馬林 林金盛 陸娜 駱昕 曲紹軒 李輝平

摘要：【目的】明確江浙地區(qū)秀珍菇雙翅目害蟲的種類、發(fā)生規(guī)律及其生物防治方法，為秀珍菇雙翅目害蟲防控提供科學(xué)依據(jù)。【方法】在江蘇灌南、高淳和浙江淳安、江山的7個(gè)秀珍菇栽培基地采集雙翅目害蟲蟲樣，采用形態(tài)學(xué)特征和分子生物學(xué)方法對蟲樣進(jìn)行分類鑒定;采用黃板誘蟲法監(jiān)測秀珍菇出菇棚害蟲全年動(dòng)態(tài)消長規(guī)律，繪制雙翅目害蟲消長動(dòng)態(tài)曲線;在秀珍菇出菇期，采用噴霧法測定1%印楝素水分散粒劑1000倍稀釋液和1200 ITU/mg蘇云金芽孢桿菌以色列變種（Bti）可濕性粉劑500倍稀釋液對雙翅目害蟲的防治效果。【結(jié)果】在江浙地區(qū)7個(gè)秀珍菇栽培基地采集蟲樣70份，通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定發(fā)現(xiàn)當(dāng)?shù)匦阏涔皆耘嘀惺艿?科[眼蕈蚊科（Sciaridae）、蚤蠅科（Phoridae）、果蠅科（Drosophilidae）和癭蚊科（Cecidomyiidae）]5屬[遲眼蕈蚊屬（Bradysia impatiens）、厲眼蕈蚊屬（Lycoriella ingenua）、異蚤蠅屬（Megaselia tamilncduensis）、果蠅屬（Drosophila glabriapex）和癭蚊科未知屬]雙翅目蟲害的危害，其中遲眼蕈蚊屬的異遲眼蕈蚊發(fā)生范圍最廣、樣本數(shù)最多;黃板監(jiān)測結(jié)果顯示，江浙地區(qū)秀珍菇雙翅目害蟲全年在 5—7月和9—10月出現(xiàn)兩個(gè)高峰;對害蟲的防治試驗(yàn)結(jié)果表明，印楝素和Bti對秀珍菇上的雙翅目害蟲均有明顯的殺蟲活性，第2次用藥15 d后黃板上的平均成蟲數(shù)分別只有89.73和101.27只/板，明顯少于對照蟲數(shù)（281.23只/板），印楝素防治效果略優(yōu)于Bti，但差異不顯著（P>0.05）?！窘Y(jié)論】遲眼蕈蚊屬的異遲眼蕈蚊是江浙地區(qū)秀珍菇栽培中害蟲種類的優(yōu)勢種群;在江浙地區(qū)秀珍菇出菇棚中雙翅目害蟲全年有兩個(gè)發(fā)生高峰，分別為5—7月和9—10月;印楝素和Bti兩種生物藥劑對秀珍菇上的雙翅目害蟲均有明顯的殺蟲效果，可作為防治秀珍菇雙翅目害蟲的藥劑在生產(chǎn)上推廣使用。

關(guān)鍵詞： 秀珍菇;雙翅目;害蟲;鑒定;生物藥劑;防治效果

中圖分類號(hào)： S436.46? ? ? ?; ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：2095-1191（2019）01-0068-06

