崔 婷 梁光平 丁麗娜 萬(wàn)路平 劉 亮 曾富佳 陳東林

遵義醫(yī)藥高等專科學(xué)校 藥學(xué)系，貴州 遵義 563006

瓜蔞子是葫蘆科多年生草質(zhì)藤本植物栝樓的種子，含有天然色素、抑菌蛋白與核糖核酸酶蛋白以及豐富的氨基酸，具有清熱滌痰、潤(rùn)燥滑腸的功效[1-3]。炒熟的瓜蔞子味道清香獨(dú)特，在江浙地區(qū)常作為休閑品嘗、贈(zèng)送親友的時(shí)尚禮品，屬于藥食同源品種。由于開(kāi)發(fā)價(jià)值高，瓜蔞子的市場(chǎng)需求量逐年上升，目前全國(guó)范圍內(nèi)的種植地主要為安徽、浙江、江西等地，其他地區(qū)有少量引種。貴州遵義光照充足、氣候溫和，特別適宜瓜蔞的生長(zhǎng)[4]，但目前尚未對(duì)貴州遵義引種的優(yōu)質(zhì)栝樓品種進(jìn)行研究。為此，本研究從瓜蔞子優(yōu)質(zhì)產(chǎn)地浙江紹興引進(jìn)了4個(gè)品種的種子并栽培于貴州遵義，待果實(shí)成熟后收集瓜蔞子。對(duì)其栝樓仁三醇、總蛋白、脂肪、多糖的含量及千粒重進(jìn)行測(cè)定，分析比較貴州遵義引種的4個(gè)品種與原產(chǎn)地相應(yīng)品種之間各指標(biāo)的差異，篩選出適合遵義引種的品種，為貴州遵義地區(qū)引種栽培瓜蔞子提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 原產(chǎn)地瓜蔞子來(lái)源于浙江紹興，品種分別為：小瓜子(1號(hào))、越蔞(2號(hào))、第一代老瓜蔞種子(3號(hào))、第二代瓜蔞種子(4號(hào))；4種瓜蔞子分別育苗栽培于貴州遵義地區(qū)后，待果實(shí)成熟取出種子并曬干即獲得對(duì)應(yīng)的引種瓜蔞子。

1.2 儀器與試劑 Agilent1260液相色譜系統(tǒng)：美國(guó)安捷倫公司；phenomenex C18色譜柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)：美國(guó)菲羅門公司；SKD-800凱氏定氮儀：上海沛歐分析儀器公司；ME204電子天平：瑞士梅特勒-托利多公司；脂肪抽出器、電熱鼓風(fēng)干燥箱：上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；ICP-OES等離子體發(fā)射光譜儀：日本島津公司；甲醇：色譜純，美國(guó) TEDIA 公司；3,29-二苯甲?；闃侨嗜紝?duì)照品：上海阿拉丁公司；硫酸、硼酸、無(wú)水石油醚、硫酸鉀、葡萄糖：分析純，成都科龍?jiān)噭S。

1.3 檢測(cè)方法

1.3.1 栝樓仁三醇含量測(cè)定 參照文獻(xiàn)[5]并稍作修改，采用高效液相色譜法測(cè)定瓜蔞子中3,29-二苯甲?；闃侨嗜嫉暮?，使用phenomenex C18色譜柱(250 mm×4.6 mm, 5 μm)，流動(dòng)相為甲醇(A)-純水(B)；洗脫方法為 93 % A 等度10 min；進(jìn)樣量5 μL；檢測(cè)波長(zhǎng)為 210 nm；流速為 1 mL/min。

1.3.2 營(yíng)養(yǎng)成分的含量測(cè)定 脂肪含量：參照GB 5009.6-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中脂肪的測(cè)定》方法對(duì)瓜蔞種子中脂肪的含量進(jìn)行測(cè)定。

總蛋白含量：參照GB5009.5-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定》中凱氏定氮法對(duì)瓜蔞種子中蛋白質(zhì)的含量進(jìn)行測(cè)定，換算系數(shù)為6.25。

多糖含量：取瓜蔞子粗粉4.0 g，加入80 %的乙醇溶液200 mL，回流提取1 h，過(guò)濾，洗滌，殘?jiān)铀亓魈崛? h，濾液加水定容至250 mL，參考文獻(xiàn)[6]中苯酚-硫酸法測(cè)定多糖含量。

