大鼠，經(jīng)解剖，分別取小鼠心、肝、肺、脾和腎，將各組織修剪固定，制作成石蠟切片，觀察各組織病理學(xué)變化。簡(jiǎn)要的石蠟切片制作方法如下：4%甲醛組織固定、乙醇梯度脫水、浸蠟、包埋、切片、H.E.染色、二甲苯進(jìn)行透明處理。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)小鼠神經(jīng)系統(tǒng)的影響

2.1.1 對(duì)自主活動(dòng)和機(jī)體協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)的影響 蠐螬多糖給藥后，小鼠的一般行為和空白組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；給藥后，在曠野箱內(nèi)10 min內(nèi)活動(dòng)的格數(shù)空白組為(768.0±140.5)格；陽(yáng)性藥僅為(357.7±31.6)格，顯著低于空白組(P<0.05)；蠐螬多糖低、中、高劑量組均與空白組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見(jiàn)表1。此外，小鼠機(jī)體協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)的爬桿試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，蠐螬多糖給藥后對(duì)小鼠機(jī)能協(xié)調(diào)功能無(wú)顯著影響，而陽(yáng)性對(duì)照氯丙嗪則影響顯著，見(jiàn)表2。

表1 蠐螬多糖對(duì)小鼠自主活動(dòng)的影響 (格，

注：與空白組比較，**P<0.01。

表2 給藥后不同時(shí)間蠐螬多糖對(duì)小鼠爬桿評(píng)級(jí)的影響 (分,

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.1.2 對(duì)鎮(zhèn)靜催眠的影響 小鼠給藥30 min后戊巴比妥鈉閾下劑量睡眠發(fā)生的情況見(jiàn)表3。空白組無(wú)動(dòng)物入睡，地西泮組入睡率為90%，蠐螬多糖各劑量組也無(wú)小鼠入睡。給藥1 h后，各劑量組對(duì)戊巴比妥鈉催眠劑量小鼠睡眠時(shí)間的影響見(jiàn)表4。地西泮組的睡眠持續(xù)時(shí)間為(340.5±70.1)min，明顯高于空白組(111.0±29.7)min；蠐螬多糖低、中、高劑量組的睡眠持續(xù)時(shí)間分別為(145.7±52.8) min、(132.8±12.6 )min和(145.4±10.3 )min；中劑量和高劑量給藥組與空白組睡眠持續(xù)時(shí)間有顯著性差異(P<0.05或P<0.01)。

表3 蠐螬多糖對(duì)小鼠戊巴比妥鈉閾下劑量入睡率的影響

注：與空白組比較，**P<0.01。

2.2 對(duì)心血管系統(tǒng)的影響 采用小動(dòng)物無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)定系統(tǒng)，雖然對(duì)照組收縮壓指標(biāo)有波動(dòng)，但屬大鼠正常波動(dòng)范圍內(nèi)；各劑量蠐螬多糖組和對(duì)照組相比收縮壓和舒張壓均有明顯升高作用(P<0.05)；蠐螬多糖對(duì)大鼠心率也有一定加快作用，但低、中劑量與對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表5。

2.3 對(duì)呼吸系統(tǒng)的影響 3個(gè)劑量的蠐螬多糖對(duì)大鼠呼吸頻率均無(wú)明顯影響(P>0.05)。見(jiàn)表5。

2.4 亞急性毒性試驗(yàn)

2.4.1 一般癥狀 試驗(yàn)期間，給藥組大鼠未觀察到明顯異常反應(yīng)和中毒癥狀，行為活動(dòng)、毛發(fā)、攝食、飲水、大小便均正常。給藥組與對(duì)照組的體重差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表6。

2.4.2 對(duì)小鼠臟器系數(shù)的影響 試驗(yàn)期間，給藥組與對(duì)照組的心、肝、腎、脾、肺、胰腺臟器系數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表6。

組別潛伏期/s持續(xù)時(shí)間/min空白組85.5±26.2111.0±29.7地西泮組287.2±86.1??340.5±70.1??低劑量組130.2±71.5145.7±52.8中劑量組116.4±41.9132.8±12.6?高劑量組114.4±17.6??145.4±10.3??

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01。

組別指標(biāo)給藥前給藥后60min120min空白組收縮壓/mmHg103.7±3.2 105.3±4.0 106.3±5.1 舒張壓/mmHg89.7±3.884.0±11.483.7±2.3平均動(dòng)脈壓/mmHg94.3±3.591.3±9.0 91.3±3.1心率/t/min364.7±13.2366.0±7.0 376.0±10.5呼吸頻率/t/min66.5±8.469.5±12.269.3±8.4