0 引言

【研究意義】秀珍菇學(xué)名肺形側(cè)耳（Pleurotus pulmonarius），隸屬于擔(dān)子菌綱（Basidiomycetes）傘菌目（Agaricales）側(cè)耳科（Pleurotaceae）側(cè)耳屬（Pleurotus）（陳躬國等，2017）。秀珍菇屬變溫結(jié)實(shí)性菌類，子實(shí)體生長溫度5～30 ℃，最適生長溫度8～20 ℃（劉躍鈞等，2003）。國內(nèi)秀珍菇栽培模式以反季節(jié)設(shè)施栽培為主，根據(jù)秀珍菇變溫結(jié)實(shí)的特性，江蘇、浙江等地秀珍菇出菇期集中在5～10月全年氣溫較高時(shí)期，栽培過程中常受到多種害蟲的危害，以雙翅目害蟲的危害尤為嚴(yán)重，害蟲咬食菌絲體和子實(shí)體，使秀珍菇的產(chǎn)量和品質(zhì)受到嚴(yán)重影響。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，蟲害引起的食用菌產(chǎn)量損失一般為總產(chǎn)量的20%～30%，嚴(yán)重時(shí)甚至絕收（溫志強(qiáng)和邊廣，2011）。因此，明確江浙地區(qū)危害秀珍菇的害蟲種類和發(fā)生規(guī)律，為害蟲綜合防控提供準(zhǔn)確的用藥時(shí)間、方式和種類，減少害蟲對秀珍菇產(chǎn)量的影響及亂用藥導(dǎo)致的藥害農(nóng)殘等食品安全問題，對保障江浙地區(qū)秀珍菇產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展具有重要意義?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】目前我國食用菌上雙翅目害蟲種類有20科49屬，與秀珍菇相關(guān)的僅有眼蕈蚊科和蚤蠅科2科4種（李建波和何璞，2017），且栽培氣候、環(huán)境、品種等均會(huì)對害蟲種類產(chǎn)生明顯影響，同時(shí)害蟲的田間發(fā)生規(guī)律與栽培環(huán)境更是息息相關(guān)（李光強(qiáng)，2009）。溫志強(qiáng)和邊廣（2011）采用誘集成蟲的方法統(tǒng)計(jì)了福建省秀珍菇上菇蚊菇蠅的全年消長規(guī)律，但其栽培模式與江浙地區(qū)存在明顯差異，而其他地區(qū)僅有平菇蟲害發(fā)生規(guī)律的報(bào)道（姜婷婷等，2016）。對秀珍菇上雙翅目害蟲應(yīng)用黃色粘蟲板、誘蟲燈、黑光燈等誘殺成蟲是防治效果明顯的主要物理措施（曲紹軒等，2010;孔繁建等，2016），高效氯氰菊酯、吡蟲啉和除蟲脲等殺蟲劑對秀珍菇上的雙翅目害蟲均有明顯的殺蟲活性（韓文賀，2016;雷雨霞等，2016）。個(gè)別菇農(nóng)采用敵敵畏、毒死蜱、乙蟲腈等殺蟲劑會(huì)對秀珍菇造成藥害，給食用菌產(chǎn)品安全帶來隱患（趙曉娜等，2011;張孔金等，2012）。微生物（沈迎春等，2017）和植物源殺蟲劑（曲紹軒等，2012;蘭玉菲等，2016）是生產(chǎn)無公害食用菌優(yōu)先選用的農(nóng)藥品種，但在江浙地區(qū)秀珍菇上使用生物殺蟲劑對雙翅目害蟲效果的相關(guān)研究未見報(bào)道?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】秀珍菇最初由臺(tái)灣引進(jìn)到福建種植，近年來逐漸在經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的江浙地區(qū)大面積栽培，并形成了江浙地區(qū)獨(dú)特的栽培模式，栽培期間發(fā)生的雙翅目害蟲種類、發(fā)生規(guī)律等均與其他地區(qū)存在差異，而目前已有報(bào)道多為福建地區(qū)的發(fā)生規(guī)律和防治措施，在江浙地區(qū)栽培中應(yīng)用效果欠佳。因此，本課題組在對江浙地區(qū)秀珍菇害蟲發(fā)生情況進(jìn)行多次采樣并完成室內(nèi)毒力試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，擬結(jié)合江浙地區(qū)特殊的補(bǔ)水方式，將用藥方式由單一的噴霧改為噴霧加倒扣吸水，以增加藥液與害蟲幼蟲接觸的機(jī)會(huì)，提高殺蟲效果。【擬解決的關(guān)鍵問題】在江浙地區(qū)7個(gè)秀珍菇栽培基地采集雙翅目害蟲蟲樣，結(jié)合形態(tài)學(xué)特征和分子生物學(xué)方法對蟲樣進(jìn)行分類鑒定，采用黃板誘蟲法監(jiān)測秀珍菇出菇棚內(nèi)害蟲全年動(dòng)態(tài)消長規(guī)律，并在秀珍菇出菇期開展印楝素和蘇云金芽孢桿菌以色列變種（Bacillus thuringiensis var. israelensis，Bti）兩種生物藥劑對雙翅目害蟲的防治效果試驗(yàn)，以期為江浙地區(qū)秀珍菇出菇期害蟲的綜合防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗(yàn)材料

秀珍菇品種為臺(tái)秀57。供試藥劑為1%印楝素（Azadirachtin）水分散粒劑（成都綠金生物科技有限責(zé)任公司）和1200 ITU/mg Bti可濕性粉劑（武漢科諾生物科技股份有限公司）。

