莢琳琳 季必華

在近年來，梅毒發(fā)病人數(shù)一直居高不下，這嚴(yán)重威脅了人們的健康。梅毒螺旋體在機(jī)體內(nèi)長期存在的感染機(jī)制至今未明，目前的研究主要在T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)中。Th17細(xì)胞是近年來新發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞，它在病原體感染的過程中通過誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞的細(xì)胞因子來間接清除細(xì)胞外的細(xì)菌和真菌[1]。目前對于Th17細(xì)胞如何參與梅毒螺旋體的免疫致病過程,以及它在梅毒不同病程中起的作用，仍不明確。Th17細(xì)胞主要分泌IL-17、IL-21、IL-22等細(xì)胞因子，其中以分泌IL-17為主[2]。IL-23屬于IL-12細(xì)胞因子家族，它可以刺激真皮組織中的Th17細(xì)胞產(chǎn)生Th17相關(guān)的細(xì)胞因子，維持Th17細(xì)胞的發(fā)育，對IL-17的產(chǎn)生起著重要作用[3]。本研究通過比較早期與晚期梅毒患者外周血清中IL-17、IL-23的水平，并分別比較兩組與正常對照組IL-17、IL-23的水平，以明確梅毒患者在梅毒感染各期中IL-17、IL-23水平是否存在差異及變化趨勢，從而為有效治療梅毒以及梅毒患者的轉(zhuǎn)歸提供一定的理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 在2013年10月至2014年10月期間收集18例早期梅毒患者(病程小于2年)，男9例，女9例；年齡23～51歲，平均(34.667±11.571)歲，18例晚期梅毒患者(病程大于2年)，男7例，女11例；年齡21～52歲，平均(35.278±9.981)歲。多數(shù)早期患者都有硬下疳、玫瑰疹及扁平濕疣等表現(xiàn)。晚期患者均無任何皮膚黏膜損害。同期收集12例健康志愿者作為正常對照組，男5例，女7例；年齡21～49歲，平均(33.333±9.247)歲。

1.2 研究方法 所有入選早晚期梅毒患者及正常對照組人群均抽取外周靜脈血5 mL，靜置于室溫下血液自然凝固10～20 min后，放入離心機(jī)(2000～3000 r/min)，離心20 min，收集血清，立即行TPPA和RPR試驗(yàn)，同時進(jìn)行HIV抗體的檢測。另取1 mL血清于凍存管分裝，并標(biāo)注編號放置于-70℃冰箱冷凍保存，以備IL-17及IL-23因子的檢測。所有細(xì)胞因子檢測操作按說明書進(jìn)行450 nm測吸光度利用標(biāo)準(zhǔn)曲線計算濃度。檢測步驟按說明書進(jìn)行，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出血清中IL-17及IL-23的濃度。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件，多個樣本均數(shù)的兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，兩獨(dú)立樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，顯著性檢驗(yàn)水平為0.05。相關(guān)性指標(biāo)采用直線相關(guān)法分析，并作相關(guān)系數(shù)r的假設(shè)檢驗(yàn)，顯著性檢驗(yàn)水平為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 早期梅毒組、晚期梅毒組及正常對照組IL-17、IL-23的水平 早期梅毒組、晚期梅毒組血清中的IL-17及IL-23均高于正常對照組，差異有顯著性。見表1。早期梅毒組的IL-17、IL-23水平高于正常對照組，差異有顯著性(P<0.05)；晚期梅毒組的IL-17、IL-23水平高于正常對照組，差異有顯著性(P<0.05)；晚期梅毒組血清中的IL-17、IL-23水平較早期梅毒組水平偏高，差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表1 早期梅毒組、晚期梅毒組及正常對照組的血清中的IL-17、IL-23水平的比較

注：晚期梅毒組血清中IL-17的水平高于早期梅毒組，P>0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義；晚期梅毒組血清中IL-23的水平高于早期梅毒組，P>0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義

2.2 早期梅毒組及晚期梅毒組的血清中的IL-17及IL-23水平的相關(guān)性分析 早期梅毒組的IL-17和IL-23水平的相關(guān)系數(shù)r=0.917，呈正直線相關(guān)關(guān)系，P<0.05；晚期梅毒組的IL-17和IL-23水平的相關(guān)系數(shù)r=0.891，呈正直線相關(guān)關(guān)系，P<0.05。見表2。