續(xù)表5

組別指標(biāo)給藥前給藥后60min120min低劑量組收縮壓/mmHg110.7±4.2 111.3±5.5 126.0±1.0??舒張壓/mmHg88.0±3.099.3±4.0 105.7±2.1??平均動(dòng)脈壓/mmHg95.7±1.5103.3±4.2 112.7±2.1??心率/t/min365.7±9.1 375.0±10.0378.0±6.6 呼吸頻率/t/min 72.7±12.373.9±9.575.1±9.8中劑量組收縮壓/mmHg 117.7±4.2?? 127.7±2.3?? 126.0±6.2?舒張壓/mmHg95.3±5.197.0±1.7 107.7±1.5??平均動(dòng)脈壓/mmHg 102.7±2.5?107.3±0.6? 114.0±2.6?心率/t/min378.7±2.5 377.7±1.2?381.0±4.4呼吸頻率/t/min 76.3±12.578.0±11.7 78.8±11.4高劑量組收縮壓/mmHg 124.0±6.2?? 127.3±3.5?? 127.7±7.5?舒張壓/mmHg98.7±5.7102.0±5.3 104.0±8.5?平均動(dòng)脈壓/mmHg 107.3±5.5? 110.3±4.6? 113.3±8.6?心率/t/min384.7±11.6 394.0±5.3?? 393.0±1.0?呼吸頻率/t/min 69.0±10.8 69.4±12.2 70.4±13.9

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01。

指標(biāo)對(duì)照組低劑量組高劑量組體重/g425.8±148.1427.7±57.0 385.8±108.3心臟指數(shù)(10×-3)3.12±0.283.13±0.463.06±0.24肝臟指數(shù)(10×-2)3.68±0.283.72±0.413.85±0.42脾臟指數(shù)(10×-3)2.32±0.522.31±0.322.43±0.20肺臟指數(shù)(10×-3)4.79±0.894.89±0.335.02±0.40腎臟指數(shù)(10×-3)3.97±0.393.94±0.233.96±0.36胰腺指數(shù)(10×-3)2.39±1.132.41±0.552.37±0.86

2.4.3 對(duì)血常規(guī)指標(biāo)的影響 由血液生理指標(biāo)可見(jiàn)，蠐螬多糖給藥14 d，血液中紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量、紅細(xì)胞積壓差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)，高劑量蠐螬多糖組的白細(xì)胞數(shù)高于正常組(P<0.05)，血小板數(shù)量也增加明顯(P>0.01)。見(jiàn)表7。

組別白細(xì)胞計(jì)數(shù)/×1012/L紅細(xì)胞計(jì)數(shù)/×109/L血紅蛋白/g/L紅細(xì)胞積壓/%血小板計(jì)數(shù)/×109/L對(duì)照組5.31±2.846.52±2.46109.7±30.737.32±14.01759.6±508.9低劑量組7.02±3.116.55±2.08113.2±31.236.14±10.59825.1±543.6高劑量組7.41±3.23?6.72±1.44124.7±25.539.26±7.81 1050.5±398.1??

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.4.4 對(duì)血液生化指標(biāo)的影響 蠐螬多糖給藥14 d,對(duì)ALT、T-BIL、D-BIL、LDL-C、TBA、LDHi、LDH-L、CRE有一定的下調(diào)趨勢(shì)，其中AST、TC顯著低于空白組(P<0.05)，ALB、HDL-C極顯著低于空白組(P<0.01)。蠐螬多糖組的GLU、ALP、UA和CK略高于正常組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P> 0.05)。見(jiàn)表8。

表8 蠐螬多糖對(duì)大鼠血清生化指標(biāo)的影響 (n=3～9)

注：與空白組比較，*P<0.05，**P<0.01。

2.4.5 病理學(xué)觀察結(jié)果 病理組織切片可以在細(xì)胞水平上反映毒物是否對(duì)器官造成了損傷。實(shí)驗(yàn)對(duì)心、肝、脾、肺、腎、胰腺、腦等器官制成的切片進(jìn)行顯微鏡鏡檢(如圖1)所示。結(jié)果表明對(duì)照組和蠐螬多糖實(shí)驗(yàn)組心肌細(xì)胞均無(wú)顆粒變性、脂肪變性等，細(xì)胞之間均未發(fā)現(xiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，毛細(xì)血管均無(wú)內(nèi)皮細(xì)胞脹、脫落等病理變化；對(duì)照組和蠐螬多糖實(shí)驗(yàn)組肝臟中肝小葉結(jié)構(gòu)均完整清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，無(wú)明顯病理變化；對(duì)照組和蠐螬多糖實(shí)驗(yàn)組脾臟紅髓白髓界限清晰，可以看出明顯的生發(fā)中心；對(duì)照組和蠐螬多糖實(shí)驗(yàn)組肺泡結(jié)構(gòu)完整無(wú)水腫等現(xiàn)象；對(duì)照組和蠐螬多糖實(shí)驗(yàn)組腎小球結(jié)構(gòu)完整均一，均無(wú)腫大、出血現(xiàn)象；對(duì)照組和蠐螬多糖實(shí)驗(yàn)組的胰腺和腦也無(wú)明顯病理變化。

圖1 大鼠臟器組織病理切片(HE×200)

3 討論

一般藥理學(xué)研究也稱為安全性藥理學(xué)研究，主要觀察受試物在治療范圍或治療范圍以上劑量時(shí)，潛在的不期望出現(xiàn)的對(duì)生理功能的不良影響，包括對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等方面的影響，為新藥用于臨床提供安全性依據(jù)，是新藥研究的重要內(nèi)容[18-20]。