1. 2 雙翅目蟲樣的采集與鑒定

1. 2. 1 蟲樣采集方法 在江蘇灌南、高淳和浙江淳安、江山的7個(gè)秀珍菇栽培基地（表1）開展雙翅目害蟲蟲樣采集，幼蟲從秀珍菇培養(yǎng)料或子實(shí)體中采集，成蟲從秀珍菇菌袋或子實(shí)體上采集，每個(gè)基地隨機(jī)采集活躍的幼蟲、成蟲蟲樣各5份，分別浸泡于裝有1.0 mL 75%乙醇的離心管中保存。

1. 2. 2 形態(tài)學(xué)鑒定 形態(tài)學(xué)鑒定以成蟲觀察為主。將采集的蟲樣按張曉云等（2007）的方法制作成玻片標(biāo)本在顯微鏡下觀察，主要觀察成蟲頭部的復(fù)眼、觸角和唇基，胸部的足和翅脈，腹部的尾器等部位（沈登榮等，2009），參考蔡邦華（2015）昆蟲分類學(xué)雙翅目的分類描述，將蟲樣鑒定到科。

1. 2. 3 分子生物學(xué)鑒定 取采集的單只幼蟲或成蟲于1.5 mL離心管中，加入適量液氮研磨呈粉狀后，提取基因組DNA。PCR擴(kuò)增線粒體COI基因片段，正向引物為CI-J-1751（5'-GGAGCTCCTGACATAGC

ATTCCC-3'），反向引物為CI-N-2191（5'-CCCGGTA

AAATTAAAATATAAACTTC-3'），由生工生物工程（上海）股份有限公司合成。PCR反應(yīng)體系25.0 μL：I5 Mix 12.5 μL，正、反向引物（10 pmol/μL）各1.0 μL，基因組DNA模板1.0 μL，超純水9.5 μL。擴(kuò)增程序：98 ℃預(yù)變性2 min;98 ℃ 10 s，47 ℃ 15 s，72 ℃ 30 s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán);72 ℃延伸5 min。擴(kuò)增產(chǎn)物由擎科生物工程（南京）股份有限公司進(jìn)行測序，測序結(jié)果通過在NCBI上BLAST比對結(jié)果初步確認(rèn)蟲樣分類學(xué)地位。

1. 3 雙翅目害蟲的全年消長規(guī)律監(jiān)測

在秀珍菇出菇棚中懸掛黃色黏蟲板（25 cm×40 cm），距離出菇袋上方0.5 m左右，縱向間隔5.0 m，橫向每排懸掛2張，每10 d記錄1次黃板上的蟲口數(shù)，每月3次，每次記錄結(jié)束后全部更換新的黃板。大棚類型選擇江浙地區(qū)常用的覆蓋防蟲網(wǎng)的塑料薄膜拱形大棚和未覆蓋防蟲網(wǎng)的彩鋼瓦棚頂通風(fēng)大棚，記錄大棚內(nèi)全年36次所有黃板上成蟲數(shù)，計(jì)算每次黃板上的平均成蟲數(shù)量，以此為依據(jù)對雙翅目害蟲消長規(guī)律進(jìn)行監(jiān)測。

1. 4 生物農(nóng)藥對雙翅目害蟲的防治效果試驗(yàn)

采用噴霧法（馬林等，2017）測定1%印楝素水分散粒劑1000倍稀釋液和1200 ITU/mg Bti可濕性粉劑500倍稀釋液在秀珍菇出菇期對雙翅目害蟲的防治效果。秀珍菇栽培按照秀珍菇生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程（DB 33/T 526—2012）進(jìn)行出菇管理，大棚類型為覆蓋防蟲網(wǎng)的塑料薄膜拱形大棚，每棚內(nèi)排放12000袋秀珍菇出菇袋，1號(hào)棚使用Bti藥劑，2號(hào)棚使用印楝素，3號(hào)棚為對照棚。第1次用藥為秀珍菇開袋后澆水前用藥，第2次用藥為第1潮菇采收結(jié)束后，結(jié)合下架倒扣補(bǔ)水進(jìn)行給藥，將藥劑加入補(bǔ)水液中，連續(xù)補(bǔ)水2 d，使倒扣菌袋充分吸水的同時(shí)吸入藥液。通過出菇房內(nèi)懸掛黃板上的雙翅目害蟲成蟲數(shù)反映防治效果。出菇房內(nèi)黃板懸掛方法同1.3，每次用藥后10 d全部更換新黃板，15 d時(shí)記錄黃板上的平均成蟲數(shù)量。

