楊維波，韓福祥，劉振明，董紅昌，張建華

（1.山東省陽(yáng)信縣中醫(yī)醫(yī)院 陽(yáng)信 251800；2.北京大學(xué)第一醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科 北京 100034）

隨著居民生活方式改變和老齡化進(jìn)程的加速，我國(guó)糖尿病的患病率正在迅速增長(zhǎng)，2002年糖尿病的患病率為2.7%[1]，2007 年增長(zhǎng)到9.7%[2]，2010 年一項(xiàng)涵蓋全國(guó)31個(gè)省市自治區(qū)的9.8萬(wàn)18歲以上的人群調(diào)查顯示，我國(guó)成人糖尿病患病率已上升到11.6%,糖尿病前期患病率為50.1%[3]，糖尿病已經(jīng)成為繼心腦血管、腫瘤后又一個(gè)嚴(yán)重危害人民健康的重要慢性非傳染性疾病。糖尿病的主要類型是2 型糖尿病，其主要病理生理機(jī)制為胰島β細(xì)胞功能受損造成的胰島素分泌不足和胰島素抵抗（Insulin resistance,IR）。

在祖國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)中，糖尿病典型的臨床癥狀屬于“消渴病”的范疇，幾千年來(lái)，中藥在治療“消渴病”的方面積累了很多寶貴經(jīng)驗(yàn)。近些年來(lái)，從中藥中提純的藥物有效成分應(yīng)用于臨床，在治療糖尿病方面發(fā)揮了不可替代的作用，葛根素是中藥葛根中活性物質(zhì)異黃酮類物質(zhì)的主要成分[4]，在臨床實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)其有改善2型糖尿病患者糖代謝的作用。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察葛根素對(duì)3T3-L1 脂肪細(xì)胞葡萄糖攝取及對(duì)IR 的影響，探討其作用機(jī)制，為臨床上治療糖尿病提供新的思路。

表1 Real-time PCR引物序列

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

小鼠前脂肪細(xì)胞（3T3-L1）（中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院）；3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（3-isobutyl-1-methylxanthine，IBMX，美國(guó)Sigrna 公司）；DMEM 高糖培養(yǎng)基（賽默飛世爾生物化學(xué)制品有限公司）；SDSPAGE凝膠配制試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)研究所）；抗體GLUT4、PI3K、AKT、AMPK、PPARγ（Santa Cruz 公司）；葛根素標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；Revertaid First Strand cDNA Synthesis Kit（美國(guó)Fermentas 公司）；引物和內(nèi)參GAPDH（上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司）；Rotor-Gene熒光定量PCR儀（Corbett Research 公司）；凝膠成像分析系統(tǒng)（Bio-Rad）；高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)（Thermo Fisher）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 3T3-L1細(xì)胞的誘導(dǎo)分化

將3T3-L1 前脂肪細(xì)胞置于含10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中，37℃、5%CO2培養(yǎng)，傳至第三代細(xì)胞狀態(tài)良好時(shí)，加人含0.5 mmol?L-1IBMX、10-6mol?L-1胰島素、1 μmmol?L-1地塞米松、10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)48 h后，換為含10 ug?mL-1胰島素的培養(yǎng)基48 h，最后在10%胎牛血清的DMEM 高糖培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，每2天換培養(yǎng)液1次，誘導(dǎo)分化9天的3T3-L1細(xì)胞經(jīng)油紅O染色鑒定，90%以上呈脂肪細(xì)胞表型用于試驗(yàn)。

1.2.2 3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型建立

參照文獻(xiàn)報(bào)道方法[5]3T3-L1脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟后，給予1 μmmol?L-1地塞米松在10%胎牛血清的DMEM高糖培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)，以葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶法分別在48、72、96、120 h測(cè)每孔培養(yǎng)液中葡萄糖的含量，與未接種細(xì)胞的空白孔葡萄糖相減，計(jì)算葡萄糖消耗量，當(dāng)兩組間葡萄糖的消耗量差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義時(shí)（P ＜0.05），為造模成功。葡萄糖消耗差值比例最大的時(shí)間點(diǎn)作為建立胰島素抵抗模型最佳作用時(shí)間。

