唐語謙,王諳,朋賢,余以剛,李曉鳳,*
(1.華南理工大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,廣東 廣州 510640;2.華南理工大學(xué)制漿造紙國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東 廣州 510640)
雌激素及雌激素類化合物是廣泛存在于人體、家禽、農(nóng)產(chǎn)品、廢水處理廠、工業(yè)生產(chǎn)廠及自然環(huán)境中的一種類固醇類物質(zhì),主要可分為環(huán)境雌激素和內(nèi)源性雌激素。雌激素具有促進(jìn)雌性動(dòng)物第二性征發(fā)育及性器官成熟等生理作用,也是脂質(zhì)代謝、炎癥和血管各指數(shù)穩(wěn)定的重要調(diào)節(jié)劑。研究表明內(nèi)源性雌激素可以有效降低絕經(jīng)前女性動(dòng)脈粥硬化性血管疾病的發(fā)生,絕經(jīng)后的女性通過雌激素藥物維持體內(nèi)的雌激素水平可以有效降低心血管類疾病的風(fēng)險(xiǎn)[1]。但同時(shí),雌激素及雌激素類化合物在機(jī)體內(nèi)的代謝、運(yùn)轉(zhuǎn)和積累都會(huì)對(duì)人類健康、動(dòng)植物安全性造成一系列的問題,包括引起小孩的性早熟、生理功能發(fā)育異常及引發(fā)成人的乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌和生殖異常等。
在關(guān)于雌激素及其代謝物對(duì)絕經(jīng)前和絕經(jīng)后的女性的作用研究中,結(jié)果表明內(nèi)源性雌激素對(duì)乳腺癌的發(fā)展起到了關(guān)鍵作用[2]。Key 等[3]匯總分析了9 項(xiàng)雌激素物質(zhì)對(duì)663 名女性中未接觸過外源性雌激素情況下患有乳腺癌的女性的影響,結(jié)果表明隨著雌激素水平的上升,患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)明顯增加。Fuhrman 等[4]分別研究了15 種雌激素和雌激素代謝物的循環(huán)水平與代謝途徑對(duì)乳腺癌風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性,研究顯示患乳腺癌的風(fēng)險(xiǎn)與雌二醇水平呈正相關(guān)。大量數(shù)據(jù)表明雌激素會(huì)也增大男性患前列腺癌的幾率。Qin 等[5]調(diào)查了不同地區(qū)牛奶中雌激素的含量和居民牛奶攝入量及該地區(qū)男性患前列腺癌的人數(shù),數(shù)據(jù)顯示西方以雌激素含量較高的牛奶、乳制品為主食的地區(qū)造成了其男性更高的前列腺癌發(fā)生率。Kosti 等[6]研究了尿液中的雌激素和雌激素代謝物對(duì)引起前列腺癌的影響,發(fā)現(xiàn)在所有的雌激素代謝物濃度中,前列腺癌患者的兒茶酚雌激素濃度高于健康男性。Carlo 等[7]評(píng)估了男性視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞中性類固醇激素波動(dòng),結(jié)果表明性類固醇波動(dòng)是視網(wǎng)膜環(huán)境變化的誘導(dǎo)因素,能引起眼睛老化等生理問題。
目前在工業(yè)生產(chǎn)中,雌激素因?qū)μ穷?、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的合成起到重要作用而廣泛應(yīng)用于動(dòng)物飼料、食品、化妝品中,功能發(fā)揮后多余的雌激素往往會(huì)通過食物鏈直接或間接進(jìn)入到人體,直接傷害人類健康[8],并且一些公司為了節(jié)省商品制作成本,直接選擇忽略飼料及食品中的雌激素含量,造成了頻繁的雌激素污染事件。