朱旺明，譚永剛，馬卉佳，陳玉敏，藍漢冰，林仕梅*

（1.佛山市信豚生物科技有限公司，廣東佛山528211；2.廣州市信豚水產(chǎn)技術有限公司，廣東廣州510640；3.西南大學動物科技學院，重慶400716）

大口黑鱸（Largemouth Bass）俗稱加州鱸，是養(yǎng)殖產(chǎn)量較高的名特優(yōu)品種之一。但一直以來，大口黑鱸的養(yǎng)殖主要依靠冰鮮魚作為餌料，嚴重制約大口黑鱸養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，近幾年，人工配合飼料的開發(fā)應用已取得成功，越來越多的養(yǎng)殖戶也開始全程使用人工配合飼料來飼養(yǎng)大口黑鱸。

大口黑鱸為肉食性魚類，飼料中要有較高的動物蛋白含量，且大口黑鱸配合飼料對魚粉的依賴性比較高（Carl，2002）。魚粉作為日趨短缺的海洋資源，價格一直居高不下，從而導致大口黑鱸配合飼料的成本難以降低，也因此制約大口黑鱸配合飼料的推廣。目前有關大口黑鱸配合飼料中的魚粉替代研究較少。南極磷蝦粉來自南極的新鮮磷蝦，經(jīng)真空冷凍干燥技術、熱風干燥技術加工后，將整只的南極磷蝦干做成粉狀，其很好的保留了南極磷蝦的營養(yǎng)成分以及體型色澤，營養(yǎng)豐富，能為特種水產(chǎn)魚類提供全面均衡的營養(yǎng)，天然的蝦青素是普通魚飼料的40倍之多。南極磷蝦富含強有力的低溫生態(tài)酶，能促進消化，提高飼料利用率，從而促進魚類的生長。

南極磷蝦粉作為飼料蛋白源已經(jīng)在大西洋鮭、庸鰈、大西洋鱈魚、虹鱒、大菱鲆等海水肉食性魚 類 有 所 研 究 （孔 繁 華 等，2012；Moren，2007；Yoshitom，2006），但大口黑鱸等淡水肉食性魚類對南極磷蝦粉利用方面的研究鮮見報道。本試驗旨在探討南極磷蝦粉替代魚粉對大口黑鱸生長性能及部分生理生化指標的影響，以期為南極磷蝦粉在大口黑鱸配合飼料中的應用提供理論依據(jù)。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗飼料 本試驗共設4種試驗飼料，分別用0%（D1組）、3%（D2組）、6%（D3組）、9%（D4組）的南極磷蝦粉等量替代大口黑鱸配合飼料中的魚粉，試驗飼料的組成及營養(yǎng)水平見表1，南極磷蝦粉、秘魯魚粉的成分及含量見表2。所有飼料原料均過80目篩，充分混合均勻后加魚油、豆油和大豆磷脂進行再次混合，最后加工成粒徑為2 mm的顆粒飼料，放置冰箱低溫保存待用。

表1 試驗飼料組成及營養(yǎng)水平（風干基礎）

表2 南極磷蝦粉與秘魯蒸汽魚粉的常規(guī)營養(yǎng)成分及氨基酸組成 %

1.2 試驗設計與飼養(yǎng)管理 試驗用大口黑鱸購自某苗種場，先在暫養(yǎng)箱中暫養(yǎng)馴食1個月，馴化結(jié)束后，饑餓24 h，隨機選取30尾體格健壯、大小均勻的魚（約12 g）稱重后，置于300 L的圓柱形水族缸中；每種試驗飼料隨機投喂3個水族缸，每天表觀飽食投喂兩次（08：00和16：00），并記錄投喂量。各水族缸均與循環(huán)凈化系統(tǒng)相連，養(yǎng)殖系統(tǒng)循環(huán)水（2 L/min）經(jīng)海綿層和珊瑚砂過濾，以除去固體廢物，連續(xù)充氣，以保證水體溶氧充足。每周施用光合細菌500 mL。光周期為自然光照。養(yǎng)殖試驗共持續(xù)8周。水化指標每三天測量一次：氨氮小于0.3 mg/L，pH為7.2～7.6，溫度控制為（28±1）℃。

