李龍梅，毛萌，鄧志云，宋慧榮，羅亞敏，李佳林，武佳杰，任小巧

(北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100029)

腦卒中是一種具有高患病率、高發(fā)病率、高死亡率和高致殘率特點(diǎn)的“四高”疾病，是全球范圍內(nèi)第二大常見(jiàn)死亡原因和第三大常見(jiàn)致殘?jiān)騕1]。腦卒中不僅造成了軀體上的殘障，而且對(duì)患者的精神、心理、社會(huì)參與能力也產(chǎn)生了不容忽視的影響[2]。此病屬于突發(fā)性、災(zāi)難性疾病，患者多無(wú)思想準(zhǔn)備，通常會(huì)給患者帶來(lái)較大的心理刺激，可被認(rèn)為是嚴(yán)重的“腦創(chuàng)傷”事件。部分患者在腦卒中后除神經(jīng)功能障礙癥狀外，還通常出現(xiàn)對(duì)腦卒中過(guò)程中情境的重復(fù)性體驗(yàn)、情感麻木、回避、警覺(jué)性增高以及強(qiáng)烈煩躁不安和認(rèn)知障礙等自主神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，即卒中后出現(xiàn)的創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙[3]。隨著腦卒中的高發(fā)，卒中后創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(post-traumatic stress disorder，PTSD)也不容忽視，此類患者如不能得到及時(shí)有效的治療，不僅軀體及認(rèn)知功能的恢復(fù)會(huì)受到限制，而且存在病情惡化甚至死亡的風(fēng)險(xiǎn)。近年來(lái)國(guó)內(nèi)對(duì)卒中后PTSD的關(guān)注度日益增高，但其實(shí)驗(yàn)研究仍缺乏公認(rèn)的動(dòng)物模型，所以建立一種能有效模擬人類卒中后PTSD發(fā)生發(fā)展過(guò)程的動(dòng)物模型對(duì)深入研究該病的病因、發(fā)病機(jī)制和治療等具有積極意義。本研究采用大腦中動(dòng)脈線栓法制備大鼠腦卒中模型，探索其是否具有PTSD狀態(tài)并評(píng)價(jià)，為卒中后PTSD疾病模型的開(kāi)發(fā)和利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 成年健康雄性Wistar大鼠45只，體質(zhì)量(220±10) g，SPF級(jí)，由斯貝福(北京)生物科技有限公司提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(京)2016-0002。實(shí)驗(yàn)在北京中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物房中進(jìn)行，室內(nèi)溫度： 23～25 ℃，相對(duì)濕度：(55 ±10) %，40 W日光燈照射，維持12 h光照和12 h黑暗的晝夜。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d，以全價(jià)顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水。造模前將大鼠隨機(jī)分為3組，模型對(duì)照組、假手術(shù)組、單次延長(zhǎng)應(yīng)激(single-prolonged stress，SPS)組。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)動(dòng)物的處理均遵循動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的3R原則。

1.2實(shí)驗(yàn)試劑 75%乙醇購(gòu)自安徽太和縣光明酒精分裝廠(批號(hào)：160606)；無(wú)水乙醚購(gòu)自北京化工廠(批號(hào)： 20170417)。Trizol購(gòu)自Invitrogen公司，反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自Fermentas公司，Power SYBR green購(gòu)自Invitrogen公司，引物由生工生物工程股份有限公司設(shè)計(jì)并合成。

1.3主要儀器 圓桶狀透明塑料大鼠固定器：長(zhǎng)25 cm，外徑7 cm，內(nèi)徑5 cm，由北京中醫(yī)藥大學(xué)方劑學(xué)教研室提供；水箱：底65 cm×100 cm、高80 cm 的立方形紅色塑料水箱；行為學(xué)觀察及自動(dòng)分析系統(tǒng)：Nodule公司生產(chǎn)，包括計(jì)算機(jī)、攝像監(jiān)控系統(tǒng)、Observior及Ethevision行為學(xué)分析軟件。

