付瓊 翟梅娟 孫麗君 蔡路兵

摘要：目的 探討轉(zhuǎn)錄因子SOX4和SOX9與乳腺癌形成及分化的關(guān)系。方法 采用免疫組織化學(xué)SP法檢測SOX4和SOX9蛋白在浸潤性乳腺癌、導(dǎo)管原位癌（DCIS）和普通型導(dǎo)管上皮增生（UDH）中的表達(dá)情況。 結(jié)果 SOX4和SOX9在浸潤性乳腺癌和DCIS中的陽性表達(dá)率均明顯高于UDH，且SOX4在高級別DCIS中的表達(dá)高于低中級別組，SOX4、SOX9在浸潤性癌中的表達(dá)與DCIS相比無明顯差異;浸潤性乳腺癌中SOX4表達(dá)升高與臨床分期晚和腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，SOX9表達(dá)升高與腫塊體積大、組織分化差、臨床分期晚、腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及激素受體三陰有關(guān)。 結(jié)論 轉(zhuǎn)錄因子SOX4和SOX9主要參與乳腺癌的早期形成，在進(jìn)展階段與惡性程度增加及分化轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。

SOX（SRY-related high-mobility-group box）基因是近年來倍受關(guān)注的一類編碼轉(zhuǎn)錄因子的發(fā)育基因，其突變和異常表達(dá)與許多腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)。本研究檢測轉(zhuǎn)錄因子SOX4和SOX9在浸潤性乳腺癌及導(dǎo)管內(nèi)癌中的表達(dá)，探討SOX轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)改變在乳腺癌形成及進(jìn)展的作用，為早期診斷和治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料? 收集杭州市蕭山區(qū)第一人民醫(yī)院2012-2014年間經(jīng)手術(shù)切除的乳腺癌根治標(biāo)本149例，均為女性，術(shù)前未經(jīng)過放化療?；颊咂骄挲g52.29+0.851歲。其中浸潤性導(dǎo)管癌138例，浸潤性小葉癌7例，其他類型4例。浸潤性導(dǎo)管癌組織學(xué)分級I級14例，II級98例，III級26例。臨床TNM分期，I、II、III期分別為51、69、29例。伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者66例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者83例。乳腺普通型導(dǎo)管上皮增生（UDH）40例，導(dǎo)管原位癌（DCIS）78例，其中低級別11例，中級別30例，高級別37例。

1.2 研究方法? 采用免疫組化SP法檢測SOX4和SOX9兩種蛋白在乳腺UDH、DCIS、浸潤性癌中的表達(dá)情況。兔抗人多克隆抗體SOX4，克隆號ab86809，購自Abcam（香港）有限公司，稀釋濃度為1：300，腦膠質(zhì)瘤為陽性對照。鼠抗人單克隆抗體SOX9，克隆號ab76997，購自Abcam（香港）有限公司，稀釋濃度為1：700，扁桃體組織為陽性對照。以PBS代替一抗作為空白對照。

1.3 結(jié)果判斷? SOX4以細(xì)胞核出現(xiàn)淺棕、棕黃或棕褐色即視為陽性表達(dá)，反之為陰性。SOX9著色于細(xì)胞漿或細(xì)胞核，以出現(xiàn)棕黃或褐色為陽性表達(dá)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理? 所獲數(shù)據(jù)采用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料采用x2和（或）Fish’s精確概率法檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺不同病變中SOX4、SOX9表達(dá)情況：40例UDH中無SOX4陽性表達(dá)，8例出現(xiàn)SOX9表達(dá)，陽性率20%。78例DCIS中SOX4呈弱陽性表達(dá)，陽性表達(dá)23例，陽性率29.5%，與UDH相比明顯升高，其中低中級別組8例陽性（34.8%），高級別組15例陽性（65.2%），兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。DCIS中40例表達(dá)SOX9，以弱陽性為主，陽性率為51.3%，顯著高于UDH組，其中低中級別DCIS有21例陽性（52.5%），高級別DCIS有19例陽性（47.5%），兩組無顯著差異。149例浸潤性乳腺癌中SOX4陽性表達(dá)39例，陽性率為26.2%。SOX9陽性表達(dá)75例，陽性率為50.3%。兩者陽性率及陽性強(qiáng)度均顯著高于UDH組，但與DCIS無明顯差異。