1.3 樣品收集 養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，饑餓24 h，以缸為單位計大口黑鱸條數(shù)并稱總重，然后每組隨機取出10尾魚，其中5尾直接-80℃保存留作全魚營養(yǎng)成分分析，5尾魚稱體重、量體長后，用2.5 mL針筒對每條魚進行尾靜脈取血，4℃放置4 h，然后3500 r/min，4℃離心10 min取血清，用于生理生化指標檢測。然后取背部兩側(cè)白肌，再進行解剖取出內(nèi)臟，分離肝臟，稱取內(nèi)臟重和肝臟重。所有樣品均保存于-80℃冰箱待分析。5尾魚稱體重、量體長后，用2.5 mL針筒對每條魚進行尾靜脈取血，用于白細胞、紅細胞計數(shù)以及血紅蛋白測定。

1.4 樣品檢測

1.4.1 生長性能指標的測定

成活率/%=試驗結(jié)束時魚尾數(shù)/試驗開始時尾數(shù)×100；

增重率/%=（終末體重-初始體重）/初始體重×100；

特定生長率/（%/d）=ln（試驗魚末重/試驗魚初重）/飼養(yǎng)時間×100；

飼料系數(shù)=飼料攝食量/試驗魚增重；

蛋白質(zhì)效率/%=試驗魚增重/（試驗魚飼料攝食量×飼料蛋白質(zhì)含量）×100；

臟體比=試驗魚內(nèi)臟重/試驗魚體重×100；肝體比=試驗魚肝臟重/試驗魚體重×100；

魚體肥滿度=試驗魚體重/試驗魚體長3×100。

1.4.2 飼料、全魚和肌肉營養(yǎng)成分的測定 飼料、全魚和肌肉的粗蛋白質(zhì)、粗脂肪、粗灰分和水分按照國標GB/T 6432-1994、GB/T 6433-2006、GB/T 6438-2007和GB/T 6435-2014方法測定。

1.4.3 血清酶活指標以及生理生化指標的測定血清酶活指標以及部分生理生化指標的測定按照南京建成試劑盒提供的方法進行檢測。紅細胞計數(shù)液配制如下：3.88 g NaCl，2.50 g Na2SO4，2.91 g Na2HPO4·12H2O，0.25 g KH2PO4，0.10 g甲基紫2B和7.5 mL 37%甲醛，加蒸餾水定容至1000 mL。用計數(shù)液200倍稀釋抗凝血，染色30 min后，血球計數(shù)板常規(guī)計數(shù)紅細胞。紅細胞比容與血紅蛋白含量參照陸永綏等（1996）的方法測定。

1.5 數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計 所有數(shù)據(jù)均采用 “平均值±標準誤”表示，采用SPSS 17.0對數(shù)據(jù)進行單因素方差分析（One-way ANOVA）后，使用Duncan’s多重比較分析數(shù)據(jù)間的差異顯著性，顯著水平為P＜0.05。

2 試驗結(jié)果

2.1 南極磷蝦粉替代部分魚粉對大口黑鱸生長性能的影響 由表3可知，各組成活率之間沒有顯著差異（P＞0.05）。使用南極磷蝦粉等量替代魚粉，各試驗組的增重率（WGR）和特定生長率（SGR）隨著替代水平的上升而上升，且均顯著高于對照組（P＜0.05），D2、D3、D4組的SGR較對照組分別提高14.0%、15.8%、20.5%。蛋白質(zhì)效率（PER）隨著南極磷蝦粉等量替代魚粉水平的上升而顯著上升，D2、D3、D4組較對照組分別提高9.1%、16.8%、27.3%，且6%替代組顯著高于對照組和3%替代組，而9%替代組則顯著高于對照組和其他水平替代組（P＜0.05）。飼料系數(shù)（FCR）隨著南極磷蝦粉等量替代魚粉水平的上升而顯著降低，D2、D3、D4組較對照組分別降低8.0%、14.2%、21.0%（P＜0.05）。

表3 不同試驗組大口黑鱸生長性能及飼料利用率

2.2 南極磷蝦粉等量替代魚粉對大口黑鱸形體指標的影響 由表4可知，肥滿度（CF）、臟體比（VSI）、肝體比（HSI）均以6%磷蝦粉替代組（D3）最高，但各組間差異不顯著（P＞0.05）。