1. 5 統(tǒng)計(jì)分析

運(yùn)用SPSS 20.0計(jì)算黃板上成蟲的平均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差。利用One-way-ANOVA方差分析法（Ross and Willson，2017）對不同處理間的成蟲數(shù)量進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，利用Duncan’s新復(fù)極差法（Thonghua? and Thonghua，2015）進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2. 1 江浙地區(qū)秀珍菇雙翅目蟲樣鑒定結(jié)果

在江浙地區(qū)7個(gè)秀珍菇栽培基地采集蟲樣70份，通過形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，結(jié)果如表1所示。70份樣本分別屬于4科[眼蕈蚊科（Sciaridae）、蚤蠅科（Phoridae）、果蠅科（Drosophilidae）和癭蚊科（Cecidomyiidae）]5屬[遲眼蕈蚊屬（Bradysia）、厲眼蕈蚊屬（Lycoriella）、異蚤蠅屬（Megaselia）、果蠅屬（Drosophila）和癭蚊科未知屬]。采樣地點(diǎn)不同，害蟲種類存在差異，其中，遲眼蕈蚊屬的異遲眼蕈蚊分布最廣、樣本數(shù)最多，是江浙地區(qū)秀珍菇栽培中的優(yōu)勢種群;厲眼蕈蚊屬僅在江蘇出現(xiàn)，在浙江未采集到樣本;其余3種僅在浙江出現(xiàn)，江蘇未采集到樣本，其中異蚤蠅屬只在浙江江山出現(xiàn)，而果蠅屬和癭蚊科Cecidomyiidae sp.僅在浙江淳安采集到。通過測序和比對發(fā)現(xiàn)COI基因片段與NCBI上已公布的昆蟲同源性均在98%以上。

2. 2 江浙地區(qū)秀珍菇雙翅目害蟲的全年消長規(guī)律

江浙地區(qū)秀珍菇出菇棚中雙翅目害蟲全年的動(dòng)態(tài)消長規(guī)律如圖1所示，害蟲數(shù)量與大棚內(nèi)秀珍菇栽培階段和氣溫有明顯的相關(guān)性。從栽培階段來看，隨著5月初菌袋開始開袋，大棚內(nèi)雙翅目害蟲成蟲數(shù)量開始增加，10月底—11月初出菇結(jié)束，11月底出菇棚內(nèi)所有菌袋全部清空，蟲口數(shù)量又回落至最低點(diǎn)，12月—翌年4月為空棚期和發(fā)菌期，出菇棚內(nèi)蟲口數(shù)量一直處于最低點(diǎn)。從氣溫來看，5月初氣溫開始穩(wěn)定且逐步上升至20 ℃以上，8月為夏季氣溫最高期，大棚內(nèi)溫度可達(dá)40 ℃以上，9月氣溫開始回落，至11月溫度降至20 ℃左右，此階段成蟲消長規(guī)律與雙翅目害蟲最適生存溫度范圍一致，有2個(gè)明顯的發(fā)生高峰，即5—7月和9—10月，在11月底—翌年4月底基本無蟲害發(fā)生。從有無覆蓋防蟲網(wǎng)的2個(gè)大棚蟲量曲線可看出，防蟲網(wǎng)可起到明顯的減少蟲口基數(shù)的作用。

2. 3 生物農(nóng)藥對雙翅目害蟲的防治效果

從2次用藥15 d后黃板上誘集到的雙翅目害蟲成蟲數(shù)量（表2）可看出，分別噴施Bti和印楝素后秀珍菇大棚內(nèi)黃板上的成蟲數(shù)量均比對照明顯減少，防效顯著（P<0.05，下同）。第1次用藥15 d后，Bti處理大棚內(nèi)黃板上的蟲數(shù)多于印楝素處理大棚，說明Bti防效低于印楝素，且差異達(dá)顯著水平;而第2次用藥15 d后從黃板上的蟲數(shù)可看出雖然Bti的防效仍低于印楝素，但差異不顯著（P>0.05），可能與Bti作用效果較慢有關(guān)。

