王銀潔 劉本臣 劉軍 莫家欣 胡安琪 劉嘉琪 馮倩儀 宮凱敏

中圖分類號(hào) R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2019）23-3232-08

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.23.12

摘 要 目的：分析消腫止痛液有效部位的化學(xué)成分，為闡明其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及將其二次開發(fā)為軟膏制劑提供依據(jù)。方法：采用超高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用（UPLC-Q-TOF-MS）法對(duì)消腫止痛液有效部位（經(jīng)D101大孔樹脂分離得到的40%乙醇洗脫部位）進(jìn)行成分分析。色譜條件為采用Hypersil GOLD aQ C18色譜柱，以0.1%甲酸乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速0.4 mL/min，進(jìn)樣量4 μL，柱溫30 ℃;質(zhì)譜條件為采用電噴霧離子源（ESI）在正/負(fù)離子掃描模式（ESI+/ESI-）下進(jìn)行檢測(cè)，掃描范圍100～2 000 Da，碰撞能量45/-45 eV，擴(kuò)展碰撞器能量10/15 eV。獲得圖譜后收集化合物的精確分子量、保留時(shí)間和多級(jí)碎片離子信息，通過與對(duì)照品質(zhì)譜信息及參考文獻(xiàn)比對(duì)進(jìn)行化學(xué)成分鑒定。結(jié)果：共鑒定出48個(gè)化合物，在ESI+、ESI-檢測(cè)模式下分別鑒定出9、39個(gè)。其中，酚酸類成分10個(gè)、苯丙素類成分8個(gè)、蒽醌類成分9個(gè)、黃酮類成分3個(gè)、生物堿類成分7個(gè)、鞣質(zhì)類成分5個(gè)、其他類成分6個(gè)。結(jié)論：UPLC-Q-TOF-MS法可快速、高效、準(zhǔn)確地鑒定消腫止痛液有效部位的化學(xué)成分，該部位的主要化學(xué)成分為酚酸類、苯丙素類、蒽醌類、生物堿類和鞣質(zhì)類。

關(guān)鍵詞 消腫止痛液;有效部位;超高效液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用法;化學(xué)成分;鑒定

Identification of Chemical Components in Active Fraction of Xiaozhong Zhitong Lotion by UPLC-Q-TOF- MS

WANG Yinjie1，2，LIU Benchen1，LIU Jun1，MO Jiaxin2，HU Anqi2，LIU Jiaqi2，F(xiàn)ENG Qianyi2，GONG Kaimin1 ? ? ? ? ? （1.Preparation Center， Yinchuan Hospital of TCM， Yinchuan 750001， China;2.School of TCM， Guangzhou University of TCM， Guangzhou 510006， China）

ABSTRACT ? OBJECTIVE： To analyze chemical components in active fraction of Xiaozhong zhitong lotion， to clarify the material basis of its efficacy， and to provide reference for the second development of ointment preparation. METHODS： UPLC-Q-TOF-MS was adopted to analyze the chemical components of active fraction （40% ethanol elution site separated by D101 macroporous resin） of Xiaozhong zhitong lotion. The determination was performed on Hypersil GOLD aQ C18 column with mobile phase consisted of 0.1% formic acid acetonitrile （A）-0.1% formic acid water （B） （gradient elution） at the flow rate of 0.4 ? ? ? mL/min. The sample size was 4 μL， and the column temperature was 30 ℃. The condition of mass spectrometry was ESI detection in positive and negative scanning ion mode （ESI+/ESI-）. The scanning range was 100-2 000 Da. The collision energy was 45/-45 eV， and the energy of the extended collider was 10/15 eV. The accurate molecular weight， retention time and multi-stage fragment ion information of the compounds were collected after obtaining the chromatogram， and the chemical components were identified by comparing with the mass spectrum information of reference materials and references. RESULTS： A total of 48 compounds were identified， and 9 and 39 compounds were identified under ESI+/ESI- ion mode， mainly including 10 phenolic acids， 8 ?phenylpropanoids， 9 anthraquinones， 3 flavones， 7 alkaloids， 5 tannins and 6 other categories. CONCLUSIONS： UPLC-Q-TOF- MS method is rapid， efficient and accurate for identify chemical components from active fraction of Xiaozhong zhitong lotion. Main chemical components of the active fraction are phenolic acids， phenylpropanoids， anthraquinones， alkaloids and tannins.