1.4造模

1.4.1采用腦中動(dòng)脈線栓法復(fù)制局灶性腦缺血模型大鼠 參照LONGA等[4]報(bào)道的線栓法建立腦缺血大鼠模型。采用10%水合氯醛(400 g·kg-1)對(duì)模型對(duì)照組大鼠進(jìn)行腹腔注射，麻醉后取仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，消毒備皮，經(jīng)頸正中切口后鈍性分離右側(cè)頸總動(dòng)脈(common carotid artery，CCA)、頸內(nèi)動(dòng)脈(internal carotid artery，ICA)及頸外動(dòng)脈(external carotid artery，ECA)，結(jié)扎CCA和ECA，在CCA近分叉處剪一小口，經(jīng)ECA向ICA插入線栓，阻斷大腦中動(dòng)脈血供，缺血90 min后拔除線栓，成功制備大腦中動(dòng)脈閉塞再灌注損傷模型。假手術(shù)組除不插入線栓外，其他處理同上。術(shù)后6 h，根據(jù)Longa的6點(diǎn)評(píng)分法對(duì)模型對(duì)照組大鼠進(jìn)行神經(jīng)癥狀學(xué)評(píng)分，1～4分的納入本研究。

1.4.2復(fù)制PTSD大鼠模型 對(duì)SPS組大鼠采用國(guó)際通用的單次延長(zhǎng)應(yīng)激方法建立PTSD模型[5]。處理步驟如下：緊密束縛2 h，隨后強(qiáng)迫游泳20 min(水深40 cm，水溫25 ℃)，經(jīng)過(guò)15 min的自然恢復(fù)，密閉容器內(nèi)乙醚麻醉至意識(shí)喪失，待其意識(shí)恢復(fù)后把動(dòng)物放回鼠籠靜養(yǎng)。

1.5行為學(xué)檢測(cè) 于造模后第 7天及第14天兩個(gè)時(shí)點(diǎn)進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，測(cè)試均在安靜環(huán)境中進(jìn)行，開(kāi)始前讓大鼠在測(cè)試間適應(yīng)1 h。

1.5.1高架十字迷宮實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)裝置由兩條相對(duì)開(kāi)放臂(50 cm×10 cm)和兩條相對(duì)閉合臂(50 cm×50 cm×10 cm)及中央?yún)^(qū)(10 cm×10 cm)連接而成，距離地面50 cm將大鼠從中央格面向閉合臂放入，釋放后開(kāi)始觀察并記錄5 min內(nèi)大鼠的活動(dòng)情況。5 min后取出大鼠，用乙醇擦拭設(shè)備以清除大鼠殘留的大、小便及氣味等信息。統(tǒng)計(jì)以下數(shù)據(jù)：開(kāi)放臂進(jìn)入次數(shù)、開(kāi)放臂進(jìn)入時(shí)間、閉合臂進(jìn)入次數(shù)、閉合臂進(jìn)入時(shí)間，評(píng)判者由非實(shí)驗(yàn)人員完成以保證結(jié)果客觀。進(jìn)臂總次數(shù)=開(kāi)放臂進(jìn)入次數(shù)+閉合臂進(jìn)入次數(shù)；開(kāi)放臂進(jìn)入次數(shù)比(%)= 開(kāi)放臂進(jìn)入次數(shù)/(開(kāi)放臂進(jìn)入次數(shù)+閉合臂進(jìn)入次數(shù))×100%；開(kāi)放臂進(jìn)入時(shí)間比(%)= 開(kāi)放臂進(jìn)入時(shí)間/(開(kāi)放臂進(jìn)入時(shí)間+閉合臂進(jìn)入時(shí)間)×100%，同理計(jì)算閉合臂進(jìn)入次數(shù)比與進(jìn)入時(shí)間比。