本實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格參照中藥一般藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)推薦方法[11-12]，評(píng)價(jià)對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的影響時(shí)采用行為藥理實(shí)驗(yàn)法類別下的鎮(zhèn)靜藥物實(shí)驗(yàn)法和催眠藥物實(shí)驗(yàn)法。鎮(zhèn)靜催眠藥一般都能延長(zhǎng)戊巴比妥鈉的睡眠時(shí)間，本實(shí)驗(yàn)選用戊巴比妥鈉和氯丙嗪作為陽(yáng)性藥物構(gòu)建模型；使用BALB/c小鼠分別進(jìn)行一般行為和自主活動(dòng)機(jī)體協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)、戊巴比妥鈉閾下催眠劑量和睡眠劑量試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)所用BALB/c小鼠是國(guó)際近交系小鼠中常用品系，周曉冰等[21]也曾用BALB/c小鼠評(píng)價(jià)瑞格列汀對(duì)小鼠自主活動(dòng)及協(xié)同睡眠的影響。評(píng)價(jià)對(duì)呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)影響時(shí)選用常用的健康SD大鼠，采用直接測(cè)定指標(biāo)的方法觀察給藥后不同時(shí)間大鼠呼吸頻率、收縮壓、舒張壓、心率變化以評(píng)價(jià)蠐螬多糖對(duì)動(dòng)物呼吸系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)的影響。亞急毒實(shí)驗(yàn)主要觀察動(dòng)物在短期內(nèi)是否出現(xiàn)毒性反應(yīng)，為長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)和臨床研究提供基礎(chǔ)參考資料。目前常用健康SD大鼠，使用急性毒性給藥方案，于給藥后詳細(xì)記錄動(dòng)物的飲食、飲水、死亡和尸體檢驗(yàn)情況，并記錄臟器與體重的變化，測(cè)定血液生化指標(biāo)及病理檢查。該法廣泛用于毒理學(xué)評(píng)價(jià)，王振宇等[22]也曾用SD大鼠評(píng)價(jià)新型鉑類化合物的肝毒性。

本研究統(tǒng)計(jì)分析組間比較采用單因素方差分析或t檢驗(yàn)。t檢驗(yàn)法又稱t值法顯著性檢驗(yàn)，是最常用的處理定量資料的統(tǒng)計(jì)方法，該檢驗(yàn)法在本研究中被用于兩組均數(shù)的顯著性檢驗(yàn)；單因素方差分析適用于實(shí)驗(yàn)中只有一個(gè)因素改變的試驗(yàn)，本研究以蠐螬多糖給藥劑量為單因素，采用單因素方差分析進(jìn)行組間比較用于判斷低、中、高不同給藥劑量對(duì)實(shí)驗(yàn)指標(biāo)的影響是否顯著。

蠐螬多糖是將蠐螬經(jīng)粉碎、堿水提取、醇液沉淀、雙氧水脫色等一系列步驟分離純化得到的，蠐螬多糖因具有抗腫瘤作用一直受到關(guān)注。歸海霞等[23]發(fā)現(xiàn)蠐螬的活性成分多糖還具有降脂作用。但蠐螬多糖對(duì)心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)以及肝臟功能等方面的副作用尚未有報(bào)道，因此，本實(shí)驗(yàn)針對(duì)蠐螬多糖開(kāi)展了一般藥理學(xué)研究，為補(bǔ)充和完善其安全性實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)奠定基礎(chǔ)。本研究發(fā)現(xiàn)蠐螬多糖給藥后，高、中、低3個(gè)劑量組對(duì)小鼠姿勢(shì)、步態(tài)、肌顫、眼球震顫等一般行為無(wú)明顯影響，不影響小鼠自主活動(dòng)，與戊巴比妥鈉閾下劑量無(wú)協(xié)同作用。蠐螬多糖3個(gè)劑量組經(jīng)腹腔注射后可以升高大鼠血壓和心率，但都屬于血壓和心率正常范圍。

目前國(guó)內(nèi)外還未見(jiàn)有關(guān)蠐螬多糖的毒理學(xué)研究報(bào)道。在課題組前期急性毒性實(shí)驗(yàn)中，無(wú)法測(cè)出蠐螬多糖半數(shù)致死量，改測(cè)腹腔注射最大耐受量為8 g/kg，表明該多糖毒副作用很小或無(wú)毒副作用。亞急性毒性試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，蠐螬多糖各劑量組對(duì)大鼠正常活動(dòng)、體重、臟器系數(shù)影響的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各主要臟器也無(wú)明顯病理學(xué)改變；盡管對(duì)血常規(guī)、血液生化指標(biāo)中的血小板數(shù)、AST、ALB、HDL-C、TC有一定影響，但仍在正常范圍內(nèi)，進(jìn)一步說(shuō)明蠐螬多糖安全范圍大，具有較高的臨床用藥安全性。

綜上所述，本研究初步證實(shí)蠐螬多糖在藥效學(xué)有效劑量范圍內(nèi)有較高的安全性，并為開(kāi)發(fā)蠐螬多糖相關(guān)新藥提供了一般藥理學(xué)數(shù)據(jù)。