KEYWORDS ? ?Xiaozhong zhitong lotion; Active fraction; UPLC-Q-TOF-MS; Chemical components; Identification

消腫止痛液是銀川市中醫(yī)醫(yī)院（后文簡(jiǎn)稱“我院”）的院內(nèi)制劑（批準(zhǔn)文號(hào)：寧藥制字Z20140005），主要由大黃、黃柏、地榆、五倍子等八味中藥組成，用于各種原因所致痔瘡初期及外痔、混合痔、肛裂術(shù)后的消腫、止痛等，其治療肛腸疾病術(shù)后疼痛、水腫的臨床總有效率達(dá)93.33%[1]。本課題組前期通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)篩選得到了該制劑具有消腫、促潰瘍面愈合、鎮(zhèn)痛的有效部位（經(jīng)D101大孔樹脂分離得到的40%乙醇洗脫部位）[2]，本研究擬采用超高液相色譜-四級(jí)桿-飛行時(shí)間質(zhì)譜聯(lián)用（UPLC-Q-TOF-MS）法對(duì)消腫止痛液有效部位的化學(xué)成分進(jìn)行鑒定，以揭示該制劑的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，為該制劑二次開發(fā)為軟膏制劑提供依據(jù)，同時(shí)也為中藥新藥開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料

1.1 儀器

Triple-TOFTM 5600質(zhì)譜儀（美國(guó)AB Sciex公司）;LC-30AD超高液相色譜儀（日本島津公司）;XA105電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

消腫止痛液有效部位提取物（由我院制劑室自制，批號(hào)：20171025，純度：每1 g提取物相當(dāng)于14.78 g生藥）;沒食子酸對(duì)照品（批號(hào)：110831-201605，純度：≥98%）、小檗堿對(duì)照品（批號(hào)：110713-201212，純度：≥98%）、大黃酸對(duì)照品（批號(hào)：110886-201612，純度：≥98%）、大黃素對(duì)照品（批號(hào)：110756-201512，純度：≥98%）均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院;阿魏酸對(duì)照品（批號(hào)：wkq17112004，純度：≥98%）、蘆丁對(duì)照品（批號(hào)：wkq19010203，純度：≥98%）均購(gòu)于四川省維克奇生物科技有限公司;乙腈（德國(guó)默克公司，色譜純）;甲酸（美國(guó)Fisher公司，色譜純）;水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜與MS條件

2.1.1 色譜條件 色譜柱：Hypersil GOLD aQ C18（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）;流動(dòng)相：0.1%甲酸乙腈（A）-0.1%甲酸水（B），梯度洗脫（1～2 min，95%B;2～4 min，90%→85%B;4～6 min，85%→80%B;6～8 min，80%→75%B;8～15 min，75%→65%B;15～20 min，65%→55%B;20～22 min，55%→5%B;22～23 min，5%→0%B;23～24 min，0%→95%B;24～25 min，95%B），流速：0.4 ?mL/min;柱溫：30 ℃;進(jìn)樣量：4 μL。

2.1.2 MS條件 采用電噴霧離子源（ESI），在信息關(guān)聯(lián)（IDA）模式下進(jìn)行正/負(fù)離子（ESI+/ESI-）掃描;離子噴霧電壓為5 500/-4 500 V，去簇電壓為100/-100 V;去溶劑溫度為500 ℃;霧化氣為氮?dú)?，霧化氣壓、輔助加熱氣壓和氣簾氣壓分別為55、55和35 psi;掃描范圍為100～2 000 Da;碰撞能量為45/-45 eV;擴(kuò)展碰撞器能量為10/15 eV。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備 精密稱取消腫止痛液有效部位干粉樣品0.023 1 g，置于50 mL量瓶中，以50%甲醇超聲（頻率：40 kHz，功率：500 W）提取10 min，搖勻，濾過，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.2 混合對(duì)照品溶液的制備 精密稱取鹽酸小檗堿、沒食子酸、大黃素、大黃酸、阿魏酸、蘆丁對(duì)照品適量，分別置于不同10 mL量瓶中，加入甲醇溶解，制備為單一對(duì)照品貯備液;分別精密量取上述貯備液適量，將其混合后加甲醇稀釋，制備成混合對(duì)照品溶液（含鹽酸小檗堿8.56 μg/mL、沒食子酸4.16 μg/mL、大黃素5.62 μg/mL、大黃酸4.26 μg/mL、阿魏酸3.23 μg/mL、蘆丁3.45 μg/mL）。