1.2.3 細(xì)胞分組

取誘導(dǎo)分化成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞，將其分為空白組、模型組、葛根素10 mg?L-1組、葛根素100 mg?L-1組和葛根素200 mg?L-1組。其中空白組不建模型，以含10%胎牛血清的DMEM 高糖培養(yǎng)基培養(yǎng)；模型組為建立模型但不加藥物干預(yù)；其它3 組為建立模型后分別用不同濃度的葛根素干預(yù)。

1.2.4 檢測(cè)培養(yǎng)基上清中葡萄糖濃度及細(xì)胞活力測(cè)定

確定造模成功后，在葛根素干預(yù)組細(xì)胞培養(yǎng)體系中加入葛根素液180 μL,使其終濃度分別為10、100、200 mg?L-1，空白組、模型組加入等體積的培養(yǎng)液，共同孵育24 h。分別取每組的上清液1 mL 置于Eppendorf管中,高速離心,按葡萄糖測(cè)定試劑盒的操作說(shuō)明書,用葡萄糖氧化酶-過(guò)氧化物酶法檢測(cè)各組培養(yǎng)基上清中葡萄糖OD值。

各組按5x104/孔接種于96 孔,每孔加入20 μLMTT（5 g·L-1），孵育4 h,吸去上清，加入DMSO溶液150 μL/孔，震蕩10 min 充分溶解結(jié)晶，用酶標(biāo)儀測(cè)OD 值，波長(zhǎng)570 nm，以此代表細(xì)胞活力。

1.2.5 3T3-L1脂肪細(xì)胞RNA提取及Real time PCR分析

用1 mL TRIzol 提取細(xì)胞總RNA，設(shè)計(jì)GLUT4、PI3K、AKT、AMPK、PPARγ mRNA 和3-磷酸甘油醛脫氫 酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH）引物（表1），按照Real time PCR 試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，PCR反應(yīng)條件為95℃變性15 s，55℃退火20 s，72℃延伸20 s，共45個(gè)循環(huán)，反應(yīng)結(jié)束后確認(rèn)Real-Time PCR 的擴(kuò)增曲線和溶解曲線，以GAPDH 為內(nèi)參，計(jì)算mRNA 相對(duì)表達(dá)量，進(jìn)行均一化處理后，再進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，引物序列（表1）。

1.2.6 Western blot法檢測(cè)蛋白表達(dá)

用含1%PMSF 的RIPA 裂解細(xì)胞，離心取上清液，用BCA法檢測(cè)蛋白濃度，取20 μL蛋白樣品，以10%十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）分離蛋白，結(jié)束后轉(zhuǎn)印至PVDF 膜上，用含5%脫脂奶粉的TBST 室溫下封閉1 h 后，加入一抗，4℃孵育過(guò)夜后，PBST洗膜3次，每次10 min；加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的二抗，室溫輕搖1 h；用ECL法成像。

1.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 地塞米松作用后不同時(shí)間細(xì)胞培養(yǎng)基上清葡萄糖濃度

脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟后，給予地塞米松作用，分別測(cè)48、72、96、120 h空白組及模型組細(xì)胞培養(yǎng)基上清葡萄糖濃度，用模型組葡萄糖濃度與空白組葡萄糖濃度的差值反映細(xì)胞IR程度。結(jié)果顯示，各點(diǎn)模型組葡萄糖濃度高于空白組（P ＜0.01），提示48 h后可構(gòu)建穩(wěn)定的胰島素抵抗模型；96 h 時(shí)差值顯著高于其它時(shí)間組，證實(shí)96 h時(shí)IR達(dá)最佳（表2）。