1.5.2社交趨避實(shí)驗(yàn) 社交趨避測(cè)試箱：敞口實(shí)驗(yàn)箱(100 cm×100 cm×40 cm)，黑色內(nèi)壁。黑箱1為側(cè)拉門實(shí)驗(yàn)箱(25 cm×25 cm×25 cm)，黑色不透光。黑箱2(25 cm×25 cm×25 cm)的箱一側(cè)壁為鐵絲網(wǎng)格，可通過(guò)網(wǎng)格觀察到外界事物，其他側(cè)壁均為黑色不透光側(cè)壁。在實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)的一側(cè)中間貼壁放入黑箱1，在其對(duì)面一側(cè)中間貼壁放入裝有社交目標(biāo)大鼠的黑箱2，黑箱2的前、左、右三側(cè)20 cm區(qū)域定義為社交區(qū)域。測(cè)試開(kāi)始前先將動(dòng)物放入黑箱1中適應(yīng)2 min，然后打開(kāi)擋板，測(cè)試5 min，觀察并記錄大鼠走出黑箱1的潛伏期、社交區(qū)進(jìn)入次數(shù)、社交區(qū)域進(jìn)入時(shí)間、直立次數(shù)。測(cè)試后拿出動(dòng)物，乙醇擦拭實(shí)驗(yàn)箱和黑盒。

1.6熒光定量PCR 14 d行為學(xué)結(jié)束后，將大鼠麻醉后斷頭取腦，在冰盤上迅速分離右側(cè)海馬組織，置于潔凈的EP管中，置于液氮中迅速冷凍后置于-80 ℃冰箱中備用。用Trizol試劑提取海馬組織的RNA，反轉(zhuǎn)錄。PCR反應(yīng)體系為20 μL：SYBR green 10 μL、上游、下游引物(10 μm)各0.4 μL，cDNA為反轉(zhuǎn)錄原液(20 μg RNA)稀釋后2 μL、ddH2O 7.6 μL。引物序列(5'→3')：GAD67正義鏈AATACTACCAACCTGC-GTCCTACAAC，GAD67反義鏈：GACGACTCTTCTCTT-CCAGGCTATTG；GAD65正義鏈：TGCGAGTTCTGG-AAGACAATGAAGAG，GAD65反義鏈：ACCATGCGG-AAGAAGTTGACCTTATC；GLT1正義鏈：GGGTGCC-AACAATATGCCCA，GLT1反義鏈：GGTTCTTCCCC-AGCTTGTCG。PCR反應(yīng)條件如下： 95 ℃，10 min，95 ℃，5 s，60 ℃，30 s(讀取熒光數(shù)值)，共40個(gè)循環(huán)。熔解曲線： 擴(kuò)增循環(huán)結(jié)束后，95 ℃，15 s，60 ℃(讀取熒光數(shù)值)，1 min，然后從60 ℃至95 ℃ ，每增加 0.3 ℃，讀取一次吸光值，最后95 ℃，15 s。PCR結(jié)果按2-△Ct，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1社交趨避實(shí)驗(yàn)結(jié)果 與假手術(shù)組比較，模型對(duì)照組大鼠潛伏期明顯延長(zhǎng)(χ2=22.50，P<0.01)、社交區(qū)進(jìn)入時(shí)間明顯縮短(χ2=21.50，P<0.01)、站立次數(shù)明顯減少(χ2=17.20，P<0.01)；SPS組大鼠潛伏期延長(zhǎng)(χ2=12.34，P<0.05)、社交區(qū)進(jìn)入時(shí)間明顯縮短(χ2=18.07，P<0.01)、直立次數(shù)減少(χ2=13.18，P<0.05)。14 d時(shí)模型對(duì)照組與SPS組各指標(biāo)變化趨勢(shì)同7 d，均差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。模型對(duì)照組與SPS組比較，除了站立次數(shù)兩組差異明顯(P<0.01)外，其他各指標(biāo)數(shù)據(jù)相近，7和14 d時(shí)均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1，2。