2.3 消腫止痛液有效部位化學(xué)成分的分析

首先查閱文獻(xiàn)資料[3-29]及相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)（PubMed、Mass Bank、Chemical Book），建立組方中各味藥所含的化學(xué)成分庫(kù)信息，信息內(nèi)容包括中文名、英文名、分子式、準(zhǔn)確分子質(zhì)量、結(jié)構(gòu)式和藥材來(lái)源。再按“2.1”項(xiàng)下色譜和MS條件進(jìn)樣，將化學(xué)成分信息庫(kù)導(dǎo)入PeakView 2.0軟件 （AB Sciex）進(jìn)行目標(biāo)化合物峰查找，通過精準(zhǔn)質(zhì)量數(shù)（mass error<5 ppm）對(duì)結(jié)果進(jìn)行過濾，獲得匹配化合物后，解析其二級(jí)裂解碎片離子信息，進(jìn)一步準(zhǔn)確識(shí)別化學(xué)成分。結(jié)果，從該有效部位中共鑒定出了48個(gè)化學(xué)成分。在ESI-模式下響應(yīng)較好，共鑒定出了39個(gè)化學(xué)成分;在ESI+模式下鑒定出了9個(gè)化學(xué)成分。消腫止痛液有效部位總離子流圖見圖1，化學(xué)成分鑒定結(jié)果見表1。

2.4 化合物的裂解特征分析

2.4.1 酚酸類 酚酸類化合物是指同一苯環(huán)上有若干個(gè)酚性羥基的一類化合物。本研究從消腫止痛液有效部位中共鑒定出了10個(gè)酚酸類化合物，分別是沒食子酸、沒食子酸乙酯、對(duì)香豆酸、沒食子酸兒茶素、兒茶素沒食子酸酯、3，3′-O-二甲基鞣花酸-硫酸酯、3，3′4′-O-三甲基鞣花酸-4-O-硫酸酯、對(duì)羥基苯甲酸、3，4′-O-二甲基鞣花酸和3，3′4′-O-三甲基鞣花酸。此類化合物在MS掃描過程中多以[M-H]-的準(zhǔn)分子離子峰形式存在，高能碰撞下易產(chǎn)生[M-H-H2O]-或[M-H-CO2]-中性丟失的碎片離子?，F(xiàn)以峰2和峰40為例進(jìn)行裂解規(guī)律分析。

峰2的保留時(shí)間為0.84 min，ESI-模式下的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 169.018 8[M-H]-，二級(jí)碎片信息主要有 ?m/z 125.024 8[M-H-CO2]-、m/z 107.014 7[M-H-CO2-H2O]-，為脫去中性分子二氧化碳與相繼脫去一分子水的碎片離子?？芍摶衔锏姆肿邮綖镃7H6O5，其相對(duì)分子質(zhì)量為170.021 5;該峰相對(duì)分子質(zhì)量的理論值為169.014 25，實(shí)測(cè)值為169.014 82，誤差為3.37 ppm。參考文獻(xiàn)[3-4]，并與沒食子酸對(duì)照品二級(jí)碎片離子信息進(jìn)行比對(duì)，可判斷該化合物為沒食子酸。沒食子酸的裂解途徑見圖2，峰2和沒食子酸對(duì)照品的MS/MS圖見圖3。

峰40的保留時(shí)間為10.97 min，ESI-模式下的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 329.030 4[M-H]-，脫去一分子二氧化碳形成m/z 285.003 1[M-H-CO2]-，相繼脫去一分子亞甲基形成m/z 270.987 6[M-H-CO2- CH2]-，再脫去一分子羰基形成m/z 242.992 6[M-H-CO2-CH2-CO]-;另一裂解途徑為準(zhǔn)分子離子峰脫去兩分子甲基得到特征離子m/z 298.983 3[M-H-2CH3]-。該化合物的分子式為C16H10O8，其相對(duì)分子質(zhì)量為330.037 6，該峰相對(duì)分子質(zhì)量的理論值為329.030 29，實(shí)測(cè)值329.030 34，誤差為0.16 ppm。參考文獻(xiàn)[3，25]，可判斷該化合物為3，4′-O-二甲基鞣花酸。3，4′-O-二甲基鞣花酸的MS裂解途徑見圖4，峰40的MS/MS圖見圖5。