此外,在糧食中污染最嚴(yán)重的霉菌毒素之一——玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)作為雌激素的結(jié)構(gòu)類似物具有雌激素樣作用,能造成動(dòng)物急慢性中毒,引起繁殖機(jī)能異常甚至死亡,給畜牧場(chǎng)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失并危害食用人群的健康。針對(duì)當(dāng)下現(xiàn)狀,雌激素檢測(cè)手段的重要性不言而喻,本文總結(jié)了一些針對(duì)液態(tài)環(huán)境常用的雌激素檢測(cè)方法,重點(diǎn)介紹近幾年發(fā)展的轉(zhuǎn)基因生物反應(yīng)器在雌激素檢測(cè)方面的應(yīng)用。
轉(zhuǎn)基因生物反應(yīng)器是利用微生物細(xì)胞通過基因工程技術(shù)手段將外源基因轉(zhuǎn)化到受體中進(jìn)行高效表達(dá),從而獲得具有重要應(yīng)用價(jià)值的表達(dá)產(chǎn)物的生命系統(tǒng)。目前關(guān)于該方法的研究中使用的表達(dá)載體主要為酵母細(xì)胞,使用的外源基因主要是β-半乳糖苷酶(LacZ 基因)、綠色熒光蛋白(yEGFP 基因)和熒光素酶(Luc 基因)等。
Black 等[9]基于LacZ 基因構(gòu)建了酵母雌激素篩選系統(tǒng),如圖1所示。
圖1 雙質(zhì)粒重組酵母系統(tǒng)Fig.1 Double plasmid recombinant yeast system
該系統(tǒng)將人體雌激素受體(human estrogen receptor,hERα)和攜帶雌激素反應(yīng)元件(estrogen response element,ERE)的表達(dá)質(zhì)粒一起整合到釀酒酵母細(xì)胞中,其中ERE 控制報(bào)告基因β-半乳糖苷酶的表達(dá),在檢測(cè)環(huán)境含有雌激素活性的化學(xué)物質(zhì)的情況下,酵母細(xì)胞分泌的β-半乳糖苷酶分解培養(yǎng)基中的顯色底物氯酚紅β-D-吡喃半乳糖苷(chlorophenol red β-D-galactopyranoside,CPRG),黃色底物分解為紅色產(chǎn)物,其濃度可通過分光光度法進(jìn)行測(cè)量。
Rikke Brix 等[10]評(píng)估了該重組酵母系統(tǒng)作為環(huán)境樣品的預(yù)篩選工具的適用性,將樣品連續(xù)稀釋后加入含有顯色底物和重組酵母細(xì)胞的培養(yǎng)基中,結(jié)果顯示樣品中的17β-雌二醇的檢測(cè)水平為0.681 ng/mL,檢測(cè)限為 0.084 ng/mL~0.73 ng/mL。Vieira Dias 等[11]使用該重組酵母檢測(cè)系統(tǒng)評(píng)估了巴西里約熱內(nèi)盧天然水域和官渡河水樣中的雌激素活性物質(zhì),結(jié)果顯示在里約熱內(nèi)盧河流的三個(gè)采樣地點(diǎn)采集的水樣的17β-雌二醇等價(jià)值(17β-estradiol equivalents,EEQ)最大濃度為16 ng/L,官渡河采集樣品中最大EEQ 值為15 ng/L。Beck 等[12]使用該重組酵母系統(tǒng)檢測(cè)了德國(guó)波羅的海沿海地區(qū)地表水的總雌激素活性物質(zhì)含量,檢測(cè)結(jié)果顯示Inner Wismar Bay,Eggers Wiek 和達(dá)爾斯半島地區(qū)的 EEQ 值范圍分別為 0.06 ng/L~0.34 ng/L、0.03 ng/L~0.41 ng/L 和 0.17 ng/L~0.28 ng/L。