2.2高架十字迷宮結(jié)果 與假手術(shù)組比較，模型對(duì)照組大鼠開(kāi)放壁進(jìn)入次數(shù)比減少(χ2=9.68，P<0.05)、開(kāi)放壁進(jìn)入時(shí)間比減少(χ2=11.23，P<0.05)、進(jìn)臂總次數(shù)差異不明顯(χ2=6.43，P>0.05)；SPS組大鼠開(kāi)放壁進(jìn)入次數(shù)比減少(χ2=10.24，P<0.05)、開(kāi)放壁進(jìn)入時(shí)間比減少(χ2=11.62，P<0.05)，進(jìn)臂總次數(shù)差異不明顯(χ2=5.59，P>0.05)。7 d時(shí)，與假手術(shù)組比較，模型對(duì)照組與SPS組各指標(biāo)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但變化趨勢(shì)同14 d。模型對(duì)照組與SPS組比較，7和14 d時(shí)各指標(biāo)數(shù)據(jù)相近，均差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3，4。

表1 3組大鼠7 d社交趨避實(shí)驗(yàn)行為學(xué)指標(biāo)比較

Tab.1Comparisonoftheparametersofsocialapproach-avoidancetestat7damongthreegroupsofrats

組別潛伏期社交區(qū)進(jìn)入時(shí)間s社交區(qū)進(jìn)入站立次假手術(shù)組151.66±14.6134.01±6.802.13±1.253.40±1.50模型對(duì)照組205.04±20.99?17.93±2.98?11.10±0.571.00±0.67?1SPS組177.43±15.96?29.87±2.73?11.36±0.631.79±0.97?1?3χ224.1427.5311.0223.79

與假手術(shù)組比較，*1P<0.01，*2P<0.05；與模型對(duì)照組比較，*3P<0.01

Compared with sham operation group，*1P<0.01，*2P<0.05；compared with model control group，*3P<0.01

表2 3組大鼠14 d社交趨避實(shí)驗(yàn)行為學(xué)指標(biāo)比較

Tab.2Comparisonoftheparametersofsocialapproach-avoidancetestat14damongthreegroupsofrats

組別潛伏期社交區(qū)進(jìn)入時(shí)間s社交區(qū)進(jìn)入站立次假手術(shù)組95.51±8.7836.26±8.572.60±0.703.20±0.63模型對(duì)照組189.76±15.75?17.90±4.54?10.90±0.57?10.50±0.53?1SPS組173.53±14.93?112.50±6.05?11.11±0.66?11.32±1.53?1?2χ224.5724.1222.6727.85

與假手術(shù)組比較，*1P<0.01；與模型對(duì)照組比較，*2P<0.01

Compared with sham operation group，*1P<0.01；compared with model control group，*2P<0.01

表3 3組大鼠7 d高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)行為學(xué)指標(biāo)比較

Tab.3Comparisonoftheparametersofelevatedplusmazetestat7damongthreegroupsofrats

組別開(kāi)放臂進(jìn)入次數(shù)比/%進(jìn)入時(shí)間比/%進(jìn)臂總次數(shù)/次假手術(shù)組0.36±0.150.11±0.118.14±5.46模型對(duì)照組0.18±0.23?10.03±0.05?13.42±2.71SPS組0.21±0.19?10.04±0.06?15.64±4.13χ22.944.8826.00

與假手術(shù)組比較，*1P<0.05

Compared with sham operation group，*1P<0.05

表4 3組大鼠14 d 高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)行為學(xué)指標(biāo)比較

Tab.4Comparisonoftheparametersofelevatedplusmazetestat14damongthreegroupsofrats

組別開(kāi)放臂進(jìn)入次數(shù)比/%進(jìn)入時(shí)間比/%進(jìn)臂總次數(shù)/次假手術(shù)組0.55±0.230.14±0.875.56±2.07模型對(duì)照組0.29±0.22?10.04±0.03?13.60±1.84SPS組0.27±0.25?10.04±0.04?13.79±1.58χ27.269.3914.67