2.4.2 苯丙素類 苯丙素類化合物是指基本母核具有一個(gè)或幾個(gè)C6-C3單元的天然有機(jī)化合物類群，狹義而言，苯丙素類化合物是指簡(jiǎn)單苯丙素類、香豆素類、木質(zhì)素類化合物。本研究從消腫止痛有效部位中共鑒定出了8個(gè)苯丙素類化合物，分別是新綠原酸、葡萄糖基丁香酸、阿魏酰奎寧酸、綠原酸、阿魏酸、3，5′-二咖啡?？鼘幩?、花椒毒素和九里香酮，其中新綠原酸和綠原酸為同分異構(gòu)體（通過Chem Draw14.0軟件計(jì)算化合物的脂水分配系數(shù)，根據(jù)不同脂水分配系數(shù)保留時(shí)間不同指認(rèn)同分異構(gòu)體，其與參考文獻(xiàn)中兩個(gè)化合物保留時(shí)間前后順序一致[6]）。由于該類化合物一般具有多個(gè)和芳環(huán)連接的氧原子、羥基、甲氧基，故其質(zhì)譜經(jīng)常出現(xiàn)一系列連續(xù)失去羰基、羥基、 水、甲基或甲氧基的碎片離子峰，現(xiàn)以峰10為例進(jìn)行裂解規(guī)律分析。

峰10的保留時(shí)間為6.49 min，ESI+模式下準(zhǔn)分子離子峰為m/z 193.048 8[M-H]-，脫去一分子甲基形成m/z 178.024 8[M-H-CH3]-，相繼脫去一分子二氧化碳形成 m/z 134.035 8[M-H-CH3-CO2]-。該化合物的分子式為C10H10O4，其相對(duì)分子質(zhì)量為194.05 79;該峰相對(duì)分子質(zhì)量的實(shí)測(cè)值為193.050 48，相對(duì)分子質(zhì)量的理論值為193.050 63，誤差為-0.79 ppm。參考文獻(xiàn)[8，28]，并與阿魏酸對(duì)照品二級(jí)碎片離子信息進(jìn)行比對(duì)，可判斷該化合物為阿魏酸。阿魏酸的MS裂解途徑見圖6，峰10和阿魏酸對(duì)照品的MS/MS圖見圖7。

2.4.3 蒽醌類 蒽醌類化合物是指具有醌式結(jié)構(gòu)的化學(xué)成分，天然蒽醌以9，10-蒽醌最為常見，整個(gè)分子形成共軛體系，C9、C10又處于最高氧化水平，比較穩(wěn)定。在本研究中共從消腫止痛液有效部位鑒定出了9個(gè)蒽醌類化合物，分別是蘆薈大黃素、大黃素-1-O-糖苷、大黃酸-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、大黃酚、大黃酸、大黃素、大黃酚-8-O-β-D吡喃葡萄糖苷、蘆薈苷、蘆薈大黃素-8-O-（6′-O-乙酰）-糖苷。蒽醌母核上常有羥基、羥甲基、甲基、甲氧基和羧酸取代，游離蒽醌的MS裂解依次脫去兩分子羰基。現(xiàn)以峰47和峰48為例進(jìn)行裂解規(guī)律分析。

峰47的保留時(shí)間為16.83 min，ESI-模式下的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 283.025 5[M-H]-，其脫去一分子二氧化碳形成m/z 239.034 9[M-H-CO2]-，再連續(xù)2次脫去一分子羰基分別形成m/z 211.039 8[M-H-CO2-CO]-、m/z 183.044 8[M-H-CO2-2CO]-。該化合物的分子式為C15H8O6，其相對(duì)分子質(zhì)量為284.032 1;該峰相對(duì)分子質(zhì)量的理論值為283.024 81，實(shí)測(cè)值為283.025 03，誤差為0.78 ppm。參考文獻(xiàn)[9，24]，并與大黃酸對(duì)照品二級(jí)碎片離子信息進(jìn)行比對(duì)，可判斷該化合物為大黃酸。大黃酸的MS裂解途徑見圖8，峰47和大黃酸對(duì)照品的MS/MS圖見圖9。

峰48的保留時(shí)間為21.34 min，ESI-模式下的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 269.043 6[M-H]-，脫去一分子羰基得到特征離子m/z 241.049 1[M-H-CO]-;二級(jí)碎片信息主要有準(zhǔn)分子離子峰脫去一分子二氧化碳形成m/z 225.053 9[M-H-CO2]-，相繼脫去一分子甲基形成m/z 210.031 4[M-H-CO2-CH3]-，再脫去一分子羰基形成m/z182.036 7[M-H-CO2-CH3-CO]-。該化合物的分子式為C15H10O5，其相對(duì)分子質(zhì)量為270.052 8;該峰相對(duì)分子質(zhì)量的理論值為269.045 55，實(shí)測(cè)值為269.045 80，誤差為0.96 ppm。參考文獻(xiàn)[7，22]，并與大黃素對(duì)照品二級(jí)碎片離子信息進(jìn)行比對(duì)，可判斷該化合物為大黃素。大黃素的MS裂解途徑見圖10，峰48和大黃素對(duì)照品的MS/MS圖見圖11。