1.3.3 千粒重測(cè)定 瓜蔞種子的千粒重參照GB 2772方法[7]進(jìn)行測(cè)定。

1.3.4 微量元素的檢測(cè) 參考國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 7888-1991檢測(cè)瓜蔞子中鐵、鋅、銅、錳4種微量元素的含量。

1.3.5 重金屬的檢測(cè) 參照文獻(xiàn)[8]采用等離子體發(fā)射光譜法測(cè)定瓜蔞子中汞、砷、鉛的含量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 利用 Excel 對(duì)原始數(shù)據(jù)匯總及統(tǒng)計(jì)，采用 Graphpad Prism 5.0 軟件對(duì)各指標(biāo)進(jìn)行分析，組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 栝樓仁三醇含量分析 3, 29-二苯甲?；闃侨嗜际枪鲜V子的藥效成分，2015年版《中國(guó)藥典》以 3, 29-二苯甲?；闃侨嗜甲鳛樵u(píng)價(jià)瓜蔞子質(zhì)量?jī)?yōu)劣的標(biāo)準(zhǔn)。從表1可知，原產(chǎn)地(浙江紹興)產(chǎn)4種瓜蔞子中栝樓仁三醇含量為0.108%～0.123%，引種地(貴州遵義)產(chǎn)4種瓜蔞子中該成分的含量與原產(chǎn)地較為接近，含量為0.095%～0.124%，相比原產(chǎn)地變化幅度在0.17%～11.98%之間，其中引種地1號(hào)和2號(hào)與原產(chǎn)地含量基本保持一致，且兩地各品種之間無(wú)顯著差異，均符合國(guó)家藥典的要求(栝樓仁三醇含量不得少于0.08 %)[1]。

表1 不同產(chǎn)地與品種瓜蔞子中栝樓仁三醇的含量 (n=4)

注：含量變化為該品種在貴州遵義的含量與浙江紹興含量差異的百分?jǐn)?shù)，“-”表示引種后含量降低。

2.2 營(yíng)養(yǎng)成分含量分析 營(yíng)養(yǎng)成分是反映種子質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，對(duì)衡量種子品種優(yōu)劣具有重要的指導(dǎo)意義。瓜蔞子中富含油脂、蛋白質(zhì)等多種物質(zhì)及維生素鐵、鋅、硒等人體所需微量元素，其中蛋白質(zhì)、脂肪與多糖含量達(dá)到總營(yíng)養(yǎng)成分的80%以上，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值[9-10]。見(jiàn)表2。

表2 不同產(chǎn)地瓜蔞子營(yíng)養(yǎng)成分含量比較 (n=4)

注：含量變化為該品種在貴州遵義的含量與浙江紹興含量差異的百分?jǐn)?shù)，括號(hào)中“-”表示含量降低；“*”表示該指標(biāo)含量較原產(chǎn)地具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

由表2可知，相同品種不同產(chǎn)地之間，各營(yíng)養(yǎng)成分存在不同程度的差異。對(duì)于同一地區(qū)不同品種來(lái)說(shuō)，浙江產(chǎn)的4個(gè)栝樓品種中，以1號(hào)品種瓜蔞子蛋白質(zhì)含量最高，3號(hào)含量最低。這些品種引種至貴州后，蛋白含量在9.36%～16.00%之間，其中1號(hào)品種含量大幅降低了40.91%，僅含9.36%，成為引種后蛋白含量最低的品種；3號(hào)含量為10.63%，比原產(chǎn)地顯著升高了43.26%；但以2號(hào)的含量最高，為16 %，增加了16.11%；4號(hào)的含量變化不大，僅減少了2.55%。且經(jīng)過(guò)數(shù)據(jù)分析，引種地1、2、3號(hào)品種瓜蔞子蛋白質(zhì)含量與原產(chǎn)地比較存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

脂肪含量(表2)在引種至貴州遵義后呈普遍下降的趨勢(shì)，4個(gè)引種品種含量為28.30%～31.8%。與原產(chǎn)地比較，1號(hào)含量由38.40%減少為31.80%，明顯降低17.18%(P<0.05)；3號(hào)降低了11.63%；而4號(hào)脂肪含量增加11.83%；以2號(hào)的脂肪含量變化最小，僅減少3.08%。引種地2號(hào)、3號(hào)、4號(hào)與原產(chǎn)地比較，含量無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

