鄧智超 李佳 宋營(yíng)虎

[關(guān)鍵詞]三七;蜂膠;免疫;小鼠

蜂膠是由蜜蜂從植物幼芽、樹(shù)皮與樹(shù)干裂縫上采集來(lái)的樹(shù)脂，并混入它的上顎腺分泌物和蜂蠟等加工而成的具有芳香氣味的膠狀固體物。蜂膠的組成非常復(fù)雜，已知成分達(dá)300多種，主要生物活性物質(zhì)有黃酮類、萜烯類和咖啡酸類化合物等，是一種具有抗腫瘤、抗病原微生物、抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等生理活性的天然物質(zhì)[1]。三七為血加科植物干燥的根，止血化瘀，化瘀而不傷氣血[2]。三七粉具有多種功能，如免疫調(diào)節(jié)、抗衰老、改善記憶、抗疲勞等作用。三七粉可雙向調(diào)節(jié)人體機(jī)能，增強(qiáng)機(jī)體的應(yīng)激能力和提高機(jī)體的免疫能力，是療補(bǔ)功能兼?zhèn)涞乃幨惩粗参锼嶽3]。

本實(shí)驗(yàn)研究比較二者單獨(dú)使用及配伍對(duì)小鼠免疫的影響。

1 材料與方法

1.1藥物 三七由亳州天宇生物科技有限公司提供，產(chǎn)地云南;蜂膠由江蘇江大源生態(tài)生物科技有限公司提供。三七蜂膠粉有三七、蜂膠分別粉碎后，以2.5：1比例混合制成。

1.2 動(dòng)物 SPF級(jí)昆明種雌性小鼠，由上海西普爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供，體重為18.0～22.0g，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（滬）2013-0016。

1.3儀器 T-1000型電子天平（美國(guó)雙杰）、JA2003型電子天平（上海菁海）、離心機(jī)、二氧化碳培養(yǎng)箱（日本Sanyo）、恒溫水浴鍋（鞏義予華）、酶標(biāo)儀（美國(guó)Molecular Devices）、顯微鏡（日本olympus）等。

1.4動(dòng)物分組與給藥方法 試驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為5組，每組50只，分別進(jìn)行;小鼠巨噬細(xì)胞碳廓清試驗(yàn);遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn);臟體比值、抗體生成細(xì)胞數(shù)測(cè)定;ConA誘導(dǎo)小鼠淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)、NK細(xì)胞活測(cè)定。5組再隨機(jī)分為三七組、蜂膠組、三七蜂膠低劑量組、三七蜂膠高劑量組及對(duì)照組。三七組小鼠灌胃三七0.2g/kg?BW，蜂膠組小鼠灌胃蜂膠0.08g/kg?BW，三七蜂膠低劑量組灌胃三七蜂膠粉0.14g/kg?BW、三七蜂膠高劑量組灌胃三七蜂膠粉0.28g/kg?BW，對(duì)照組灌胃去離子水。灌胃體積0.02ml/g BW，對(duì)照組給予等體積蒸餾水，連續(xù)灌胃30天后。

1.5實(shí)驗(yàn)方法：按照《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》2003版“增強(qiáng)免疫功能實(shí)驗(yàn)”進(jìn)行免疫實(shí)驗(yàn)及相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，若方差齊，采用單因素方差分析進(jìn)行總體比較，發(fā)現(xiàn)差異再用Dunnett-t法進(jìn)行多個(gè)劑量組與一個(gè)對(duì)照組均數(shù)間的兩兩比較。若方差不齊則對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換，滿足方差齊性檢驗(yàn)后，用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì);若變量轉(zhuǎn)換后仍未達(dá)到方差齊性，則改用秩和檢驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)總體比較有差異，則采用不要求方差齊性的Tamhane’s ?T2檢驗(yàn)進(jìn)行兩兩比較，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)小鼠體重的影響 各個(gè)試驗(yàn)小組各劑量組小鼠試驗(yàn)初期、試驗(yàn)中期、試驗(yàn)?zāi)w重及實(shí)驗(yàn)期間體重增長(zhǎng)與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 對(duì)小鼠免疫器官臟器/體重比值的影響三七復(fù)合物各劑量組對(duì)小鼠脾臟/體重比值和胸腺/體重比值與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見(jiàn)表1