表2 早期梅毒組及晚期梅毒組的血清中的IL-17及IL-23水平的相關(guān)性

3 討論

3.1 IL-17與梅毒病程的關(guān)系 IL-17主要由Th17細(xì)胞分泌，此外γδ17細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞以及NKT細(xì)胞都能夠產(chǎn)生[4]。Burehill等[5]在研究由博氏疏螺旋體感染引起的萊姆病關(guān)節(jié)炎時發(fā)現(xiàn)，博氏疏螺旋體感染人體后可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生IL-17，而抑制機(jī)體IL-17水平可以阻止病情的發(fā)展。故推測梅毒螺旋體的感染也可導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生IL-17，而IL-17可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞、軟骨細(xì)胞等分泌IL-6、IL-lβ及TNF-a等炎性細(xì)胞因子[6], 而IL-6、IL-1β和IL-23一起可以再次誘導(dǎo)Th17分化[7]。這樣的正反饋機(jī)制可能是梅毒患者血清中IL-17的水平高于正常組的原因，也是本試驗(yàn)中晚期梅毒組中IL-17的水平略高于早期組的原因，雖然沒有統(tǒng)計學(xué)意義，但由于其接近檢驗(yàn)水準(zhǔn)，若增加樣本量，極可能出現(xiàn)新的結(jié)果，即：晚期梅毒組患者血清中IL-17的水平高于早期梅毒組。故猜測隨著TP感染時間的延長，IL-17水平有上升趨勢。

Pastuszczak等[8]通過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在部分無癥狀神經(jīng)梅毒患者腦脊液中IL-17水平較高，且腦脊液中細(xì)胞計數(shù)量與IL-17的水平呈正相關(guān)。2014年有報道指出：IL-17水平的升高與神經(jīng)梅毒的預(yù)后不良呈正相關(guān)[9]。這些結(jié)果均提示在梅毒患者中IL-17水平的升高，這些結(jié)論與成果也與本次試驗(yàn)中梅毒患者血清中IL-17的水平高于正常對照組的結(jié)果相符。

3.2 IL-23與梅毒病程的關(guān)系 IL-23是一種異二聚體蛋白，它有它特有的IL-23p19亞基和IL-12/23p40通過二硫鍵配對組成。IL-23主要由抗原遞呈細(xì)胞分泌,活化的巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、B細(xì)胞都能夠產(chǎn)生IL-23p19亞基。目前IL-23水平上升的具體機(jī)制不明，但在多種疾病中IL-17與IL-23的水平均呈現(xiàn)正相關(guān)[10-12]，故猜測IL-17與IL-23之間可能存在某種反饋機(jī)制。國內(nèi)有人在研究二期梅毒時指出，在二期梅毒患者血清中IL-23的水平高于正常對照組，且與其RPR滴度沒有明顯的線性相關(guān)性[12]。這與本研究的結(jié)果相符合。

3.3 IL-17及IL-23與梅毒病程遷延的關(guān)系 本研究結(jié)果中早期及晚期梅毒組的血清中IL-17及IL-23的水平均明顯高于正常對照組。說明了Th17細(xì)胞確實(shí)參與了TP的致病和感染機(jī)體的過程。在未治療的前提下，晚期梅毒組的IL-17和IL-23的水平略高于早期梅毒組的IL-17和IL-23的水平之間，雖然其沒有統(tǒng)計學(xué)意義，但由于P值都接近0.05，故猜測隨著TP感染病程的遷延，IL-17及IL-23的免疫應(yīng)答進(jìn)行性增強(qiáng)。

有研究表面降低體內(nèi)IL-17或IL-23的水平，可以緩解銀屑病患者的病情，甚至比常規(guī)全身性藥物更有效[13]。說明IL-17及IL-23水平的上升可能是銀屑病活動的原因之一。在既往的研究中銀屑病一直屬于Th1型疾病，而Th1細(xì)胞在梅毒的發(fā)病過程中也起著重要作用，而且在本次研究中，晚期梅毒組的血清中IL-17及IL-23的水平有高于早期梅毒組的趨勢。結(jié)合上文，故猜測IL-17或IL-23水平的上升可能是梅毒慢性化的原因之一。但是目前國內(nèi)外文獻(xiàn)中，沒有直接的證據(jù)證明這一點(diǎn)，可能還需要后續(xù)的研究加以佐證。

3.4 結(jié)語 血清中IL-17及IL-23的水平在早期梅毒組與晚期梅毒組之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義，但是P值均接近0.05，這可能與本研究中樣本量較少有關(guān)。今后再繼續(xù)觀測該類患者治療前后的IL-17及IL-23動態(tài)水平變化，可能有更大的意義。