Hairong Xu 等[13]基于綠色熒光蛋白(yEGFP 基因)構(gòu)建了一株可以快速篩選和監(jiān)測(cè)環(huán)境中雌激素化學(xué)物質(zhì)的重組酵母細(xì)胞,該菌株先后插入兩個(gè)質(zhì)粒,包括一個(gè)含有與GPD 基因啟動(dòng)子融合的人雌激素受體(hER)cDNA 質(zhì)粒和另一個(gè)由 ERE 控制下插入yEGFP 基因(綠色熒光蛋白)的質(zhì)粒,檢測(cè)樣品中雌激素活性化學(xué)物質(zhì)的濃度可通過表達(dá)的綠色熒光蛋白的量來進(jìn)行判定。Sylwia 等[14]根據(jù)此重組酵母表達(dá)系統(tǒng)檢測(cè)了從波蘭農(nóng)村Leczna 和盧布林省工業(yè)區(qū)ZAPulawySA 的12 個(gè)農(nóng)場(chǎng)收集的奶牛產(chǎn)奶樣品的雌激素含量,檢測(cè)結(jié)果顯示農(nóng)村和工業(yè)區(qū)的牛奶樣品中檢測(cè)到含有雌激素活性的樣品分別占有43%、57%,其中農(nóng)村地區(qū)樣品的雌激素EEQ 值范圍為0.30 ng/L~0.44 ng/L,工業(yè)地區(qū)樣品的雌激素EEQ 值為0.29 ng/L~0.49 ng/L。
Salste L 等[15]通過化學(xué)分析和基于熒光素酶(Luc基因)構(gòu)建的重組酵母表達(dá)系統(tǒng)測(cè)定了從市政污水處理廠收集的廢水樣品中的17β-雌二醇、雌酮、雌三醇和17α-炔雌醇等雌激素和雌激素活性物質(zhì)的含量,結(jié)果顯示雌激素的平均水平值為4 ng/L~7 ng/L。除了酵母表達(dá)系統(tǒng),也有研究者基于其他的表達(dá)載體構(gòu)建了雌激素檢測(cè)反應(yīng)器。Christoph Zutz 等[16]通過基因工程技術(shù)構(gòu)建了一株含有人類雌激素受體α 和β-半乳糖苷酶基因的修飾菌株構(gòu)巣曲霉Aspergillus nidulans,使用血液、尿液、唾液和牛奶樣品對(duì)該真菌生物反應(yīng)器的雌激素反應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證,并將結(jié)果與酶聯(lián)反應(yīng)法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較,檢測(cè)結(jié)果基本顯示出一致性,此外,該生物反應(yīng)器檢測(cè)樣品不需要提前進(jìn)行預(yù)處理即可直接檢測(cè),對(duì)于17β-雌二醇等雌激素檢測(cè)限低至1 ng/L。Thomas Hahn 等[17]通過基因工程構(gòu)建了在Arxula adeninivorans 衍生的葡糖淀粉酶(glucoamylase,GAA)啟動(dòng)子控制下表達(dá)人體雌激素受體(h ERα)和由雌激素感應(yīng)元件(estrogen response element,ERE)控制表達(dá)克雷伯氏菌植酸酶(klebsiella phytase,PHYK)報(bào)告基因的重組Arxula adeninivorans 表達(dá)系統(tǒng),在雌激素化合物的存在下表達(dá)系統(tǒng)誘導(dǎo)表達(dá)植酸酶,研究者探索了不同的啟動(dòng)子位置插入不同數(shù)量的雌激素感應(yīng)元件對(duì)報(bào)告基因表達(dá)的影響,在所有的重組細(xì)胞中,雌激素活性的檢測(cè)限先后達(dá)到了10 ng/L 和5 ng/L。
生物反應(yīng)器檢測(cè)法是20 世紀(jì)90 年代才發(fā)展起來的雌激素研究方法,該方法除了前期構(gòu)建表達(dá)系統(tǒng)需要一定的技術(shù)基礎(chǔ),在檢測(cè)階段不僅費(fèi)時(shí)少、靈敏度高、特異性強(qiáng),在試驗(yàn)操作和成本上也具有極大的優(yōu)勢(shì)。