2.4.4 黃酮類 黃酮類化合物是指基本母核為2-苯基色原酮的一類化合物。本研究從消腫止痛液有效部位中共鑒定出了3個(gè)黃酮類化合物，分別是山萘酚、蘆丁、金絲桃苷。黃酮類質(zhì)譜特征性強(qiáng)，除分子離子峰外，會(huì)失去甲基、羰基等碎片離子峰，現(xiàn)以峰16為例進(jìn)行裂解規(guī)律分析。

峰16的保留時(shí)間為6.72 min，ESI-模式下的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 609.144 7[M-H]-，其脫去一分子蕓香糖形成黃酮類特征基本母核離子碎片m/z 301.033 1[M-H- C12H20O9-C6H10O4]-，以及其他二級(jí)碎片離子m/z 178.997 7 [M-H-C6H10O5-C6H10O4-C7H6O2]-、m/z 151.003 1[M-H-C6H10O5- C6H10O4-C8H6O3]-。該化合物的分子式為C27H30O16，相對(duì)分子質(zhì)量為610.153 4;該峰相對(duì)分子質(zhì)量的理論值為609.146 57，實(shí)測(cè)值為609.146 11，誤差為0.75 ppm。參考文獻(xiàn)[12，29]，并與蘆丁對(duì)照品二級(jí)碎片離子信息進(jìn)行比對(duì)，可判斷該化合物為蘆丁。蘆丁的MS裂解途徑見圖12，峰16和蘆丁對(duì)照品的MS/MS圖見圖13。

2.4.5 生物堿類 生物堿是一類含氮有機(jī)化合物，多具有較強(qiáng)的生理活性。本研究共鑒定出了7個(gè)生物堿類化合物，分別是四氫藥根堿、蓮心季銨堿、益母草堿、四氫帕馬丁、益母草堿衍生物、藥根堿、小檗堿。生物堿主要為芳香體系組成，環(huán)系多、分子結(jié)構(gòu)緊密，裂解困難，一般看不到由骨架裂解產(chǎn)生的特征離子，裂解主要發(fā)生在取代基或側(cè)鏈上，現(xiàn)以峰41為例進(jìn)行裂解規(guī)律分析。

峰41的保留時(shí)間為12.07 min，ESI+模式下的準(zhǔn)分子離子峰為m/z 337.124 0[M+H]+，其脫去一分子甲基形成m/z 321.092 3[M+H-CH3-H]+，相繼脫去一分子羰基形成m/z 293.097 5[M+H-CH3-H-CO]+;另一裂解途徑為準(zhǔn)分子離子峰m/z 337.124 0[M+H]+ 脫去兩分子甲基和一分子羰基形成m/z 279.081 9[M+H-2CH3-CO]+。該化合物的分子式為C20H18NO4，相對(duì)分子質(zhì)量為336.123 6，該峰相對(duì)分子質(zhì)量的理論值為337.130 86，實(shí)測(cè)值為337.129 22，誤差為-4.87 ppm。參考文獻(xiàn)[4-5]，并與小檗堿對(duì)照品碎片離子進(jìn)行對(duì)比，可判斷該化合物為小檗堿。小檗堿的MS裂解途徑見圖14，峰41和小檗堿對(duì)照品的MS/MS圖見圖15。

2.4.6 鞣質(zhì) 鞣質(zhì)是由沒食子酸（或其聚合物）的葡萄糖（及其他多元醇）酯、黃烷醇及其衍生物的聚合物以及兩者混合共同組成的植物多元酚，分為水解鞣質(zhì)、縮合鞣質(zhì)和復(fù)合鞣質(zhì)?？伤怊焚|(zhì)的裂解特點(diǎn)為連續(xù)丟失m/z為152的基團(tuán)（沒食子酰基）[30]，m/z為169和125的是沒食子酸的裂解碎片離子。根據(jù)這些裂解特點(diǎn)結(jié)合文獻(xiàn)[8]，本研究共鑒定出了2，3-O-二沒食子酰葡萄糖苷、三沒食子酸?；咸烟腔虍悩?gòu)體、2，3，4，6-O-四沒食子?；?β-D-葡萄糖苷、1，2，3，4，6-五沒食子酰葡萄糖、2，3，4，6-O-四沒食子?；?β-D-甲基吡喃葡萄糖苷5個(gè)鞣質(zhì)類化合物。