2.2 葛根素作用于胰島素抵抗細(xì)胞后葡萄糖濃度測(cè)定

3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型誘導(dǎo)成功后，加入不同濃度的葛根素共同培養(yǎng)，測(cè)得各組細(xì)胞培養(yǎng)上清葡萄糖含量（表3）。與空白組比較，模型組培養(yǎng)基上清葡萄糖OD 值明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）；葛根素干預(yù)后，模型組細(xì)胞葡萄糖利用增加，葡萄糖OD 值與模型組比較明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）。葛根素100 mg?L-1組和葛根素200 mg?L-1組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）。

2.3 葛根素對(duì)脂肪細(xì)胞活力及分化的影響

MTT 結(jié)果顯示，各組吸光度值與空白組相比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），提示各濃度的葛根素對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞增殖活力無(wú)影響（表4）。

2.4 各組GLUT4、PI3K、AKT、AMPK、PPARγ mRNA Real-Time PCR結(jié)果比較

結(jié)果顯示，與空白組比較，模型組GLUT4、PI3K、AKT、AMPK、PPARγ mRNA 水平均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.01）；與模型組比較，葛根素10 mg?L-1、葛根素100 mg?L-1、葛根素200 mg?L-1組GLUT4、PI3K、AKT、AMPK、PPARγ mRNA 水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜0.05）；葛根素200 mg?L-1組與葛根素100 mg?L-1組比較GLUT4、PI3K、AKT、AMPK、PPARγ mRNA水平無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05）（表5）。

表2 地塞米松作用后不同時(shí)間細(xì)胞上清葡萄糖濃度（OD）值

表3 不同濃度葛根素對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)上清葡萄糖濃度的影響（OD值）

表4 不同濃度葛根素對(duì)細(xì)胞增殖的影響（OD值）

2.5 Western blot 法 檢 測(cè) 各 組GLUT4、PI3K、AKT、AMPK、PPARγ蛋白表達(dá)

結(jié)果比較顯示，與空白組比較，模型組GLUT4、PI3K、AKT、AMPK、PPARγ蛋白表達(dá)顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，葛根素10 mg?L-1、葛根素100 mg?L-1、葛根素200 mg?L-1組GLUT4、PI3K、AKT、AMPK、PPARγ蛋白表達(dá)升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），葛根素200 mg?L-1組與葛根素100 mg?L-1組比較，GLUT4、PI3K、AKT、AMPK、PPARγ蛋白表達(dá)無(wú)明顯變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（表6，圖1）。

3 討論

中醫(yī)認(rèn)為，脾胃為后天之本，氣血生化之源，飲食通過(guò)胃的受納腐熟、脾的運(yùn)化升清化生水谷精微，內(nèi)養(yǎng)五臟六腑，外養(yǎng)四肢百骸、皮毛筋骨，如飲食不節(jié)、過(guò)食肥甘醇酒厚味、安逸少動(dòng)，可損傷脾胃功能；脾失健運(yùn)，脾不能升清、胃不降濁，氣機(jī)不暢，不能散精上輸于肺，肺失津液則化燥，故口渴多飲，虛火內(nèi)生，則消谷善饑。明代趙獻(xiàn)可《醫(yī)貫·消渴論》云:“脾胃既虛，則不能敷布津液故渴”，可見，糖尿病的發(fā)生于脾胃功能關(guān)系密切。

表5 各組GLUT4、PI3K、AKT、AMPK、PPARγ mRNA Real-Time PCR結(jié)果比較

表6 各組GLUT4、PI3K、AKT、AMPK、PPARγ蛋白表達(dá)結(jié)果（蛋白灰度值）比較

圖1 Western blot法檢測(cè)各組蛋白表達(dá)

