貴州省食品藥品檢驗(yàn)所，貴州 貴陽 550004

本品為五加科植物Kalopanaxseptemlobus(Thunb.) Koidz.的干燥樹皮，全年均可采收。貴州民間常用于治療腰膝肩臂疼痛、風(fēng)濕痹痛、跌打損傷等[1-2]，目前收載于2003版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中，但該標(biāo)準(zhǔn)僅從性狀和顯微鑒別對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制，為完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，達(dá)到有效控制藥材質(zhì)量的目的，更好地發(fā)揮其治療作用，保障用藥的安全、穩(wěn)定及有效，需要對(duì)刺楸皮進(jìn)行深一步的研究。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道刺楸中的皂苷成分主要為刺楸皂苷A,其水解產(chǎn)物常春藤皂苷元、阿拉伯糖及鼠李糖[3-4]。常春藤皂苷元是刺楸皮中主要活性成分，具有保肝、抗腫瘤、止痛、止痙、抗真菌、殺蟲等多種藥理活性[5-6]，與刺楸皮的臨床療效具有相關(guān)性。因此采用高效液相色譜對(duì)刺楸皮中常春藤皂苷元進(jìn)行含量測(cè)定，以達(dá)到完善質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及用藥的安全性和穩(wěn)定性的目的，為全面評(píng)價(jià)刺楸皮藥材質(zhì)量提供參考。

1 材料

1.1 儀器 Ultimate 3000 高效液相色譜儀(美國)，KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)，METTLER TOLEDO MS204TS 萬分之一電子天平(梅特勒-托利多儀器有限公司)

1.2 試藥與試劑 乙腈為色譜純，甲醇、磷酸、鹽酸均為分析純，水為超純水。刺楸皮3批樣品；常春藤皂苷元(批號(hào)：11733-201205，質(zhì)量分?jǐn)?shù)98.3%)中國食品藥品檢定研究院提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.1%磷酸(60∶40)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL/min，進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取常春藤皂苷元對(duì)照品20.29 mg，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1 mL至10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得對(duì)照品溶液﹙81.16 μg/mL﹚。

2.3 供試品溶液的制備方法 取過三號(hào)篩的粉末約 0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75%的甲醇25 mL，加熱回流30 min，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL置具塞錐形瓶中，加入1.5 mL鹽酸，加熱回流2 h，取下，放冷，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，用75%的甲醇定容至25 mL，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液，照“色譜條件”項(xiàng)下進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果供試品與對(duì)照品在對(duì)應(yīng)的位置出現(xiàn)色譜峰。色譜圖見圖1。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液2 μL、5 μL、10 μL、15 μL、20 μL、25 μL注入高效液相色譜儀器, 測(cè)定峰面積。計(jì)算回歸方程：y=6.7155x-0.0013，r=0.9999﹙n=6﹚，表明常春藤皂苷元在0.1632～2.0400 μg的進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量10 μL，測(cè)定常春藤皂苷元的峰面積，計(jì)算其RSD為0.46%，結(jié)果表明，儀器精密度好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一樣品，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備1份供試品溶液，分別于0，2 h，4 h，6 h，8 h，10 h，24 h各進(jìn)樣10 μL，測(cè)定常春藤皂苷元的峰面積，計(jì)算RSD為0.95%，結(jié)果表明，供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，進(jìn)樣量10 μL，測(cè)定常春藤皂苷元的峰面積，平均含量13.1470 /g，計(jì)算其RSD為0.62%，表明該方法重現(xiàn)性好。

2.9 加樣回收率試驗(yàn) 取已測(cè)定含量的刺楸皮樣品(平均含量13.1470 mg/g)約0.25 g，精密稱定，置于三角燒瓶中，分別精密加入常春藤皂苷元量對(duì)照品溶液(0.1058 mg/mL)25 mL，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，計(jì)算常春藤皂苷元的平均回收率99.19%，RSD為1.18%。見表1。

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.10 不同色譜柱的考察 取同一樣品，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備1份供試品溶液，分別以不同品牌C18色譜柱(賽默飛Acclaim 120、依利特Hypersil ODS2、安捷倫Eclipse XDB-C18)各進(jìn)樣10 μL，測(cè)定常春藤皂苷元的峰面積，計(jì)算含量，RSD為0.48%，結(jié)果表明不同品牌十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱對(duì)含量測(cè)定無顯著差異。

2.11 不同流速的考察 取同一樣品，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備1份供試品溶液，分別以流速(0.8 mL/min、1.0 mL/min、1.2 mL/min)各進(jìn)樣10 μL，測(cè)定常春藤皂苷元的峰面積，計(jì)算含量，RSD為0.60%。

2.12 范圍 按正常測(cè)定取樣量的80%和120%取樣測(cè)定，考察在高低取樣量測(cè)定的精密度。取同一樣品，按“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備1份供試品溶液，分別以不同取樣量(0.4 g、0.5 g、0.6 g)各進(jìn)樣10 μL，測(cè)定常春藤皂苷元的峰面積，計(jì)算含量，RSD為0.68%。

2.14 樣品含量測(cè)定 按上述色譜條件，取刺楸皮“供試品溶液的制備”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定常春藤皂苷元的含量，結(jié)果表2。

表2 樣品測(cè)定結(jié)果

3 討論

常春藤皂苷元屬于齊墩果烷型五環(huán)三萜類化合物,一般可溶于水,易溶于熱水、熱甲醇及熱乙醇,不溶于乙醚、苯等極性小的有機(jī)溶劑[6]。利用常春藤皂苷元在甲醇中有較好的溶解度這一特性，選擇甲醇作為提取溶劑，再使用鹽酸酸水解進(jìn)一步的提取皂苷元成分，通過本試驗(yàn)篩選出最佳的甲醇濃度為75%，提取方法為回流，鹽酸最佳取樣量為1.5 mL。該測(cè)定方法準(zhǔn)確，簡(jiǎn)單，具有較高的重現(xiàn)性。