高效液相色譜方法是20 世紀(jì)80 年代至90 年代發(fā)展的一門科學(xué)檢測(cè)技術(shù),因其靈敏度高、檢測(cè)時(shí)間短、可同時(shí)進(jìn)行定性和定量檢測(cè)而得到快速?gòu)V泛的應(yīng)用,包括在科學(xué)研究中各種化學(xué)物質(zhì)的研究與檢測(cè)。在雌激素活性物質(zhì)檢測(cè)方面,高效液相色譜主要應(yīng)用于牛奶、農(nóng)產(chǎn)品等樣品的檢測(cè)。Yan 等[18]使用固相萃取-高效液相色譜技術(shù),快速測(cè)定了從中國(guó)新鄉(xiāng)隨機(jī)采集的3 種不同品牌的牛奶樣品中的雌酮、雌二醇和雌三醇含量,這三種雌激素物質(zhì)在牛奶樣品中的平均覆蓋率分別為92.6%、90.9%、104.1%,在牛奶樣品中的平均含量分別為 0.275、0.247、0.371 μg/mL,該液相檢測(cè)條件對(duì)3 種雌激素物質(zhì)的檢測(cè)限分別為0.028、0.025、0.045 μg/mL。丁郭影等[19]以 HPLC 技術(shù)為基礎(chǔ),結(jié)合微波輔助提取法,建立了牛奶中雌激素檢測(cè)的方法,在最佳的液相色譜條件及微波工藝條件下,研究結(jié)果得到雌二醇、雌三醇、雌酮的檢測(cè)限分別為:145、1.68、1.72 μg/mL。劉敏等[20]以家禽豬糞中較為常見具有潛在危害的17α-雌二醇、17β-雌二醇、雌三醇和雌酮作為研究對(duì)象,建立了分析這4 種類固醇雌激素的GC-MS 檢測(cè)方法,檢測(cè)結(jié)果表明,在優(yōu)化的檢測(cè)條件下,這四種雌激素的檢測(cè)限分別為 8.0、2.5、5.1、3.3 μg/kg,平均加標(biāo)回收率在92.3%~137.4%之間。Xiuqin Wang等[21]使用高效液相色譜結(jié)合管內(nèi)固相微萃取技術(shù)建立了一種簡(jiǎn)便靈敏的檢測(cè)方法,分析了5 種雌激素標(biāo)準(zhǔn)樣品,具有良好的重復(fù)性,標(biāo)準(zhǔn)偏差<4.1%,檢出限為0.05 mg/L~0.30 mg/L。Guihua Gao 等[22]基于幾種金屬-有機(jī)骨架混合基質(zhì)膜的漩渦輔助膜萃取方法提取人體尿液中的4 種雌激素-雌酮、17β-雌二醇、雌三醇和炔雌醇,使用高效液相色譜技術(shù)熒光檢測(cè)進(jìn)行分析,結(jié)果表明提取的雌激素檢測(cè)范圍為0.02 ng/mL~200 ng/mL,檢出限為0.05 ng/mL~1.0 ng/mL。雖然高效液相色譜具有很好的靈敏度和特異性,也廣泛應(yīng)用于各個(gè)高校實(shí)驗(yàn)室和研究所檢測(cè),但存在儀器本身成本高、不易移動(dòng)、檢測(cè)地點(diǎn)受局限等短板,這些都是無法解決也難以得到改善的因素。
氣相色譜法是所有雌激素活性物質(zhì)檢測(cè)方法中最早發(fā)展應(yīng)用的方法,因其高效能、高靈敏度、強(qiáng)選擇性、極快的分析速度、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn),在20 世紀(jì)60年代至80 年代間,研究者們對(duì)各類樣品中雌激素活性物質(zhì)的檢測(cè)主要就是通過氣相色譜法。目前,氣相色譜法在雌激素物質(zhì)檢測(cè)方面主要是應(yīng)用于自然界河流、工業(yè)區(qū)廢水樣品的檢測(cè)。Basheer 等[23]使用聚合物涂層空心纖維微量提取技術(shù)結(jié)合氣相色譜法檢測(cè)水庫及飲用水樣品中的雌激素含量,通過逐漸降低樣品中分析物濃度得出該檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)限范圍為0.03 ng/L~0.8 ng/L。Zhou 等[24]采用柱前三甲基甲硅烷基衍生化和氣相色譜結(jié)合方法檢測(cè)了地表水和廢水處理廠流出的處理水樣品中的雌激素含量,在優(yōu)化的檢測(cè)條件下,與超純水空白相比,色譜中沒有明顯干擾出現(xiàn),樣品中 DES、E1、E2、EE2、E3、Ev 的檢出限分別為 0.01、0.03、0.03、0.07、0.09、0.13 ng/mL。廖濤等[25]使用固相萃取-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用法建立了有效檢測(cè)殘留雌激素的方法,對(duì)水中的雌酮、雌二醇、雌三醇、雙酚A、炔雌醇等9 種雌激素進(jìn)行了同時(shí)檢測(cè),初步分析了荊州市四湖總干渠受環(huán)境雌激素污染的3 個(gè)不同斷面的污染程度。