葛根為豆科植物野葛的干燥根，是調(diào)理脾胃功能的傳統(tǒng)中藥，其性味甘、辛、涼，歸脾、胃經(jīng)，具有解肌退熱、生津止渴、升陽(yáng)止瀉之功效[6]，《神農(nóng)本草經(jīng)》記載葛根“主消渴，身大熱，嘔吐，諸痹，起陰氣，解諸毒，葛谷，主下利”提示葛根有治療“消渴病”的作用。以葛根為主藥，配伍黃芩、黃連、甘草組成葛根芩連湯，臨床上可用于治療肥胖型2型糖尿病胃腸濕熱證。有研究顯示[7]，葛根芩連湯激活過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體γ（peroxisome proliferator- activated receptor gamma,PPARγ），從而上調(diào)脂聯(lián)素和細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4（glucose transporter type 4,GLUT4）mRNA 和蛋白質(zhì)表達(dá)水平，認(rèn)為葛根芩連湯有調(diào)節(jié)糖尿病大鼠模型糖代謝改善脂肪IR的作用。

葛根素是中藥葛根主要有效成分之一，近年來(lái)也有很多研究，楊蕾[8]等用葛根素對(duì)鏈脲佐菌素誘導(dǎo)糖尿病模型小鼠干預(yù)4 周后，發(fā)現(xiàn)葛根素降低了模型小鼠空腹葡萄糖。本實(shí)驗(yàn)用不同濃度的葛根素干預(yù)3T3-L1細(xì)胞胰島素抵抗模型后，細(xì)胞培養(yǎng)基中葡萄糖濃度均較模型組降低（P ＜0.01）；提示葛根素有改善3T3-L1細(xì)胞糖代謝的作用。

IR 是胰島素作用的靶器官、組織（如肝臟、肌肉、脂肪組織等）對(duì)胰島素的敏感性和反應(yīng)性降低，是正常劑量的胰島素產(chǎn)生低于正常生物學(xué)效應(yīng)的一種狀態(tài)[9]，是2型糖尿病的重要標(biāo)志。2型糖尿病IR主要體現(xiàn)在以下3 個(gè)水平[10]：（1）受體前水平，包括胰島素基因的異常、胰島素拮抗物質(zhì)影響、胰島素降解加速等；（2）受體水平，包括胰島素受體基因突變、胰島素絲氨酸/蘇氨酸磷酸化、胰島素受體抗體等；（3）受體后水平，包括胰島素受體后信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和葡萄糖攝取的各個(gè)環(huán)節(jié)障礙，如葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體合成和轉(zhuǎn)運(yùn)障礙等，其中以GLUT4尤為重要。

GLUT4 是主要的葡萄糖運(yùn)載體，分布于胰島素敏感的骨骼肌、心肌和脂肪細(xì)胞，主要存在于細(xì)胞內(nèi)，而細(xì)胞膜上的量很少，在胰島素的刺激下細(xì)胞膜上的GLUT4大量增加而實(shí)現(xiàn)葡萄糖的運(yùn)轉(zhuǎn)，胰島素刺激的GLUT4轉(zhuǎn)運(yùn)是通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的[11]。

磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）由調(diào)節(jié)亞基p85 和催化亞基p110 所組成的異二聚體，有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型3個(gè)家族成員，具有磷脂酰肌醇激酶和Ser/Thr（絲氨酸/蘇氨酸）蛋白激酶的雙重活性[12]。調(diào)節(jié)亞基p85 包含1 個(gè)SH3 區(qū)域、2 個(gè)富含脯氨酸區(qū)域、2 個(gè)被一非編碼區(qū)分開的Src 同源結(jié)構(gòu)域（SH2）和p110 與p85 相互作用的非編碼區(qū)，其中2 個(gè)SH2 可與磷酸化的酪氨酸殘基結(jié)合，引起催化亞基的活化，從而傳導(dǎo)酪氨酸激酶信號(hào)[13]。研究表明[14]，如果采用基因敲除等技術(shù)，造成PI3K調(diào)節(jié)亞基p85和催化亞基p110的基因功能缺陷均可導(dǎo)致糖、脂代謝紊亂，說(shuō)明PI3K對(duì)調(diào)節(jié)糖，脂代謝具有重要作用。