3 討論

目前，我國已報(bào)道的為害食用菌的雙翅目害蟲主要涉及長角亞目、短角亞目和芒角亞目的20科49屬，其中眼蕈蚊科有6屬27種（李建波和何璞，2017）。羅佳和莊秋林（2007）對福建省食用菌上發(fā)生的雙翅目害蟲種類進(jìn)行調(diào)查發(fā)現(xiàn)有10科27種;沈登榮等（2009）發(fā)現(xiàn)云南省食用菌栽培地眼蕈蚊科害蟲有6屬11種，其中平菇厲眼蕈蚊和異遲眼蕈蚊為云南省食用菌上眼蕈蚊的主要優(yōu)勢種類。本研究僅針對江浙地區(qū)7個(gè)秀珍菇栽培基地的雙翅目害蟲進(jìn)行采樣和分類鑒定，蟲樣種類相對簡單，只有4科5屬，但優(yōu)勢種群與其他地區(qū)一致，均為遲眼蕈蚊屬的異遲眼蕈蚊。

食用菌昆蟲群落動(dòng)態(tài)變化在春秋兩季隨著季節(jié)溫度的變化呈一定規(guī)律性，但受食用菌品種、栽培環(huán)境、栽培方式和人為因素的影響而有所變化（李光強(qiáng)，2009）。福建省秀珍菇上菇蚊菇蠅一年出現(xiàn)兩個(gè)高峰期，分別是3—7月和9—12月（溫志強(qiáng)和邊廣，2011）;山東省平菇出菇期害蟲種群動(dòng)態(tài)出現(xiàn)春秋兩個(gè)高峰，分別在4—5月和9月（王丹丹，2012）;廣西南寧市平菇上菇蚊菇蠅的為害高峰期在3—4月（王瑾，2013）;遼寧沈陽地區(qū)平菇的主要害蟲平菇厲眼蕈蚊和泰納異蚤蠅的暴發(fā)期分別在3—6月和9—10月（張超逸，2017）。福建、山東、廣西和遼寧分別代表了我國東南、中部、西南和東北地區(qū)菇蚊菇蠅的發(fā)生規(guī)律，而本研究的檢測地點(diǎn)恰好代表了中東部沿海地區(qū)秀珍菇雙翅目害蟲的發(fā)生規(guī)律，與福建相似，一年出現(xiàn)兩個(gè)高峰（5—7月和9—10月）。

在食用菌雙翅目害蟲的生物防治方面，蘇云金芽孢桿菌以色列變種是專門針對雙翅目蚊蠅害蟲的一種生物殺蟲劑（師迎春等，2014），通過產(chǎn)生的伴孢晶體對害蟲幼蟲有特異的殺蟲活性，對成蟲無效（馬林等，2015）。印楝素是目前世界上最優(yōu)秀的植物源農(nóng)藥，具有拒食、抑制生長發(fā)育、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和自噬的作用，對昆蟲幼蟲和成蟲均有效果（徐漢虹等，2017）。宋爽等（2015）研究表明，印楝素在平菇上防治雙翅目害蟲的效果優(yōu)于Bti，且對平菇子實(shí)體生長無影響。本研究結(jié)果與宋爽等（2015）的研究結(jié)論相似。本研究中用藥方式與當(dāng)?shù)靥厥獾难a(bǔ)水方式結(jié)合，菌袋倒扣在地面吸水，使藥液與出菇袋口結(jié)合更緊，藥液吸收更徹底，解決了墻式栽培時(shí)噴霧的藥液多數(shù)流出菌袋，降低藥效的問題。由于供試兩種生物農(nóng)藥作用機(jī)理完全不同，在實(shí)際生產(chǎn)中可輪換使用，以減緩害蟲抗藥性的產(chǎn)生。

4 結(jié)論

江浙地區(qū)秀珍菇栽培中受到4科（眼蕈蚊科、蚤蠅科、果蠅科和癭蚊科）5屬（遲眼蕈蚊屬、厲眼蕈蚊屬、異蚤蠅屬、果蠅屬和癭蚊科未知屬）雙翅目害蟲的危害，其中遲眼蕈蚊屬的異遲眼蕈蚊為優(yōu)勢種群。江浙地區(qū)秀珍菇出菇棚中雙翅目害蟲全年有兩個(gè)發(fā)生高峰，分別為5—7月和9—10月，在11月底—翌年4月底基本無蟲害發(fā)生。Bti和印楝素兩種生物藥劑對秀珍菇上的雙翅目害蟲均有明顯的殺蟲效果，且對秀珍菇生長無影響，兩種生物藥劑均可作為防治秀珍菇雙翅目害蟲的藥劑在生產(chǎn)上推廣使用。

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（責(zé)任編輯 麻小燕）