張啟龍，沈光年，鄭雪瑩，周德剛，張 瑋，劉?，?，劉愛玲，張 躍，傅彩霞，劉曉冬

（1. 北京市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，北京 102629；2. 中國(guó)動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心，山東青島 266032）

北京市從2015年開始全面落實(shí)中央決策部署， 有序推進(jìn)“非首都核心功能”的疏解，不斷加強(qiáng)農(nóng)業(yè)面源污染防治，進(jìn)行了相關(guān)畜禽養(yǎng)殖清退工作，奶牛存欄量由當(dāng)時(shí)的16萬頭左右減至目前的8萬頭左右，同時(shí)加強(qiáng)了奶牛疫病防控和奶產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)管，尤其是奶牛結(jié)核病等人獸共患病的控制與凈化，以保障公共衛(wèi)生安全。近幾年，北京市奶牛結(jié)核病得到了有效控制，奶牛結(jié)核病血漿陽(yáng)性率穩(wěn)定控制在1.0%左右。2017年5月21日，北京市密云區(qū)某奶牛場(chǎng)送檢奶牛新鮮血漿173份，依據(jù)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)《結(jié)核分枝桿菌γ-干擾素體外檢測(cè)方法》（SN/T 3312—2012），進(jìn)行牛結(jié)核病檢測(cè)，檢出51份陽(yáng)性，樣品陽(yáng)性率高達(dá)29.5%。為查明原因，及時(shí)處置和防控疫病，前往現(xiàn)場(chǎng)進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查。

1 方法

1.1 病例定義

1.1.1 疑似病例 按照《結(jié)核分枝桿菌γ-干擾素體外檢測(cè)方法》（SN/T 3312—2012）診斷為陽(yáng)性的病例。

1.1.2 確診病例 經(jīng)《動(dòng)物結(jié)核病診斷技術(shù)》（GB/T 18645—2002），采用牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)，局部炎性反應(yīng)皮厚差≥2.0 mm的疑似病例。

1.2 調(diào)查方式及內(nèi)容

以實(shí)地勘察方式，了解奶牛場(chǎng)周邊養(yǎng)殖情況、內(nèi)部布局；與密云區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心工作人員、奶牛場(chǎng)飼養(yǎng)管理人員進(jìn)行訪談，獲取本場(chǎng)及周圍養(yǎng)殖場(chǎng)情況；查閱相關(guān)檔案記錄，獲取牛場(chǎng)免疫、飼料購(gòu)入、調(diào)運(yùn)、檢疫、人員車輛進(jìn)出等信息。

1.3 檢測(cè)方法

依據(jù)《動(dòng)物傳染病學(xué)》[1]和《動(dòng)物結(jié)核病 診 斷 技 術(shù)》（GB/T18645—2002）， 采 用Mycobacterium bovisGamma Interferon Test Kit for Cattle（批號(hào)BG170212Z，Prionics AG公司產(chǎn)品）和牛型結(jié)核分枝桿菌PPD（批號(hào)201610，哈藥集團(tuán)產(chǎn)品），進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室診斷和臨場(chǎng)皮試診斷。

1.4 數(shù)據(jù)分析

用Excel 2016整理采集到的數(shù)據(jù)，運(yùn)用SPSS 23.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 發(fā)病牛場(chǎng)概況

該奶牛場(chǎng)位于北緯 40.518 47°、東經(jīng) 117.167 45°，毗鄰一條公路，坐落于一座小山的半山坡上，周邊3 km范圍內(nèi)沒有奶牛場(chǎng)（圖1），場(chǎng)門前有一小池塘。該奶牛場(chǎng)建于2012年，共存欄奶牛173頭，其中犢牛28頭、青年牛47頭、泌乳期牛61頭、干奶期牛37頭。該場(chǎng)每年檢測(cè)結(jié)核病1次，每次檢測(cè)均能達(dá)到全覆蓋。該場(chǎng)養(yǎng)殖、消毒檔案較健全。據(jù)場(chǎng)主介紹：該場(chǎng)員工比較固定，沒有串場(chǎng)行為；入口消毒池能做到每周更換1次；由于密云區(qū)正在進(jìn)行養(yǎng)殖清退行動(dòng)，2016年7月后，該場(chǎng)未引入新的牛只；2016年9月，送檢樣品的結(jié)核分枝桿菌γ-干擾素試驗(yàn)結(jié)果均為陰性；2016年11月，考慮成本問題，從內(nèi)蒙古赤峰市購(gòu)入一批飼草，之前一直飼喂進(jìn)口飼草。

圖1 牛場(chǎng)地理位置（紅色標(biāo)注）

該牛場(chǎng)設(shè)有辦公區(qū)、儲(chǔ)料間、擠奶廳、產(chǎn)房、犢牛舍、青年牛舍、干奶期牛舍、泌乳牛舍，具體分布見圖2。

2.2 疫病與處置情況

2017年5月21日通過干擾素試驗(yàn)檢出51頭可疑病例，6月12日經(jīng)現(xiàn)場(chǎng)皮試確診36頭。疑似病例和確診病例主要集中在青年牛、泌乳牛和干奶期牛（表1）。對(duì)確診的陽(yáng)性牛，依據(jù)《牛結(jié)核病防治技術(shù)規(guī)范》和《北京市奶牛布病凈化實(shí)施方案》進(jìn)行全部撲殺，并作無害化處理，同時(shí)對(duì)牛場(chǎng)進(jìn)行消毒，密切觀察和監(jiān)測(cè)剩余牛只。