表4 不同試驗組大口黑鱸形體指標%

2.3 南極磷蝦粉等量替代魚粉對大口黑鱸體成分組成的影響 由表5可知，各組全魚的水分、粗蛋白質(zhì)、粗灰分沒有顯著差異（P＞0.05），粗脂肪以6%南極磷蝦粉替代組最高，較對照組顯著提高13.8%（P＜0.05），其他各組間差異不顯著。

表5 不同試驗組大口黑鱸體成分組成%

2.4 不同水平南極磷蝦粉等量替代魚粉對大口黑鱸血液指標的影響 由表6可知，D2、D3、D4組試驗魚血液中的白細胞數(shù)目（WBC）較對照組分別提高66.1%、61.1%、56.5%（P＜0.05），紅細胞數(shù)目（PBC）較對照組分別提高25.2%、25.2%、20.7%（P＜0.05），而各替代組之間沒有顯著差異（P＞0.05）。血紅蛋白（HGB）和白蛋白（ALB）的濃度各組之間差異均不顯著（P＞0.05）。

表6 不同試驗組大口黑鱸血液指標

2.5 不同水平南極磷蝦粉等量替代魚粉對大口黑鱸血清抗氧化指標的影響 表7結(jié)果表明，超氧化物歧化酶（SOD）隨著南極磷蝦粉替代魚粉水平的上升而升高，其中以9%南極磷蝦粉替代組最高，較對照組提高45.0%（P＜0.05），其余各組與對照組之間無顯著差異（P＞0.05）。過氧化氫酶（CAT）活力隨著南極磷蝦粉替代魚粉水平的上升而升高，其中以9%南極磷蝦粉替代組最高，較對照組提高36.4%（P＜0.05）。D2、D3、D4組的谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）較對照組分別提高13.9%、12.9%、23.2%（P＜0.05），而各替代組之間差異不顯著（P＞0.05）。各組試驗魚血清中的丙二醛（MDA）含量與對照組沒有顯著差異（P＞0.05）。

表7 不同試驗組大口黑鱸血清抗氧化指標

表8 不同試驗組大口黑鱸血清生化指標

2.6 不同水平南極磷蝦粉等量替代魚粉對大口黑鱸血清生化指標的影響 從表8可知，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）活性在各組之間均沒有顯著差異（P＞0.05）。各南極磷蝦粉替代組甘油三酯（TG）顯著高于對照組（P＜0.05）?？偰懝檀迹═C）濃度隨著南極磷蝦粉替代魚粉水平的上升而上升，其中9%南極磷蝦粉替代組的TC濃度較對照組提高21.5%（P＜0.05）。血清總Ca/P比例隨著南極磷蝦粉替代魚粉水平的上升而下降，D3、D4組血清中的Ca/P顯著低于對照組（P＜0.05）。

3 討論

3.1 飼料中南極磷蝦粉等量替代魚粉對大口黑鱸生長的影響 南極磷蝦粉作為可替代魚粉的優(yōu)質(zhì)蛋白源，其加工脫脂后的南極磷蝦粉蛋白質(zhì)含量高，氨基酸平衡好（Olsen等，2006），與魚粉及多種魚類（大西洋鮭、虹鱒、尼羅羅非魚等）的氨基酸組成比較接近（NRC，1998），另外，磷蝦粉中的低分子量水溶性物質(zhì)，如核苷酸、谷氨酸、脯氨酸和甘氨酸等具有明顯的促攝食作用（袁玥等，2012；Kurashige等，2005）。Gabermma（2005）等研究表明，飼料中添加1.5%南極大磷蝦肉可以有效促進尼羅羅非魚（Oreochromisniloticus）幼魚的進食，增加體重，提升攝食率和消化率。有研究表明，在餌料中添加南極大磷蝦粉，對真鯛（Pagrosomus major）、黑鯛（Sparusmacrocephalus）（Shimizu等，1990）、 日 本 鰻 鱺（Anguillajaponicus）（Ibrahim等，1984）有明顯的誘食作用。