與假手術(shù)組比較，*1P<0.05

Compared with sham operation group，*1P<0.05

2.3熒光定量PCR結(jié)果 與假手術(shù)組比較，模型對(duì)照組大鼠內(nèi)GAD67(χ2=13.93，P<0.05)、GAD65(χ2=21.93，P<0.01)、GLT1(χ2=8.58，P<0.05)的基因表達(dá)均減少；SPS組大鼠海馬內(nèi)GAD65(χ2=20.93，P<0.01)、GLT1(χ2=19.75，P<0.01)，GAD67有減少趨勢(shì)。見(jiàn)表5。

表5 3組大鼠14 d海馬內(nèi)目的基因mRNA表達(dá)情況比較

Tab.5ComparisonofthemRNAexpressionoftargetgenesinhippocampusat14damongthreegroupsofrats

組別GAD67GAD65GLT1假手術(shù)組1.03±0.271.04±0.291.08±0.36模型對(duì)照組0.68±0.25?10.60±0.13?20.79±0.24?1SPS組0.87±0.36?30.63±0.16?20.41±0.17?2?3χ28.923.4426.12

與假手術(shù)組比較，*1P<0.05，*2P<0.01；與模型對(duì)照組比較，*3P<0.05

Compared with sham operation group，*1P<0.05，*2P<0.01；compared with model control group，*3P<0.05