2.3 風(fēng)險(xiǎn)因素

現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，場(chǎng)主因考慮成本問題，僅對(duì)泌乳期奶牛飼喂進(jìn)口飼草，而對(duì)青年牛和干奶期牛飼喂產(chǎn)自內(nèi)蒙古赤峰市的國(guó)產(chǎn)飼草，暫未對(duì)犢牛飼喂飼草，因此存在“不同生長(zhǎng)時(shí)期”和“飼喂國(guó)產(chǎn)飼草”兩個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素。分析結(jié)果（表2）顯示，不同生長(zhǎng)時(shí)期奶牛間的檢測(cè)結(jié)果差異不顯著（P＞0.05），飼喂產(chǎn)自內(nèi)蒙古赤峰市國(guó)產(chǎn)飼草的奶牛陽(yáng)性率顯著高于未飼喂的（P＜0.05）。

圖2 牛場(chǎng)布局

表1 不同奶牛群病例分布 單位：頭

表2 不同風(fēng)險(xiǎn)因素分析結(jié)果

4 討論

牛結(jié)核病是一種由牛分枝桿菌（Mycobacterium bovis）引起的一種慢性細(xì)菌性人獸共患傳染病[1]，除主要經(jīng)呼吸道感染外，消化道傳播是牛分枝桿菌的第二常見傳播途徑[2]。王華等[3]提到，牛結(jié)核分枝桿菌在環(huán)境中具有較高的耐受性。O'Reilly等[4]和Daborn等[5]闡述了牛結(jié)核病可以通過墊料或者污染的干草等間接傳播給牛。李智勇等[6]報(bào)道，內(nèi)蒙古地區(qū)奶牛結(jié)核病陽(yáng)性率為5.6%（0～22.9%），該地區(qū)的牛養(yǎng)殖主要以放牧為主。本研究通過現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查以及相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析，排除其他可能風(fēng)險(xiǎn)因素后，推斷引起該奶牛場(chǎng)發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)因素可能為飼喂從內(nèi)蒙古赤峰市購(gòu)入的飼草。

牛結(jié)核菌素（PPD）皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)（TST）是世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）推薦的唯一國(guó)際貿(mào)易指定檢測(cè)方法，也是我國(guó)目前確診牛結(jié)核病的標(biāo)準(zhǔn)方法。牛結(jié)核病ELISA γ-干擾素檢測(cè)試驗(yàn)（IFN-γ-ELISA）被廣泛用于動(dòng)物結(jié)核病的初篩[7]。本調(diào)查中的兩種檢測(cè)方法符合率較低，可能與人員操作、不同的刺激抗原及人員實(shí)際測(cè)量誤差等有關(guān)。我國(guó)現(xiàn)行的牛結(jié)核病檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)操作繁瑣，易產(chǎn)生應(yīng)激，而IFN-γ測(cè)定法的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便、快速、通量高[8]。IFN-γ測(cè)定法已經(jīng)在澳大利亞、愛爾蘭、新西蘭、阿根廷、美國(guó)等完成了田間試驗(yàn)，證明該方法的敏感性為77.0%～93.6%，高于結(jié)核菌素試驗(yàn)的敏感性（65.6%～84.4%），目前在澳大利亞和新西蘭已被認(rèn)可為正式的檢測(cè)方法[9]，并應(yīng)用于法國(guó)斗牛群結(jié)核病凈化檢測(cè)[10]。2018年上海市也將IFN-γ測(cè)定方法推廣應(yīng)用到奶牛結(jié)核病凈化場(chǎng)驗(yàn)收中。因此，建議相關(guān)管理部門將IFN-γ測(cè)定法進(jìn)行大范圍推廣應(yīng)用，以節(jié)省成本，減少對(duì)牛群生產(chǎn)性能的影響。

北京市自2010年實(shí)施奶牛結(jié)核病凈化后，牛結(jié)核病陽(yáng)性率有所下降[11]，但近年來又出現(xiàn)波動(dòng)，因此相關(guān)方應(yīng)進(jìn)一步重視牛結(jié)核病凈化工作。養(yǎng)殖場(chǎng)應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，識(shí)別和控制相應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)因素；監(jiān)管部門應(yīng)加強(qiáng)風(fēng)險(xiǎn)因素的來源控制，提高檢測(cè)方法的敏感性，推進(jìn)簡(jiǎn)捷、敏感檢測(cè)方法的推廣應(yīng)用，探究高品質(zhì)牛奶市場(chǎng)準(zhǔn)入機(jī)制，從而有效凈化奶牛結(jié)核病，切實(shí)保障公共衛(wèi)生安全。

5 結(jié)論

本次調(diào)查采用臨場(chǎng)皮試、詢問場(chǎng)主、查看現(xiàn)場(chǎng)和實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)等方法，確認(rèn)了北京市密云區(qū)某奶牛場(chǎng)的36頭牛結(jié)核病陽(yáng)性病例；通過風(fēng)險(xiǎn)分析，推測(cè)飼喂從內(nèi)蒙古赤峰市購(gòu)入的飼草是主要的風(fēng)險(xiǎn)因素。因此，北京市應(yīng)慎重從牛結(jié)核病流行地區(qū)購(gòu)入飼草，同時(shí)要加強(qiáng)牛結(jié)核病檢測(cè)和牛場(chǎng)消毒，及時(shí)淘汰陽(yáng)性奶牛，盡快使奶牛場(chǎng)達(dá)到結(jié)核病凈化標(biāo)準(zhǔn)。