2.4.7 其他類 此外，本研究還從消腫止痛液有效部位中鑒定出了2個(gè)苯丁酮類化合物（蓮花掌苷、異蓮花掌苷）和白藜蘆醇-4′-O-β-D-（6″-O-沒食子酰）葡萄糖苷、對(duì)羰基苯甲酸乙酯、三棱酸以及決明松-8-O-β-吡喃葡萄糖苷。

3 討論

中藥復(fù)方的有效成分是復(fù)雜的多成分組合，即多種成分共同發(fā)揮作用。本研究在前期藥效學(xué)研究的基礎(chǔ)上，對(duì)篩選得到的有效部位采用UPLC-Q-TOF-MS法進(jìn)行了全面分析。該法具有良好的分離能力且靈敏度和準(zhǔn)確性高，目前已廣泛應(yīng)用于中藥或復(fù)雜未知物的鑒定及定量分析。

本研究在選擇色譜柱時(shí)，考察了ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.7 μm）和Hypersil GOLD aQ C18色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm）的分離效果。結(jié)果，若以ACQUITY UPLC BEH C18為色譜柱，在流速為0.4 mL/min時(shí)，柱壓較高;而以Hypersil GOLD aQ C18為色譜柱時(shí)柱壓較低且分離度較好。故最終選擇Hypersil GOLD aQ C18色譜柱進(jìn)行分析。在優(yōu)化色譜條件時(shí)，比較了流動(dòng)相乙腈-水和0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水，結(jié)果采用0.1%甲酸乙腈-0.1%甲酸水作為流動(dòng)相時(shí)響應(yīng)值和峰形均較好。

本研究選用ESI+、ESI-兩種模式對(duì)樣品進(jìn)行分析，結(jié)果樣品在ESI-模式下MS響應(yīng)較好。通過目標(biāo)篩選，參考特征裂解途徑以及相關(guān)文獻(xiàn)，共鑒定出了48個(gè)化合物，其相對(duì)分子質(zhì)量理論值與實(shí)測(cè)值的誤差均小于5 ppm。其中，酚酸類成分10個(gè)、苯丙素類成分8個(gè)、蒽醌類成分9個(gè)、黃酮類成分3個(gè)、生物堿類成分7個(gè)、鞣質(zhì)成分5個(gè)，其他類成分6個(gè)。以上鑒定到的化學(xué)成分具有多方面藥理活性。如酚酸類化學(xué)成分具有抗氧化、抗菌、消炎等活性[31];苯丙素類成分花椒毒素、九里香酮具有抗血小板聚集活性作用[32];小檗堿具有抗利尿和抗菌作用[33];蒽醌類成分大黃酸是大黃中的主要成分之一，具有抗炎、抗腫瘤、抗糖尿病腎病、抗病毒、抑菌等活性[34]，大黃素具有抗炎、抗菌、抗腫瘤等作用[35];黃酮類成分具有抗心肌缺血、促進(jìn)心肌收縮力、興奮子宮、抗氧化及抑菌等作用[36]。鞣質(zhì)成分主要來(lái)自地榆和大黃，地榆鞣質(zhì)具有止血、抑菌、抗炎等作用，其止血成分主要為鞣花鞣質(zhì)[37]，而大黃鞣質(zhì)具有涼血止血功效[38]。以上不同種類、不同來(lái)源的活性成分，通過協(xié)同或互補(bǔ)的作用發(fā)揮消腫、止痛、抗?jié)冇系墓π?，起到多通路、多靶點(diǎn)治療作用。

綜上，本研究基于UPLC-Q-TOF-MS法對(duì)消腫止痛液有效部位中的化學(xué)成分進(jìn)行了快速、準(zhǔn)確識(shí)別，明確了消腫止痛液消腫、止痛、抗?jié)冇系乃幮С煞?，為促進(jìn)醫(yī)院制劑消腫止痛軟膏的二次開發(fā)以及為中藥新藥的研發(fā)奠定了基礎(chǔ)。

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（收稿日期：2019-08-12 修回日期：2019-09-26）

（編輯：林 靜）