3 討論

腦卒中后個(gè)體的生理及心理受到了傷害，加之手術(shù)、社會(huì)關(guān)系改變易引發(fā)PTSD，有些患者會(huì)帶病多年且不能完全恢復(fù)[6-7]，造成了一定的醫(yī)療和社會(huì)負(fù)擔(dān)。目前尚無(wú)對(duì)PTSD的各組癥狀均能產(chǎn)生滿意療效的藥物，因此開(kāi)展對(duì)卒中后PTSD的研究對(duì)于了解其發(fā)病機(jī)制和尋找干預(yù)措施具有重要意義。卒中后PTSD在國(guó)內(nèi)尚未引起足夠的重視，鮮見(jiàn)對(duì)其模型探索的研究，而效度良好的動(dòng)物模型是開(kāi)展實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)，所以卒中后PTSD動(dòng)物模型的建立迫在眉睫。PTSD-SPS模型是2005年在日本召開(kāi)的“基礎(chǔ)和臨床的研究進(jìn)展”會(huì)議中確定的，它通過(guò)束縛、強(qiáng)迫游泳和乙醚麻醉分別對(duì)動(dòng)物的心理、生理及內(nèi)分泌造成應(yīng)激，可模擬PTSD患者的焦慮反應(yīng)、高度警覺(jué)性以及神經(jīng)內(nèi)分泌改變，且所導(dǎo)致的焦慮、抑郁等可通過(guò)藥物改善，重復(fù)性好，成為目前國(guó)際公認(rèn)的PTSD動(dòng)物模型之一[8-10]。因其具有可靠的表觀、結(jié)構(gòu)和預(yù)測(cè)效度，故可作為本研究中以大腦中動(dòng)脈線栓法(middle cerebral artery occlusion，MCAO)造模是否出現(xiàn)PTSD狀態(tài)的良好對(duì)照。PTSD患者通常會(huì)出現(xiàn)認(rèn)知及心境方面的消極改變，存在著情感麻木或回避現(xiàn)象，具體表現(xiàn)可有對(duì)陌生的人或事物興趣降低、與外界疏遠(yuǎn)隔離、交流減少等，所以社會(huì)能力尤其是社交能力在PTSD動(dòng)物模型的行為學(xué)評(píng)價(jià)中尤為重要[11]。社交趨避實(shí)驗(yàn)是一種評(píng)價(jià)嚙齒類動(dòng)物社交行為的有效方法，實(shí)驗(yàn)中受試鼠對(duì)刺激鼠的接近或逃避行為能較好的反應(yīng)大鼠的社交能力與抑郁狀態(tài)，通過(guò)受試鼠第一次走出黑箱的時(shí)間、走進(jìn)刺激鼠所在社交區(qū)域的時(shí)間及次數(shù)等來(lái)描述動(dòng)物的社會(huì)偏好行為[12]。本實(shí)驗(yàn)中假手術(shù)組大鼠在較短時(shí)間內(nèi)就從保護(hù)性黑箱中爬出來(lái)并進(jìn)行探索，多次進(jìn)入陌生同類所在區(qū)域并與其交流，而模型對(duì)照組和SPS大鼠與假手術(shù)組大鼠比較，第一次走出保護(hù)性黑箱的時(shí)間都延長(zhǎng)，靠近社交區(qū)的時(shí)間和次數(shù)也都減少，且有較高的防御性，不愿與同類交流，可見(jiàn)模型對(duì)照組和SPS組大鼠對(duì)外界表現(xiàn)出一定的回避狀態(tài)，對(duì)陌生同類的興趣和交流欲望減少，提示這兩組大鼠的社交回避趨勢(shì)明顯。PTSD患者的恐懼、回避以及警覺(jué)性增高屬于人類的焦慮反應(yīng)，可出現(xiàn)對(duì)創(chuàng)傷有關(guān)的刺激產(chǎn)生恐懼反應(yīng)，甚至對(duì)無(wú)關(guān)的低刺激表現(xiàn)出高警覺(jué)狀態(tài)[13]。高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)是測(cè)試動(dòng)物焦慮及回避癥狀的有效實(shí)驗(yàn)方法，通過(guò)利用嚙齒類動(dòng)物在選擇探索新異環(huán)境還是回避高懸開(kāi)放臂時(shí)產(chǎn)生的矛盾行為來(lái)反應(yīng)其焦慮狀態(tài)。本研究中高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，將模型對(duì)照組和SPS組大鼠至于中央?yún)^(qū)后，大鼠很快逃離到閉合臂中，很少去開(kāi)放壁，且在開(kāi)放壁的停留時(shí)間短暫；而假手術(shù)組大鼠對(duì)開(kāi)放臂有較強(qiáng)的探究欲望，會(huì)在開(kāi)放壁停留較多時(shí)間。此現(xiàn)象提示模型對(duì)照組和SPS組的大鼠探究天性和對(duì)外界的好奇心理減弱，焦慮反應(yīng)較假手術(shù)組增強(qiáng)。7 d時(shí)SPS組大鼠的焦慮表現(xiàn)與假手術(shù)組差異不明顯，而在14 d時(shí)出現(xiàn)明顯差異，驗(yàn)證了SEROVA等[14]發(fā)現(xiàn)的SPS可導(dǎo)致延遲性焦慮反應(yīng)和警覺(jué)度增高的現(xiàn)象。