2.4對(duì)小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)的影響三七組、蜂膠組和三七蜂膠低劑量組小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)，與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表2，P>0.05）。三七蜂膠高劑量組小鼠抗體生成細(xì)胞數(shù)增加，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表2，P<0.05）。

3.6對(duì)小鼠NK細(xì)胞活性的影響三七組、三七蜂膠低劑量組小鼠NK細(xì)胞活性，與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表3，P>0.05）。蜂膠組、三七蜂膠高劑量組小鼠NK細(xì)胞活性顯著增大，與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表3，P<0.05）。

機(jī)體的免疫系統(tǒng)是能識(shí)別并清除從外環(huán)境中入侵的病原體和內(nèi)環(huán)境中由于各種因素產(chǎn)生的腫瘤細(xì)胞，主要包括體液免疫、細(xì)胞免疫以及非特異性免疫。其中體液免疫由抗體介導(dǎo)，抗體產(chǎn)生量體現(xiàn)了體液免疫功能的強(qiáng)弱[4]，此外抗體細(xì)胞生成數(shù)是衡量機(jī)體體液免疫功能的重要指標(biāo)。DTH和抗體生成能力這 2個(gè)指標(biāo)相結(jié)合，可用來(lái)準(zhǔn)確評(píng)價(jià)一般藥物的免疫藥理活性[5]。細(xì)胞免疫由T細(xì)胞介導(dǎo)，經(jīng)其自身分化為效應(yīng)細(xì)胞后執(zhí)行免疫功能，本試驗(yàn)通過(guò)ConA誘導(dǎo)小鼠T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)以及利用SBC可與腹壁皮膚蛋白結(jié)合成抗原，并且刺激T細(xì)胞增殖及激活，由此驗(yàn)證三七蜂膠混合粉對(duì)T細(xì)胞的影響[6]。非特異性免疫又稱固有免疫，是機(jī)體遇到病原體后的第一道防線，執(zhí)行非特異性免疫的細(xì)胞包括具有吞噬能力的巨噬細(xì)胞、不受MHC限制的自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞） 等。其中巨噬細(xì)胞吞噬能力是衡量機(jī)體非特異性免疫功能的重要標(biāo)志之一，本試驗(yàn)通過(guò)小鼠碳粒廓清試驗(yàn)、NK細(xì)胞測(cè)判斷三七蜂膠混合粉對(duì)非特異性免疫的調(diào)節(jié)作用進(jìn)行評(píng)估。

蜂膠作為天然免疫刺激劑， 能強(qiáng)化免疫系統(tǒng)， 增強(qiáng)免疫細(xì)胞的活力。對(duì)免疫系統(tǒng)的中心器官胸腺， 蜂膠可促進(jìn)產(chǎn)生大量T細(xì)胞。蜂膠能促進(jìn)脾臟產(chǎn)生大量淋巴細(xì)胞，有豐富的B細(xì)胞，可分泌特殊性抗體;對(duì)骨髓、淋巴結(jié)等整個(gè)系統(tǒng)產(chǎn)生有益的影響[7]。三七粉可明顯增強(qiáng)免疫功能低下小鼠的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能，明顯增強(qiáng)免疫功能低下小鼠的遲發(fā)性超敏反應(yīng)，顯著提高免疫功能低下小鼠血清溶血素的生成[3]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，三七組小鼠單核-巨噬細(xì)胞碳廓清吞噬指數(shù)、NK細(xì)胞活性顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;蜂膠組小鼠足趾腫脹度、巨噬細(xì)胞碳廓清吞噬指數(shù)、NK細(xì)胞活性顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;三七蜂膠低劑量組小鼠巨噬細(xì)胞碳廓清吞噬指數(shù)顯著增大、三七蜂膠高劑量組小鼠小鼠足趾腫脹度、抗體生成細(xì)胞數(shù)、巨噬細(xì)胞碳廓清吞噬指數(shù)、NK細(xì)胞活性均顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與以上文獻(xiàn)相似。說(shuō)明三七、蜂膠均有一定的增強(qiáng)免疫作用，三七蜂膠混合粉效果更明顯，且高劑量組優(yōu)于低劑量組，分析原因可能是兩者具有協(xié)同作用。

參考文獻(xiàn)

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