多糖含量(表2)也具有普遍下降的趨勢(shì)。在引種后，4個(gè)品種多糖含量為0.093%～0.138%。其中除1號(hào)含量有所增加外，其余3個(gè)品種含量均下降。1號(hào)的多糖含量最高(0.138%)，比原產(chǎn)地增加了25.45%，增加幅度較大；2號(hào)次之(0.104%)，但比原產(chǎn)地降低了10.34 %；4號(hào)的多糖含量最低，僅含0.093%，相比原產(chǎn)地降低了11.43%；3號(hào)在原產(chǎn)地產(chǎn)的4個(gè)品種中含量最高，為0.124%，但引種后含量下降幅度最大，降低了16.94 %，為0.103%。

2.3 千粒重分析 千粒重可反映種子貯藏物質(zhì)的多少、種子成熟度和幼苗長(zhǎng)勢(shì)，對(duì)種子質(zhì)量評(píng)價(jià)具有重要意義[11]。由表3可知，1號(hào)和2號(hào)品種從浙江紹興引種至貴州遵義后，千粒重分別下降了3.85%、3.45%。3號(hào)引種后千粒重增加了8.33%，而4號(hào)引種后的千粒重比其他品種都高，但相比原產(chǎn)地相應(yīng)品種則減少了23.08%。因此，在引種的4個(gè)品種千粒重中，1號(hào)和2號(hào)與原產(chǎn)地相應(yīng)品種基本持平，但2號(hào)的變化幅度最小。

表3 原產(chǎn)地與引種地4種瓜蔞子的千粒重

注：含量變化為該品種在貴州遵義的含量與浙江紹興含量差異的百分?jǐn)?shù)。

3 優(yōu)質(zhì)品種的篩選與分析

3.1 品種的篩選 根據(jù)原產(chǎn)地與引種地4種瓜蔞子中栝樓仁三醇、蛋白質(zhì)、脂肪、多糖含量以及千粒重的檢測(cè)結(jié)果，綜合考慮各營(yíng)養(yǎng)成分含量、千粒重的高低，以及各品種引種后各指標(biāo)的變化幅度，筆者認(rèn)為2號(hào)瓜蔞子可作為引種至貴州遵義的優(yōu)質(zhì)品種，并進(jìn)一步檢測(cè)2號(hào)瓜蔞子引種前后微量元素及重金屬的含量。

3.2 微量元素含量 瓜蔞子中富含人體必需的微量元素Fe、Zn、Cu、Mn。這些微量元素對(duì)人體新陳代謝、心血管健康均有重要作用，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保健功能[12-13]。根據(jù)原產(chǎn)地、引種地2號(hào)瓜蔞子中Fe、Zn、Cu、Mn 4種微量元素的含量檢測(cè)結(jié)果(表4)可知，浙江紹興產(chǎn)品種中2號(hào)瓜蔞子Fe、Zn的含量較高，達(dá)62.5%，引種至貴州遵義后，F(xiàn)e、Zn含量分別為57.3%、 44.7%，分別降低了8.3%、29.5%，其中Zn的含量差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Cu、Mn兩種元素則分別增加了20.0 %、1.9 %。盡管Fe、Zn的含量有所降低，但整體上差別不大，不影響2號(hào)瓜蔞子的質(zhì)量。

表4 原產(chǎn)地與引種地2號(hào)瓜蔞子中微量元素含量 (n=4)

注：含量變化為該品種在貴州遵義的含量與浙江紹興含量差異的百分?jǐn)?shù)；“*”表示該指標(biāo)含量較原產(chǎn)地具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

3.3 重金屬含量 重金屬含量是中藥材質(zhì)量分析檢測(cè)的一項(xiàng)重要指標(biāo)。大氣沉降、殺蟲(chóng)劑的使用、土壤污染均可導(dǎo)致藥材植物中重金屬的積聚，并通過(guò)食物鏈造成對(duì)人體的傷害[14-15]。為此，本研究進(jìn)一步對(duì)2號(hào)瓜蔞子中汞、砷、鉛的含量進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果顯示(表5)，原產(chǎn)地與引種地的2號(hào)瓜蔞子中均未檢出鉛，引種地2號(hào)瓜蔞子中汞、砷的含量比原產(chǎn)地的含量降低了37.14 %、79.21 %，其中砷含量下降最多，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。整體來(lái)看，引種地2號(hào)瓜蔞子中重金屬含量比原產(chǎn)地更低。

表5 原產(chǎn)地與引種地2號(hào)瓜蔞子中重金屬的含量 (n=4)

注：“**”表示該指標(biāo)含量較原產(chǎn)地具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。