Rocha 等[26]使用氣相色譜法分析了分別在4 個(gè)季節(jié)中從塔古斯河9 個(gè)地點(diǎn)中采集的水樣,評(píng)估了包括天然、工業(yè)、制藥、家庭污染物、植物甾醇等在內(nèi)的17 種雌激素類似物,并從其中的兩個(gè)采樣地點(diǎn)中發(fā)現(xiàn)了來自工業(yè)和家庭污染的雌激素物質(zhì)。近年來隨著高效液相和其他檢測(cè)方法的發(fā)展,氣相色譜檢測(cè)的應(yīng)用逐漸減少,且其不足之處類似于高效液相色譜法,只能在室內(nèi)進(jìn)行樣品的檢測(cè)。
拉曼光譜檢測(cè)技術(shù)[27]是利用拉曼光譜來研究分子振動(dòng)、轉(zhuǎn)動(dòng)的一種光譜學(xué)方法,其發(fā)展應(yīng)用相比氣相色譜法和高效液相色譜起步更晚,在雌激素檢測(cè)方面的研究也是近十年才開始探索。因拉曼光譜主要功能為定性檢測(cè),故在雌激素的檢測(cè)方面更多集中于樣品中多種雌激素物質(zhì)的定性檢測(cè)。馮超等[28]應(yīng)用RM-200型便攜式拉曼光譜儀對(duì)17β-雌二醇、雌三醇和乙烯雌酚等3 種激素類藥品進(jìn)行拉曼光譜檢測(cè)分析,并對(duì)3種雌激素進(jìn)行了分析對(duì)比和模擬計(jì)算。結(jié)果表明拉曼技術(shù)可以快速準(zhǔn)確的定性檢測(cè)出這3 種雌激素,乙烯雌酚在 724、822、908、1 141、1 254、1 554、1 925 cm-1處存在特征峰;雌三醇在 831、1 045、1 111、1 278、1 417 cm-1處存在特征峰;17β-雌二醇 在 865、1 031、1 075、1 257、1 432 cm-1處存在特征峰,上述峰可作為拉曼光譜檢測(cè)3 種激素的依據(jù)。Yang Liu 等[29]建立了一種簡(jiǎn)單、快速的表面增強(qiáng)共振拉曼散射(surface enhanced Resonance raman scattering,SERRS)的痕量酚類雌激素檢測(cè)方法,通過偶聯(lián)反應(yīng),偶氮化合物形成強(qiáng)烈的SERRS 活性,建立了雌酮、雌三醇、雙酚A 的定性檢測(cè)方法,因偶氮染料的每一個(gè)印記只會(huì)對(duì)特定的雌激素進(jìn)行染色,故具有極高的特異性,適用于通過偶聯(lián)反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)的酚類雌激素。拉曼光譜法目前應(yīng)用相比上述檢測(cè)方法并不廣泛,主要原因在于其在定量檢測(cè)方面的不足,拉曼光譜的定性檢測(cè)對(duì)商業(yè)食品中雌激素含量的定量檢測(cè)毫無應(yīng)用之處,這在目前對(duì)食品安全的日益重視的大趨勢(shì)下是一個(gè)極大的不足。
化學(xué)發(fā)光分析法[30]是分子發(fā)光光譜分析法中的一類,因其操作簡(jiǎn)便、具有較好的靈敏度而被應(yīng)用于食品藥品分析、環(huán)境檢測(cè)等領(lǐng)域。謝良梟等[31]采用KMnO4-鄰菲咯啉釕-Na2SO3化學(xué)發(fā)光體系來測(cè)定雌激素含量,檢測(cè)結(jié)果表明其檢出限為3.8×10-7mg/mL,并使用該方法成功應(yīng)用于實(shí)際樣品中雌激素的檢測(cè)。
生物傳感器技術(shù)是分析生物科學(xué)的一個(gè)分支,其中電化學(xué)生物傳感器是最早出現(xiàn)的生物傳感器,該方法利用了生物反應(yīng)的特異性,同時(shí)具有電化學(xué)分析方法的高靈敏度,從而可以實(shí)現(xiàn)對(duì)生物大分子之間相互作用的實(shí)時(shí)檢測(cè)。Beitollahi H 等[32]應(yīng)用一種以磁性分子印跡納米粒作為表面活性劑來改良電極的電化學(xué)傳感器檢測(cè)雌激素雙酚A,結(jié)果表明其對(duì)雙酚A 的檢測(cè)靈敏度是未經(jīng)過改良的傳感器的2.6 倍,且該方法已證實(shí)應(yīng)用于樣品的大量檢測(cè)。Zhu L 等[33]也使用該方法對(duì)飲用水和湖水中的雌激素進(jìn)行了檢測(cè),檢測(cè)范圍為6.0×10-7mol/L~1.0×10-4mol/L,檢出限為 1.0×10-7mol/L。
