葉遠(yuǎn)玲 王瑞明 胡芳玉 朱滿剛

(杭州市中醫(yī)院急診科，浙江 杭州 310007)

厭食癥是指因心情低落、怕胖而過分拒食、節(jié)食，導(dǎo)致體重下降、營養(yǎng)不良甚至不愿意保持最低體重的一種心理障礙性疾病〔1〕。厭食癥好發(fā)于女性，女性患者占比約為95%，這類患者常在青少年時期出現(xiàn)類似性格傾向〔2〕。厭食癥的治療目前存在較多難題，疾病帶來的早亡率依然居高不下，達(dá)10%～20%，早亡原因多為營養(yǎng)不良導(dǎo)致的并發(fā)癥與精神抑郁引起的自殺行為〔3〕。目前，厭食癥的治療手段主要包括手術(shù)治療、西藥治療、精神治療、中藥治療、心理治療、推拿等，且以西藥治療與心理治療為主，二者常聯(lián)合展開，但效果仍不盡人意〔4,5〕。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為厭食癥是因飲食不節(jié)導(dǎo)致的脾失健運、脾胃不和、胃納失司導(dǎo)致，長時間食欲不振、食量減少〔6〕。厭惡進(jìn)食等為主要表現(xiàn)，四季皆可發(fā)病，病程長，患者若接受有效且合理的治療一般預(yù)后良好，若早期誤診、誤治則不愈風(fēng)險高，嚴(yán)重影響患者日常生活與工作，可見為厭食癥患者找到一種安全有效的治療用藥的臨床意義〔7〕。黃芪是一種延用多年的中藥材，研究證實，黃芪內(nèi)含有諸多活性成分，如蔗糖、多糖等，這些成分均屬于大分子物質(zhì)，富含銅、硒、鋅等諸多微量元素，在這些大分子物質(zhì)中，與黃芪多糖相關(guān)的研究較多，其藥理作用寬，具有提高免疫力、抑菌、清除氧自由基、調(diào)節(jié)腸胃功能之效〔8,9〕。結(jié)合厭食癥病情表現(xiàn)，考慮可將黃芪多糖用于疾病的治療中，但目前國內(nèi)并無此類研究報道。本研究建立厭食大鼠模型，為其使用黃芪多糖治療，分析黃芪多糖對厭食大鼠胃腸動力與氧自由基表達(dá)的影響。

1 材料與方法

1.1實驗條件 本實驗在浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗研究中心SPF級實驗室展開，全部大鼠均在不銹鋼鼠籠飼養(yǎng)，且均為單獨分開飼養(yǎng)，給予其特制、充足、常規(guī)喂養(yǎng)，自由飲水，飼養(yǎng)室溫為20～24℃，飼養(yǎng)相對濕度為30%～50%，換氣量為10～20次/h，采光均為日光燈明暗交替。實驗展開期間全部墊料與飼料均由浙江中醫(yī)藥大學(xué)動物中心提供。

1.2實驗動物 SPF級健康SD大鼠105只，體重50～70 g，平均(65.14±3.52)g；雌雄各半，均由浙江中醫(yī)藥大學(xué)SPF級實驗動物中心提供。

1.3實驗藥品 黃芪多糖，購自天津賽諾制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字：Z20040086，規(guī)格：250 mg/瓶。多潘立酮混懸液(嗎丁啉片)，購自西安楊森制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字：H10910003，規(guī)格：10 mg/片。江中健胃消食片，購自江中藥業(yè)股份有限公司，批準(zhǔn)文號：H14051011，規(guī)格：500 mg/片。