4 討論

4個(gè)栝樓品種引種至貴州遵義后，瓜蔞子中栝樓仁三醇、蛋白質(zhì)、脂肪、多糖的含量均呈現(xiàn)不同程度的變化。貴州遵義引種栽培的4種瓜蔞子中栝樓仁三醇的含量和原產(chǎn)于浙江紹興對(duì)應(yīng)品種的含量差異不大(兩地差異范圍在0.17%～11.98%之間)，均符合2015版《中國(guó)藥典》的相關(guān)規(guī)定。營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定結(jié)果顯示引種地(貴州遵義)產(chǎn)2號(hào)瓜蔞子蛋白質(zhì)含量最高，為16%，比原產(chǎn)地(浙江紹興)顯著增加16.11%；2號(hào)瓜蔞子脂肪和多糖含量在4個(gè)引種品種中變化幅度最小，含量分別為28.30%、0.104%。同時(shí)，筆者對(duì)引種地與原產(chǎn)地瓜蔞子進(jìn)行了千粒重的測(cè)定，顯示2號(hào)瓜蔞子千粒重為280 g，其變化幅度最小，僅比原產(chǎn)地對(duì)應(yīng)品種減少3.45%。經(jīng)篩選，初步判斷 2 號(hào)瓜蔞子更適宜在貴州遵義進(jìn)行引種栽培。引種地2號(hào)瓜蔞子中的微量元素鋅、銅、錳的含量均高于原產(chǎn)地，僅鐵的含量降低了8.3%；鉛、汞、砷等重金屬的含量檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，汞的含量比原產(chǎn)地降低37.14%，砷的含量比原產(chǎn)地顯著降低79.21%，鉛在兩個(gè)產(chǎn)地均未檢測(cè)到。

種子是生產(chǎn)中藥材的基礎(chǔ)物質(zhì)，其質(zhì)量好壞直接影響到藥材的安全性、穩(wěn)定性和有效性[16]。瓜蔞子是葫蘆科草質(zhì)藤本植物栝樓的種子，因此筆者為引種優(yōu)良適宜品種至貴州遵義，從栝樓仁三醇、脂肪、蛋白質(zhì)等藥用活性成分和營(yíng)養(yǎng)成分方面進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)與對(duì)比，發(fā)現(xiàn)兩地間各成分含量存在不同程度的差異，這可能與兩地的種植環(huán)境有關(guān)。貴州遵義與浙江紹興兩地均屬亞熱帶季風(fēng)氣候，氣候差別不是很大，但可能仍存在種植管理、土壤營(yíng)養(yǎng)元素等其他環(huán)境因子的差別，這些因素復(fù)合疊加、相互作用，對(duì)瓜蔞子的品質(zhì)形成了一定影響[17-18]，使一部分檢測(cè)指標(biāo)存在兩地間的顯著差異，但大多數(shù)成分兩地的質(zhì)量基本一致，甚至引種地產(chǎn)的質(zhì)量更佳。此外，筆者前期通過(guò)對(duì)2號(hào)品種原產(chǎn)地與引種地瓜蔞子中的脂肪類成分的分析得出，引種地(貴州遵義)與原產(chǎn)地(浙江紹興)瓜蔞子的質(zhì)量相當(dāng)，甚至引種地還含有對(duì)機(jī)體更有益的脂肪成分[19]。這使得貴州引種的瓜蔞子不僅可作為休閑食品，也可開(kāi)發(fā)為功能性食用油脂。同時(shí)，2號(hào)瓜蔞子品種為越蔞2號(hào)，是浙江省紹興市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院選育的優(yōu)良品種，其形狀穩(wěn)定、適應(yīng)性強(qiáng)、結(jié)果快、抗高溫[20]，有利于在貴州遵義種植。

綜上所述，對(duì)于浙江紹興引種栽培到貴州遵義的4種瓜蔞子，從藥效成分和營(yíng)養(yǎng)成分以及種子千粒重測(cè)定結(jié)果來(lái)看，筆者認(rèn)為2號(hào)瓜蔞子較適宜在貴州遵義地區(qū)引種栽培，其微量元素、重金屬含量進(jìn)一步驗(yàn)證了它是最優(yōu)品種，適宜在貴州遵義進(jìn)行大規(guī)模的推廣種植，但這只是2017至2018年的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，瓜蔞子的形態(tài)特征以及藥效、營(yíng)養(yǎng)成分含量的穩(wěn)定性還需進(jìn)一步多年的觀察研究。同時(shí)，對(duì)瓜蔞子引種后的生態(tài)適應(yīng)性和產(chǎn)量也有待進(jìn)一步考察。