近年來，關于磷蝦粉在不同魚類飼料中替代魚粉研究較多，磷蝦粉在一定水平內(nèi)替代飼料中的魚粉對大西洋鱈魚、虹鱒、大菱鲆、星斑川鰈和凡納濱對蝦的生長無不利影響，在某些水產(chǎn)動物中還可以起到一定促進作用，如在大西洋鮭飼料中用南極磷蝦粉替代飼料中20%或40%的魚粉后大西洋鮭的攝食量顯著提高，從而顯著提高大西洋鮭的特定生長率和增重率，但經(jīng)過一段時間后，這種誘食作用消失，導致在后半段時間里這種生長上的差異性消失（Hansen等2010；Suontama等，2007；Olsen等，2006）；嚴俊麗等（2016）研究表明，飼料中用10%～40%的南極磷蝦粉替代飼料中的魚粉能顯著提高圓斑星鰈幼魚的增重率和飼料效率，且添加30%和40%效果最好，飼料效率呈現(xiàn)同樣的趨勢；Suontama等（2007）研究表明，用北極磷蝦粉替代60%的魚粉能顯著提高庸鰈的特定生長率。本研究中發(fā)現(xiàn)，在大口黑鱸配合飼料中利用不同水平（0%、3%、6%和9%）的磷蝦粉等量替代魚粉，對于大口黑鱸幼魚的增重率、特定生長率和飼料蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)化率均有顯著的促進作用，同時能顯著降低飼料系數(shù)，研究結(jié)果與上述研究結(jié)果比較接近，說明在一定水平內(nèi)利用南極鱗蝦粉替代魚粉可以通過提高攝食量和飼料蛋白質(zhì)效率來促進水產(chǎn)動物的生長。另外，本研究在設計時只考慮南極鱗蝦粉在實際生產(chǎn)中的應用研究，所以采用等量替代的方式，而不是等氮等能的替代方式，由于試驗所用的南極磷蝦粉是經(jīng)過脫脂的，脂肪含量與魚粉基本一致，但蛋白質(zhì)含量要稍高于魚粉，所以試驗飼料中蛋白質(zhì)含量隨南極磷蝦粉替代水平的上升而上升，這也可能是隨著飼料中南極磷蝦粉替代魚粉水平上升試驗魚的生長性能顯著提高的原因之一。

3.2 飼料中南極磷蝦粉等量替代魚粉對大口黑鱸形體指標和全魚體組成成分的影響 本試驗結(jié)果表明，飼料中利用不同水平南極鱗蝦粉等量替代魚粉對大口黑鱸的肥滿度、臟體比、肝體比和脂體比等形體指標以及體成分中的水分、粗蛋白質(zhì)和灰分含量均無顯著影響。但6%磷蝦粉替代魚粉組全魚中粗脂肪的含量顯著高于對照組。研究表明，飼料的營養(yǎng)組成與魚體的營養(yǎng)組成有著密切的關系（李愛杰，1996），飼料蛋白質(zhì)的含量和來源、氨基酸的組成及脂肪含量都可能對脂肪在魚體內(nèi)的吸收利用和沉積產(chǎn)生影響（李賢等，2012）。而本試驗中，隨著磷蝦粉替代水平的上升，飼料營養(yǎng)組成也隨之發(fā)生變化，飼料中的蛋白質(zhì)含量、氨基酸含量以及蛋白/能量比都隨之發(fā)生變化，是否是因為上述因素導致6%磷蝦粉等量替代魚粉后魚體肌肉的脂肪含量顯著高于對照組還有待進一步研究。

3.3 飼料中南極磷蝦粉等量替代魚粉對大口黑鱸血液指標的影響 血清總蛋白和白蛋白的含量可反映動物體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝情況。血清中總蛋白和白蛋白含量升高則表明動物吸收和代謝水平提高，可促進蛋白質(zhì)合成和氮的沉積（孫宏等，2014；Baldi等，1999）。本試驗中，在大口黑鱸幼魚飼料中添加磷蝦粉可以有效提高血液中白蛋白含量，而本試驗結(jié)果中，隨著磷蝦粉替代水平的上升，飼料蛋白質(zhì)效率也隨之顯著升高，可見磷蝦粉可以通過提高血液中白蛋白含量進而提高大口黑鱸對蛋白質(zhì)的利用。