分子印記技術(shù)[34]將模板分子與功能單體相結(jié)合,在交聯(lián)劑的作用下共聚得到固體介質(zhì),通過物理或化學(xué)方法將模板分子洗脫,獲得具有與目標(biāo)分子空間構(gòu)型和功能基團(tuán)排列相匹配的結(jié)合位點(diǎn)的分子印跡聚合物。張淑瓊等[35]采用氧化鋁模板法和溶膠凝膠法,以雌酮作為印跡分子,合成了對(duì)雌酮有特異性識(shí)別的SiO2納米管膜,研究結(jié)果表明納米管對(duì)目標(biāo)分子具有高選擇性、高親和性、高容量和快速結(jié)合能力。馬金余等[36]以己烯雌酚為模板分子,α-甲基丙烯酸為功能單體,二甲基丙烯酸乙二醇酯為交聯(lián)劑,合成己烯雌酚分子印跡聚合物,通過選擇不同濃度的甲醇水溶液,己烯雌酚達(dá)到理想的分離純化效果;對(duì)加標(biāo)雞肉樣進(jìn)行了含量測(cè)定,回收率可達(dá)95%以上。
酶聯(lián)免疫法主要是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合對(duì)樣品中的雌激素物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè),在靈敏度檢測(cè)方面不夠高,但因具有較強(qiáng)的特異性,檢測(cè)時(shí)間短,故在樣品的定性檢測(cè)方面具有廣泛的應(yīng)用。Wang 等[37]研究開發(fā)了針對(duì)雌(E-1)、17β-雌二醇(17β-E-2)和雌三醇(E-3)的高特異性、高靈敏性單克隆抗體,根據(jù)競(jìng)爭(zhēng)性酶聯(lián)免疫吸附劑,抗 E-1、抗 17β-E-2 和抗 E-3 單克隆抗體的半數(shù)最大抑制濃度值分別為0.46、0.36、0.39 ng/mL。
目前已有大量文獻(xiàn)研究表明雌激素對(duì)女性生理現(xiàn)象混亂、男性生殖系統(tǒng)異常、動(dòng)物繁殖能力及對(duì)機(jī)體神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)和骨骼系統(tǒng)的常見疾病都有一定程度的影響,因此,建立更靈敏、更高效、更完整的雌激素檢測(cè)體系刻不容緩。當(dāng)前關(guān)于雌激素的檢測(cè)研究主要集中在雌酮、雌二醇、雌三醇和炔雌醇等幾種物質(zhì),研究范圍相對(duì)狹隘,此外,除了已經(jīng)發(fā)現(xiàn)但還未付諸檢測(cè)研究的雌激素活性物質(zhì),還有大量尚未被發(fā)現(xiàn)的帶有雌激素毒性的物質(zhì),需要我們進(jìn)行進(jìn)一步地探索發(fā)現(xiàn),這對(duì)人類的生存環(huán)境和減少身體疾病具有重要意義。
在雌激素檢測(cè)方法研究方面,相對(duì)成熟的方法主要是氣相色譜和高效液相色譜法,筆者在探索霉菌毒素玉米赤霉烯酮的生物降解機(jī)理過程中,主要使用高效液相色譜法檢測(cè)ZEA 的含量,雖然檢測(cè)靈敏度和重現(xiàn)性均良好,但不適用現(xiàn)場(chǎng)、快速的檢測(cè),尤其儀器維護(hù)成本較高[38-44]。本文詳細(xì)介紹的轉(zhuǎn)基因生物反應(yīng)器在定性和定量檢測(cè)以及研究成本、生態(tài)環(huán)境方面都具有的明顯的優(yōu)勢(shì),但目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于該方法的建立研究屈指可數(shù),且其表達(dá)載體主要為酵母,在日后的研究中,可以在目的基因、受體和載體當(dāng)面作更為深入的研究,使轉(zhuǎn)基因生物反應(yīng)器檢測(cè)方法發(fā)展為更成熟的檢測(cè)體系。