1.4主要試劑 蘭州軍區(qū)陸軍總院提供10%水合氯醛，生工生物工程股份有限公司提供抑肽酶，天津市大茂化學(xué)試劑廠提供的冰醋酸，天津市德恩化學(xué)試劑有限公司提供的氫氧化鈉，上海生工生物工程股份有限公司提供的羥甲基纖維素鈉，制備營養(yǎng)性半固體糊：取羥甲基纖維素鈉16 g置入400 ml蒸餾水內(nèi)，分別向內(nèi)加入糖12.8 g、奶粉25.6 g、淀粉12.8 g與50.7 g 10%活性炭粉末，均勻攪拌，配制為300 g約300 ml碳末半固體糊狀物，放于4℃冰箱內(nèi)冷藏，在使用時置入室溫下恢復(fù)。酶聯(lián)免疫吸附試劑盒由北京解放軍總醫(yī)院東亞免疫技術(shù)研究所提供。

1.5主要儀器 常熟市天量儀器公司提供電子天平，河南原陽振華公司提供動物手術(shù)器械箱及動物固定器，長沙平凡公司提供的臺式高速離心機(jī)，美國雷杜公司提供全自動酶標(biāo)儀，長沙湘平科技公司提供電子分析天平，青海海爾電器提供超低溫保存箱，澳大利亞Dynamica公司提供冷凍離心機(jī)、燒杯、試管、灌胃針等。

1.6方法

1.6.1分組方法 SPF級健康SD大鼠105只，將其中15只作為空白對照組，其他90只作為建模組，空白對照組給予常規(guī)飼養(yǎng)與自由飲水，建模組喂養(yǎng)特制飼料、自由飲水；經(jīng)隨機(jī)數(shù)字表法將建模組分為6組，模型組：不給藥；中成藥對照組：給予江中健胃消食片；西藥對照組：給予嗎丁啉；黃芪多糖低劑量組：給予低劑量黃芪多糖；黃芪多糖中劑量組：給予中劑量黃芪多糖；黃芪多糖高劑量組：給予高劑量黃芪多糖。

1.6.2制備模型 使用病因模擬法〔10〕制備模型。制作特制飼料：按照相應(yīng)比例將新鮮肥肉、白糖、魚肉松、奶粉、玉米粉、鮮雞蛋、黃豆粉等混勻，捏為餅狀，烘干，放入4℃環(huán)境冷卻。給予空白對照組常規(guī)飼料喂養(yǎng)，其他組均喂養(yǎng)特制飼料，全部大鼠單籠飼養(yǎng)，自由飲水、進(jìn)食，飼養(yǎng)時間為35 d，每日均需嚴(yán)格記錄大鼠體重及攝入量。制備模型成功標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)〔11〕：其他組大鼠攝入量較空白對照組大鼠平均下降20%～30%，或體重較空白對照組降低10%～15%。

1.6.3給藥方法與劑量 空白對照組不給藥，其他各治療組，劑量根據(jù)人與大鼠表面積比換算為等效劑量：低劑量組、中劑量組、高劑量組分別腹腔注射黃芪多糖100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg，將黃芪多糖注入0.5 ml 0.9%氯化鈉注射液腹腔注射；中成藥對照組給予0.576 g/kg江中健胃消食片溶劑灌服，西藥對照組給予1.03 mg/kg嗎丁啉溶劑灌服，1次/d。模型制備成功7 d后給予各組大鼠正常飼料常規(guī)喂養(yǎng)，并灌胃給藥或腹腔注射，連續(xù)給藥15 d，給藥結(jié)束后不禁水但禁食16 h，在第16天給予藥物注射或灌服40 min后給予各組2 ml半固體糊灌服，灌服20 min后對其實施脫椎人道處死，進(jìn)行標(biāo)本采集。

1.7觀察指標(biāo)

