黃敏敏 張閩春 黃曉麗 劉 洋 李 巍 傅建煒* 姚清華*

（1福建省農(nóng)業(yè)科學院農(nóng)業(yè)質量標準與檢測技術研究所，福建福州350003；2福建省武夷山市食用菌站，福建武夷山354300；3福建省南平市農(nóng)業(yè)局，福建南平353000）

秀珍菇（Pleurotus geesteranus）中文名稱為紫孢側耳，別名姬菇、黃白平菇、美味側耳等，屬于真菌門，擔子菌綱，傘菌目，側耳科，側耳屬，是近年來栽培面積最廣的珍稀食用菌之一。該菇富含鮮味氨基酸、甜味氨基酸、支鏈氨基酸、多種不飽和脂肪酸、蛋白多糖及維生素和鐵、鈣、磷、鋅等微量元素。尤為值得一提的是，秀珍菇的蛋白質含量高于雙孢蘑菇、香菇、草菇等食用菌，有“菇中極品”之稱。掃描電鏡廣泛應用于番茄、水稻、甘藍、烤煙等農(nóng)作物[1-6]和野兔、扁蛾、嗜尸性蠅等動物[7-9]及多種細菌和真菌[10-16]的亞微機構和超微結構研究。食用菌菌種制作、培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基是關鍵性因素，其酸堿度（pH）對食用菌菌種的生長尤為重要，關系到菌種制作的成敗[17]，并且對食用菌的產(chǎn)量和品質也有一定的影響。但應用掃描電子顯微鏡觀察不同酸堿度的液體培養(yǎng)基對福秀5669菌絲體大小、鎖狀個數(shù)和表面結構等的影響尚未見報道。筆者觀察不同酸堿度液體培養(yǎng)基培養(yǎng)福秀5669（圖1）菌絲體，探討pH對其菌絲直徑、鎖狀個數(shù)和表面結構的影響，以期為福秀5669生產(chǎn)等提供科學參考。

圖1 福秀5669

1 材料與方法

1.1 供試材料

福秀5669號，由福建省農(nóng)業(yè)科學院土壤肥料研究所環(huán)保研究室食用菌育種課題組提供。

培養(yǎng)基配方：土豆200%，白糖20%，加水1000 mL。試驗用的鹽酸和氫氧化鈉，購于國藥集團化學試劑有限公司。

1.2 試驗方法

首先將配制好的液體培養(yǎng)基用鹽酸和氫氧化鈉制成 pH5（C1）、pH6（C2）、pH7（C3）、pH8（C4）、pH9（C5）、pH10（C6）6個梯度（6個處理），裝入三角瓶，每個三角瓶裝量為50 mL，高壓滅菌。每處理3個重復，每重復1瓶，待液體培養(yǎng)基溫度冷卻至26℃左右接種。接種后置于26℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)，菌絲培養(yǎng)18 d取樣作電鏡觀測材料。

1.3 電鏡觀察方法

切取不同處理的新鮮福秀5669菌絲體，迅速投入濃度為5%的戊二醛固定液中固定，并在4℃冰箱中存放4 h，用0.2 mol/L磷酸緩沖液漂洗3次，15 min/次，再用濃度1%鋨酸對樣品進行第二次固定，放在4℃冰箱存放2 h。將雙固定好的樣品先用0.2 mol/L磷酸緩沖液沖洗3次，每次10～15 min，再用乙醇進行梯度脫水：50%，70%，80%，90%，各脫水10～15 min，100%乙醇脫水3次，每次10 min，用環(huán)氧丙烷溶液置換2次。最后將樣品置于日立HCP-2臨界點干燥儀中干燥。干燥后的樣品用銅臺粘好后放入EIKO IB-5型離子鍍膜儀上噴鍍黃金，再用日本電子JSM-6380 Lv型掃描電子顯微鏡進行觀察拍照。

1.4 測定方法

采用直接測定方法計算不同處理菌絲直徑和菌絲鎖狀聯(lián)合個數(shù)。每個樣品的每個項目均分別觀察了3個視野，據(jù)此統(tǒng)計菌絲鎖狀聯(lián)合數(shù)、測量菌絲直徑，按放大倍率換算成實際長度；采用了DPS7.05軟件進行差異顯著性檢驗。

2 結果與分析

2.1 不同酸堿度對福秀5669菌絲直徑的影響

2.1.1 不同酸堿度對福秀5669菌絲最大直徑的影響

由圖1可知，C5（pH9）處理的福秀5669菌絲最大直徑比C1（pH5）、C2（pH6）、C3（pH7）、C4（pH8）和C6（pH10）處理的福秀5669菌絲分別增加92.80%、31.69%、31.69%、28.53%和22.75%，差異達顯著或極顯著水平（P＜0.05和P＜0.01）。