AKT 又稱蛋白激酶B（proteinkinaseB，PKB），為Ser/Thr 激酶，是PI3K 信號(hào)通路下游的重要靶蛋白，目前發(fā)現(xiàn)AKT有3個(gè)亞型，由不同基因編碼，具有80%的同源性，分布于不同組織。AKT 由N 端PH 結(jié)構(gòu)域、中間催化域和C端調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域組成，PH結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)脂質(zhì)與蛋白質(zhì)及蛋白質(zhì)與蛋白質(zhì)之間的相互作用，中間催化域可催化Ser/Thr 殘基磷酸化，C 端調(diào)節(jié)域含有磷酸化位點(diǎn)Ser473，此位點(diǎn)是AKT完全活化所必需的[15,16]。

當(dāng)細(xì)胞外胰島素與細(xì)胞膜胰島素受體結(jié)合，引起酪氨酸蛋白激酶活化時(shí)，后者又使胰島素受體底物發(fā)生磷酸化并與PI3K 調(diào)節(jié)亞基p85 的SH2 結(jié)構(gòu)域結(jié)合，招募并激活催化亞基p110，從而催化質(zhì)膜上磷脂酰肌醇磷酸化，與AKT 的PH 結(jié)構(gòu)域結(jié)合并定位于磷酸肌醇依賴性蛋白激酶1 附近，活化的AKT 從質(zhì)膜轉(zhuǎn)移至細(xì)胞質(zhì)、線粒體和細(xì)胞核內(nèi)，促使GLUT4 囊泡前移與細(xì)胞膜融合，介導(dǎo)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞，增加葡萄糖攝取[17]；激活PI3K和AKT分子，可啟動(dòng)整個(gè)PI3K/AKT 信號(hào)通路的傳導(dǎo)，增加GLUT4轉(zhuǎn)運(yùn)，調(diào)控血糖，減少肝糖原的合成，減輕胰島β細(xì)胞損傷[18]，如果胰島素受體后PI3K/AKT 信號(hào)通路障礙及下游靶蛋白功能異常均可引發(fā)糖、脂代謝障礙，繼而導(dǎo)致IR的發(fā)生。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：地塞米松誘導(dǎo)的3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型中GLUT4、P13K、AKT mRNA、蛋白表達(dá)較空白組下降，提示實(shí)驗(yàn)細(xì)胞模型有明顯的糖代謝障礙和IR；加入葛根素處理后以上指標(biāo)明顯升高，呈劑量依賴性，但200 mg?L-1組與100 mg?L-1相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），推測(cè)葛根素能通過(guò)P13K/AKT信號(hào)途徑升高GLUT4表達(dá)，改善脂肪細(xì)胞IR。

腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK）途徑也是胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要通路，AMPK 是一種參與調(diào)節(jié)細(xì)胞機(jī)體能量代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的蛋白激酶，廣泛存在于肝臟、骨骼肌和脂肪組織中。AMPK 一種異源三聚體蛋白，由α、β、γ3 個(gè)亞單位組成，AMPK 在調(diào)節(jié)肌體能量代謝的平衡方面起總開關(guān)作用，其活性受AMP/ATP 比值調(diào)控，參與多種代謝過(guò)程，能調(diào)節(jié)糖、脂肪和蛋白質(zhì)代謝，運(yùn)動(dòng)、組織缺血、缺氧等，都可以激活A(yù)MPK通路，活化的AMPK使脂肪酸氧化作用、肝糖原的轉(zhuǎn)化、骨骼肌對(duì)葡萄糖的攝取增強(qiáng)，并通過(guò)誘導(dǎo)GLUT4 向質(zhì)膜轉(zhuǎn)移，并通過(guò)磷酸化轉(zhuǎn)錄因子開啟GLUT4基因的表達(dá)，增加脂肪組織中葡萄糖的利用，從而使得機(jī)體對(duì)葡萄糖的攝取增強(qiáng)[19,20]。