2.2 SOX4和SOX9表達(dá)與乳腺浸潤性癌各臨床病理指標(biāo)的關(guān)系：SOX4蛋白在腫瘤分期晚（P=0.009）、腋窩淋巴結(jié)出現(xiàn)轉(zhuǎn)移（P=0.001）的乳腺癌表達(dá)顯著高于分期早、無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌。與腫瘤大小、患者年齡、組織學(xué)分級、類型、ER、PR、Her-2表達(dá)狀況無明顯相關(guān)。SOX9蛋白在腫瘤直徑>2cm（P=0.041）、組織學(xué)分化差（P=0.000）、臨床分期晚（P=0.006）和伴有腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移（P=0.004）的乳腺癌中表達(dá)明顯高于腫瘤≤2cm、分化好、臨床分期早和無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，且ER、PR、C-erB-2三陰組中SOX9表達(dá)高于對應(yīng)陽性組（P=0.002）。

3 討論

SOX4基因?qū)儆赟OX基因C亞族，已有報(bào)道其異常表達(dá)與多種類型的腫瘤發(fā)生有關(guān)。有研究者發(fā)現(xiàn)SOX4通過調(diào)節(jié)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程而促進(jìn)乳腺癌進(jìn)展，異位過表達(dá)SOX4足以使人類乳腺上皮細(xì)胞獲得間質(zhì)組織性狀，從而增強(qiáng)細(xì)胞遷移和侵襲的能力，并指出它可作為一項(xiàng)判斷預(yù)后的新的生物標(biāo)記【1】。SOX9是目前SOX家族中研究最為廣泛的轉(zhuǎn)錄因子之一。Weinberg研究指出【2】：Slug和SOX9能合作決定乳腺干細(xì)胞（MaSC）狀態(tài)，兩者共表達(dá)將促進(jìn)人類乳腺癌細(xì)胞的發(fā)展及轉(zhuǎn)移發(fā)生的能力，并導(dǎo)致病患生存率下降。

SOX4和SOX9在DCIS中的表達(dá)明顯高于UDH，它們的異常表達(dá)可能是引發(fā)惡性病變的潛在因素。SOX4在高級別DCIS中的表達(dá)更為明顯，提示其在細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮更為顯著的作用。浸潤性乳腺癌中SOX4和SOX9表達(dá)明顯高于UDH，但與DCIS比并無顯著提高，推測這兩種轉(zhuǎn)錄因子在乳腺癌形成的早期階段作用更為明顯或直接，在惡性轉(zhuǎn)化階段可能發(fā)揮間接的協(xié)同作用，可能某些關(guān)鍵的下游因子不受SOX4、SOX9轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，或部分腫瘤的形成繞過這兩種轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控的基因。我們發(fā)現(xiàn)，隨腫瘤增大、分化程度的降低和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，SOX4和SOX9表達(dá)增強(qiáng)，說明這兩種轉(zhuǎn)錄因子上調(diào)使得乳腺癌在浸潤發(fā)展過程中更具侵襲性，預(yù)后更差。三陰性的乳腺癌SOX9表達(dá)明顯增加間接提示轉(zhuǎn)錄因子SOX9可能在促進(jìn)乳腺癌進(jìn)展及轉(zhuǎn)移能力方面發(fā)揮正向作用。

綜合分析表明，轉(zhuǎn)錄因子SOX4和SOX9表達(dá)上調(diào)與乳腺癌的早期形成及惡性程度增加關(guān)系密切，在此過程中二者的作用既有相互協(xié)同又各有側(cè)重。

參考文獻(xiàn)：

【1】Jian CZ，Qian L，Yang L，et al. SOX4 induces epithelial-mesenchymal transition and contributes to breast cancer progression. Cancer Res，2012，72（17）：4597-608.

【2】Guo W，Keckesova Z，Donaher JL，et al. Slug and Sox9 cooperatively determine the mammary stem cell state. Cell，2012，148（5）：1015-1028.