圖1 酸堿度對福秀5669菌絲最大直徑的影響

2.1.2 不同酸堿度對福秀5669菌絲最小直徑的影響

由圖2可知，福秀5669菌絲最小直徑C2與C3處理之間差異不顯著（P＞0.05）。但C6、C5、C4和C1處理的福秀5669菌絲最小直徑比C3處理的福秀5669菌絲分別小20.17%、57.95%、64.18%和67.47%，差異達顯著和極顯著水平（P＜0.05和P＜0.01）。

圖2 酸堿度對福秀5669菌絲最小直徑的影響

2.2 不同酸堿度下福秀5669菌絲體中鎖狀個數(shù)的影響

由圖3可知，C5處理的福秀5669菌絲鎖狀個數(shù)比 C1、C2、C3、C4和 C6處理的福秀 5669 鎖狀個數(shù)多，且差異達極顯著水平（P＜0.01）。

圖3 酸堿度對福秀5669菌絲體中鎖狀個數(shù)的影響

2.3 不同酸堿度對福秀5669菌絲體表面結構的影響

由圖4可知，C1處理（pH5）的福秀5669菌絲上有紋飾，大小較均勻，呈圓形，未見鎖狀聯(lián)合。C2處理（pH6），菌絲呈圓形，表面有較淺紋飾，大小有的較均勻，有的鎖狀變形帶有紋飾，有的表面光滑。C3處理（pH7）的菌絲大小較均勻，表面有大小不均勻的紋飾，有的菌絲皺縮，有的鎖狀干癟。C4處理（pH8），菌絲部分斷裂，有的紋飾大小不一，鎖狀大小不均勻，形態(tài)有變化。C5處理（pH9），菌絲大小不均勻，紋飾變化大，菌絲表面紋飾模糊，有的呈扁條狀，有的菌絲斷裂，鎖狀個數(shù)多且表面紋飾較模糊。C6處理（pH10），菌絲大小不均勻，表面光滑沒有紋飾，有的呈扁條狀，鎖狀表面也無紋飾。

圖4 酸堿度對福秀5669菌絲體表面結構的影響

3 小結與討論

目前pH對食用菌生長影響的研究，多集中在菌絲生長、產(chǎn)量和品質等方面，關于pH對食用菌形態(tài)特征影響的研究未見報道。宮志遠等[18]試驗表明，阿魏蘑、杏鮑菇、真姬菇、酒紅球蓋菇和楊樹菇菌絲生長的最適pH分別為6.0、5.4、6.0、5.4和6.8；而pH8～10蓖草料栽培阿魏菇菌絲生長健壯，污染率低，比常規(guī)料栽培阿魏菇pH高1.5～2.5[19]；墨汁鬼傘菌絲體生長適宜pH9，菌絲濃密，生長速度最快[20]；巨大口蘑菌絲適宜生長pH7.0，菌絲生長快，菌絲粗壯、濃白、致密[21]；pH6.21培養(yǎng)基能提高姬松茸菌絲生長速度等[22]；陳志松[23]試驗表明，金針菇適宜pH為5.5～6.2，pH低于5.0菌絲生長速度明顯變慢，菌種塊形成一個濃的白毛團。劉葉高等[24]試驗表明，培養(yǎng)料pH6.5～7.5茶薪菇菌絲滿袋最快為44 d，生物轉化率最高為47%，而pH6.5～7.5，杏鮑菇菌絲滿袋最快為34 d，生物轉化率為46%，pH6.5～7.5阿魏菇菌絲滿袋最快為38 d，生物轉化率最高為42%。江枝和等[25]試驗結果，pH為8.5的培養(yǎng)料栽培的虎奶菇菌核的蛋白質氨基酸評分和營養(yǎng)指數(shù)居試驗處理的第一位，化學評分、必需氨基酸指數(shù)和生物價，均居第二位，氨基酸比值系數(shù)分，居第3位，綜合評價最高。由此可見，適宜酸堿度不僅能夠促進食用菌菌絲生長、提高食用菌產(chǎn)量，而且具有改善食用菌品質的作用。

筆者研究結果表明：pH 9培養(yǎng)基培養(yǎng)的福秀5669菌絲最大直徑比他處理有顯著增加，差異達顯著或極顯著水平（P＜0.05和P＜0.01），而菌絲鎖狀個數(shù)差異達極顯著水平（P＜0.01）。說明適宜的pH對福秀5669菌絲直徑及鎖狀個數(shù)顯著或極顯著的促進作用，反之則具有抑制作用。電鏡觀察結果，不同pH培養(yǎng)基培養(yǎng)福秀5669菌絲體表面形態(tài)明顯不同，有的菌絲表面無紋飾、模糊，又有的呈扁條狀，還有的菌絲斷裂及大小不均勻，鎖狀聯(lián)合表面有的無紋飾光滑或紋飾大小不均勻、模糊及干癟。今后應在分子水平探討pH對食（藥）用菌的作用機理。