PPARγ是核受體過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體的一個(gè)亞型，人體很多組織都能分泌PPARγ，但以脂肪組織最多，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明，激活脂肪細(xì)胞中PPARγ，可誘導(dǎo)內(nèi)臟和皮下大脂肪細(xì)胞較少，小脂肪細(xì)胞數(shù)目增加，從而增加胰島素的敏感性[21]。PPARγ激活后，主要通過(guò)以下方式提高胰島素敏感性[22]，改善IR：①促進(jìn)白色脂肪細(xì)胞分化，使其數(shù)量增多、體積減小，并增加胰島素受體的數(shù)目。抑制脂肪細(xì)胞的肥大和脂肪分解，誘導(dǎo)大脂肪細(xì)胞的凋亡；②調(diào)控脂肪細(xì)胞的分泌功能，增強(qiáng)脂聯(lián)素等細(xì)胞因子的合成；③促進(jìn)與胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)有關(guān)的多種基因的轉(zhuǎn)錄：通過(guò)上調(diào)PI3K 亞單位p85、CAP增加GLUT4的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)；④激活A(yù)MPK,通過(guò)非胰島素依賴機(jī)制促進(jìn)外周組織細(xì)胞的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)，抑制糖誘導(dǎo)的胰島素釋放，以改善葡萄糖代謝和高胰島素血癥。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)到地塞米松誘導(dǎo)的3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型中AMPK、PPARγmRNA、蛋白表達(dá)較空白組下降，加入葛根素處理后明顯升高，推測(cè)葛根素改善脂肪細(xì)胞糖代謝和IR可能與AMPK、PPARγ升高有關(guān)。

研究顯示[23]，P13K/AKT 和AMPK 信號(hào)通路存在復(fù)雜的交互作用，一方面，AMPK 的激活可以促進(jìn)P13K和AKT 等多種P13K/AKT 信號(hào)通路分子的活性增加，抑制胰島素受體底物-1 調(diào)控的負(fù)反饋回路,還可以通過(guò)調(diào)節(jié)PI3K 來(lái)激活A(yù)KT；PPARγ活化也能促進(jìn)PI3K的亞單位P85 的表達(dá),促進(jìn)胰島素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)；另一方面，PI3K/AKT 能調(diào)節(jié)AMPK 活性，也可通過(guò)調(diào)節(jié)C/EBPα、PPARγ的表達(dá)，在3T3-L1前脂肪細(xì)胞的分化中發(fā)揮重要作用[24]。

肥胖可引起IR，進(jìn)而引起糖尿病，目前的研究顯示隨著身體質(zhì)量指數(shù)和脂肪組織增加，糖尿病的發(fā)病率會(huì)升高[25]。脂肪組織是IR 發(fā)生的重要的靶組織，增加脂肪細(xì)胞的胰島素敏感度和葡萄糖攝取是治療2型糖尿病的手段之一。3T3-L1前脂肪細(xì)胞是Swiss小鼠胚胎成纖維細(xì)胞，能在誘導(dǎo)劑作用下分化為脂肪細(xì)胞，被廣泛應(yīng)用于糖、脂代謝相關(guān)的基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)研究。本實(shí)驗(yàn)選擇用地塞米松誘導(dǎo)建立3T3-L1 脂肪細(xì)胞胰島素抵抗模型，從細(xì)胞水平研究葛根素對(duì)IR 的作用機(jī)制，結(jié)果顯示，3T3-L1 脂肪細(xì)胞發(fā)生IR 后，葡萄糖攝取能力明顯下降，而葛根素能增加其對(duì)葡萄糖的攝取，改善IR，其機(jī)制可能與上調(diào)P13K、AKT、AMPK、PPARγ基因和蛋白表達(dá)有關(guān)。