1.7.1胃腸動力 (1)胃動素(MTL)：①血胃動素：處死大鼠前采血，采血前向每管內(nèi)加入20 μl/ml抑肽酶，由股動脈采集6 ml全血注入抗凝管內(nèi)搖勻置于4℃冰箱內(nèi)保存，3 h內(nèi)經(jīng)4 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，血漿分離，置于-80℃低溫冰箱保存待檢，參照試劑盒說明書，經(jīng)放射免疫法檢測外周血MTL表達(dá)。②下丘腦MTL：取血后將大鼠處死，即刻斷頭將全腦取出，放入沸騰生理鹽水中煮約5 min，將下丘腦分離出，分別使用分析天平稱重放入漿管內(nèi)，向內(nèi)加入1 ml醋酸，勻漿置入塑料試管置于室溫下，低溫離心，取上清液，使用放射免疫法檢測下丘腦MTL含量。(2)胃內(nèi)殘留率：迅速解剖死去大鼠，結(jié)扎取胃，使用濾紙擦拭后稱重，沿著胃大彎將胃體剪開，將胃內(nèi)容物洗去后擦拭干凈，稱重。將全胃重減去胃凈重則為胃內(nèi)殘留物之重，計算胃內(nèi)殘留率，胃內(nèi)殘留率=(全胃重-胃凈重)/灌碳末半固體糊重量×100%。(3)小腸推進(jìn)率：將胃取出后迅速將腸系膜分離，將小腸取出，平鋪在白紙上，仔細(xì)測量幽門到盲腸部位的全長與幽門到碳末半固體糊前沿距離。小腸推進(jìn)率=(碳末半固體糊小腸內(nèi)推進(jìn)距離/小腸全長)×100%。

1.7.2氧自由基表達(dá) 取血于25℃環(huán)境下靜置30 min，經(jīng)3 000 r/min離心10 min，取上清液，使用全自動生化分析儀，經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗參照試劑盒說明書檢測超氧化物歧化酶(SOD)。

1.8統(tǒng)計學(xué)方法 應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行單因素方差分析、LSD-t檢驗。

2 結(jié) 果

2.1空白對照組與建模組實驗期間攝食量比較 攝食第1天兩組攝食量比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；攝食第7、14、21、28、35天，兩組攝食量均呈遞增趨勢，但建模組升高幅度不及空白對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2空白對照組與建模組實驗期間體重比較 攝食第1、7、14、21、35天兩組體重比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；攝食第28天，建模組大鼠體重明顯低于空白對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表1 空白對照組與建模組實驗期間攝食量比較

表2 空白對照組與建模組體重比較

2.3各組胃腸動力相關(guān)指標(biāo)水平比較 模型組胃內(nèi)殘留率最高，后由高至低依次為黃芪多糖低劑量組、中成藥對照組、空白對照組、西藥對照組、黃芪多糖中劑量組、黃芪多糖高劑量組，組間整體比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，經(jīng)組間兩兩比較發(fā)現(xiàn)，空白對照組、中成藥對照組、黃芪多糖低劑量組組間兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；其他組間兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。7組大鼠中，黃芪多糖高劑量組小腸推進(jìn)率最高，后由高至低依次為黃芪多糖中劑量組、西藥對照組、空白對照組、中成藥對照組、模型組，組間整體比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，經(jīng)組間兩兩比較發(fā)現(xiàn)，空白對照組、中成藥對照組、黃芪多糖低劑量組組間兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；其他組間兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表3 各組胃腸動力相關(guān)指標(biāo)水平比較

與空白對照組比較:1)P<0.05；與模型組比較:2)P<0.05；與中成藥對照組比較:3)P<0.05；與西藥對照組比較:4)P<0.05；與黃芪多糖低劑量組比較:5)P<0.05；與黃芪多糖中劑量組比較:6)P<0.05，下表同

2.4各組MTL比較 黃芪多糖高劑量組大鼠外周血、下丘腦MTL表達(dá)均最高，其次為黃芪多糖中劑量組、西藥對照組、空白對照組、中成藥對照組、黃芪多糖低劑量組、模型組，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；空白對照組、中成藥對照組、黃芪多糖低劑量組3組組間兩兩比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

2.5各組SOD水平比較 空白對照組SOD水平最高〔(95.41±8.21)U/ml〕，其次為黃芪多糖高劑量組〔(81.02±1.11)U/ml〕、黃芪多糖中劑量組〔(76.14±1.02)U/ml〕、中成藥對照組〔(62.24±3.12)U/ml〕、西藥對照組〔(61.96±2.54)U/ml〕、黃芪多糖低劑量組〔(60.95±2.62)U/ml〕、模型組〔(48.91±3.20)U/ml〕，組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(F=243.507,P<0.001)。中成藥對照組、西藥對照組、黃芪多糖低劑量組三組組間兩兩比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