PTSD的發(fā)生與中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸(glutamate，Glu)與抑制性神經(jīng)遞質(zhì)γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid，GABA)的平衡失調(diào)密切相關(guān)，同時(shí)與負(fù)責(zé)空間學(xué)習(xí)記憶的重要腦區(qū)海馬的損傷有關(guān)。Glu與PTSD發(fā)生過(guò)程中記憶的形成關(guān)系緊密，創(chuàng)傷事件后Glu水平的升高可以導(dǎo)致創(chuàng)傷記憶的編碼和鞏固，且高含量的Glu也可導(dǎo)致海馬結(jié)構(gòu)的損傷[15]。而GABA可以調(diào)節(jié)機(jī)體面對(duì)應(yīng)激時(shí)的多種生理反應(yīng)[16]，同時(shí)可以防止神經(jīng)系統(tǒng)的過(guò)度激活及Glu的過(guò)度釋放[17]。在Glu與GABA的代謝過(guò)程中，Glu可被星形膠質(zhì)細(xì)胞膜上的谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體攝取到胞內(nèi)而消除神經(jīng)興奮毒性，也可經(jīng)谷氨酸脫羧酶(GAD) 脫羧后生成能拮抗Glu神經(jīng)興奮毒性的GABA。90%以上的谷氨酸是由谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)體1(GLT1)攝取和轉(zhuǎn)運(yùn)的[18]，合成GABA的兩種同工酶(GAD65和GAD67)的分布與GABA能神經(jīng)元的分布基本一致[19]，故通過(guò)測(cè)定GLT1和GAD的活性可推測(cè)Glu與GABA的含量變化。本實(shí)驗(yàn)中，14 d后模型對(duì)照組與SPS大鼠海馬內(nèi)GLT1 、GAD65和GAD67的基因表達(dá)均減少，表明海馬內(nèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞攝取Glu的能力減弱且合成GABA的能力受到抑制，因此推測(cè)模型對(duì)照組與SPS組大鼠海馬內(nèi)Glu含量增多而GABA含量減少。增多的Glu興奮毒性增加，且GABA的含量減少使其對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的抑制作用及對(duì)Glu的拮抗減弱，更加劇了Glu與GABA的失衡狀態(tài)。研究顯示Glu與GABA的失衡狀態(tài)可能是PTSD中應(yīng)激高喚醒癥狀產(chǎn)生與維持的重要原因[20]。這與本實(shí)驗(yàn)中模型對(duì)照組大鼠出現(xiàn)高警覺(jué)狀態(tài)的表現(xiàn)相符。行為學(xué)實(shí)驗(yàn)中模型對(duì)照組大鼠對(duì)陌生環(huán)境產(chǎn)生恐懼，回避同類，回避交流，對(duì)低危險(xiǎn)的環(huán)境和事物保持高警覺(jué)，其表現(xiàn)與SPS造成的PTSD大鼠行為類似，同時(shí)與高杰等[21-22]先前對(duì)PTSD大鼠的研究結(jié)果相近。PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果可推測(cè)各組大鼠行為學(xué)表現(xiàn)的差異可能與其海馬內(nèi)Glu和GABA的含量變化有關(guān)，Glu增多、GABA減少的失衡狀態(tài)可導(dǎo)致大鼠焦慮反應(yīng)增強(qiáng)、恐怖記憶加深從而出現(xiàn)回避和高警覺(jué)狀態(tài)等表現(xiàn)。由此可見(jiàn)，MCAO方法對(duì)大鼠造成了刺激并使其出現(xiàn)了應(yīng)激反應(yīng)，成功模擬了PTSD 狀態(tài)的恐懼反應(yīng)、警覺(jué)性增高、逃避行為、環(huán)境適應(yīng)能力下降等。

綜上所述，MCAO方法造成了一定程度的PTSD狀態(tài)，其在社交趨避和高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)中的行為學(xué)表現(xiàn)和海馬內(nèi)Glu與GABA的失衡狀態(tài)與SPS造成的PTSD大鼠無(wú)明顯差異。成功的動(dòng)物模型需要有良好的表面效度、結(jié)構(gòu)效度和預(yù)測(cè)效度，對(duì)于卒中后PTSD的動(dòng)物模型來(lái)說(shuō)，MCAO方法模擬了腦卒中腦缺血-再灌注的過(guò)程，且造模后出現(xiàn)了與SPS大鼠類似的應(yīng)激障礙，故可以認(rèn)為MCAO方法作為卒中后PTSD的動(dòng)物模型有一定的表面效度和結(jié)構(gòu)效度。至于此模型的預(yù)測(cè)效度以及造成的PTSD狀態(tài)在神經(jīng)生理學(xué)上是否與SPS大鼠也有一致性等問(wèn)題還有待于后續(xù)的深入研究。