表4 各組MTL表達(dá)比較

3 討 論

目前為大鼠使用甲狀腺素片長時間喂養(yǎng)、向其腹腔或腦室內(nèi)注射CCK-8等均是致大鼠厭食主要手段，此外，運動限制、飲食等也可建立厭食癥大鼠模型。近年來，國內(nèi)多參照汪受傳教授建立的病因模擬法制備大鼠模型，相較于其他模型的建立該方法穩(wěn)定性更好。本研究參照該方法制作特殊飼料對大鼠進(jìn)行喂養(yǎng)，模擬老年人群在日常生活中不合理飲食、營養(yǎng)搭配不當(dāng)?shù)臓顟B(tài)，該狀態(tài)與厭食癥中醫(yī)病因機(jī)制基本一致，且在實驗開展期間讓大鼠自由飲水進(jìn)食，這同臨床實際更相近，得到的數(shù)據(jù)結(jié)果也更具合理性。

厭食癥是多發(fā)病、常見病，其患病機(jī)制復(fù)雜多樣，以喂養(yǎng)不當(dāng)、飲食不節(jié)較多見，脾胃不和、納化失職是其主要病機(jī)〔12～14〕。針對這一病機(jī)推測厭食癥治療全程應(yīng)保證運脾和胃方法貫穿始終。黃芪是一味常用中藥，該藥味甘性溫，可補(bǔ)氣升陽、托毒排膿、固表止汗、生肌〔15〕。在我國藥典中有規(guī)定，黃芪作為藥物使用有兩種，包括膜莢黃芪干燥根與豆科植物蒙古黃芪干燥根。近幾年隨著中醫(yī)藥方面研究的深入，現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)，黃芪中除了富含黃酮、黃芪甲苷等具有較強(qiáng)活性的小分子化合物外，大分子化合物如黃芪多糖等也同樣具有諸多方面的藥用活性，在緩解食欲不振、增強(qiáng)機(jī)體免疫力方面均有一定應(yīng)用價值〔16，17〕。本研究結(jié)果顯示，黃芪多糖高劑量組大鼠胃腸動力改善效果最佳，且氧自由基表達(dá)較其他組大鼠更接近空白對照組，提示黃芪多糖用于厭食大鼠有著理想的增強(qiáng)大鼠胃腸動力之效，大鼠氧自由基表達(dá)明顯改善。究其原因可能與黃芪多糖抗應(yīng)激、抗氧化機(jī)制有關(guān)，該結(jié)果也從側(cè)面提示了黃芪多糖對厭食大鼠胃腸損傷的改善效果，尤其是該劑量黃芪多糖的應(yīng)用更利于提高大鼠食欲，改善其食欲不振的情況，對其胃腸還有一定保護(hù)效果〔18，19〕。MTL是一種消化間期激素，屬于腦腸肽激素，其主要對胃與腸道的動力產(chǎn)生生理作用，誘發(fā)小腸分節(jié)運動與胃收縮，還能刺激胃液分泌與胃蛋白酶分泌，幫助食物消化〔20〕。故血中MTL含量可直接用于評估機(jī)體胃腸道的功能狀態(tài)與運動狀態(tài)。本研究結(jié)果顯示黃芪多糖高劑量組血中、下丘腦中MTL含量均高于其他組大鼠，提示高劑量黃芪多糖能改善厭食大鼠胃腸功能，幫助胃排空，改善脾虛之證，幫助厭食大鼠食欲提升。

綜上所述，黃芪多糖利于促進(jìn)厭食癥大鼠小腸推進(jìn)與胃排空功能加強(qiáng)與氧自由基表達(dá)改善，對提高患者血內(nèi)、下丘腦內(nèi)氧化自由基表達(dá)有重要應(yīng)用價值，可能是治療厭食癥的機(jī)制之一。