魚類的血紅細胞在其呼吸生理方面具有重要作用（尾崎久雄，1983），紅細胞除了有運輸氧的功能外還具有增強吞噬，免疫黏附和防御感染等免疫功能，白細胞是無色的有核血細胞，是機體防御機能的重要組成部分，其主要的功能是吞噬入侵機體的細菌，嗜中性粒細胞和單核細胞都具有較強的吞噬作用（趙菇茜，2011；孫玲，2008）。本試驗中，在大口黑鱸飼料中添加磷蝦粉可以提高血液中紅細胞與白細胞的數(shù)量，說明磷蝦粉在一定程度上可以提高大口黑鱸的免疫功能，這可能與磷蝦粉中蝦青素含量較高有關。有研究證明，蝦青素不僅具有抗光性和抗氧化作用，還具有促進魚類和蝦類的生長和免疫機制、提高其成活率的作用（徐吟梅等，2010）。

3.4 飼料中磷蝦粉等量替代魚粉對大口黑鱸血清抗氧化指標的影響 機體內(nèi)過多的自由基能攻擊各種生物大分子，引起DNA損傷、脂質(zhì)過氧化等一系列氧化損傷，進而導致生物體病變（Martnez等，2005）。MDA是自由基引發(fā)的脂質(zhì)過氧化反應的最終產(chǎn)物，SOD、GSH-Px與CAT是機體清除自由基的關鍵酶，本試驗中，用南極磷蝦粉等量替代魚粉不影響加州幼魚血清中MDA的含量，但顯著提高了血清中SOD、GSH-Px的活力，綜合這四個指標可以得知，在大口黑鱸配合飼料中添加南極磷蝦粉可在一定程度上提高大口黑鱸的抗氧化能力，這與孔繁華等（2012）以南極磷蝦粉替代魚粉飼養(yǎng)大菱鲆，能夠清除機體內(nèi)氧自由基，提高機體抗氧化功能的結(jié)果相仿。南極磷蝦粉富含蝦青素，含量為290.40 mg/kg，是魚粉的13倍，蝦青素是一種天然的抗氧化劑，抗氧化活性是維生素E的100倍，在體內(nèi)可以起到清除羥自由基的作用，增強水產(chǎn)動物的疾病抵抗能力，提高存活率（Kurashige等1990）。同時南極磷蝦粉中磷脂含量豐富，磷脂是細胞膜重要的組成部分，同時也具有抗氧化的作用（龔洋洋等，2013）。研究表明，飼料中添加蝦青素可以顯著降低大黃魚血清MDA含量，提高SOD的活力和機體抗氧化能力（Li等2014）。此外，南極磷蝦粉的硒含量也比魚粉多，對細胞抗氧化系統(tǒng)（谷胱甘肽系統(tǒng)）非常重要（韓星星等，2018；April 2013），而南極鱗蝦粉中的蝦青素、卵磷脂是否是提高機體抗氧化能力的主要因素還有待進一步研究。

3.5 飼料中磷蝦粉等量替代魚粉對大口黑鱸血清部分生理生化指標的影響 堿性磷酸酶（ALP）廣泛存在于動物機體內(nèi)，特別是骨骼、肝、腎、小腸、胎盤、血細胞、乳腺上皮細胞和膽汁中較多（趙朝陽等，2008），在水產(chǎn)動物代謝過程中，堿性磷酸酶起著重要的調(diào)控作用，能夠增強血細胞識別異物，是魚體巨噬細胞溶酶體的標志酶，與溶酶體的活性直接相關，因此可以作為魚體非特異性免疫的指標（徐吟梅等，2010），另外ALP與多種物質(zhì)代謝的調(diào)節(jié)調(diào)控相關，在水生動物骨骼礦化方面有重要作用，其活性在一定程度上可以反映動物的生長速度，與動物的生長呈正相關（唐琴等，2011；張洪淵等，1994）。血液鈣、磷水平和ALP活力常用于衡量動物體內(nèi)鈣、磷的營養(yǎng)狀況以及骨骼鈣、磷的吸收程度（趙朝陽等，2008；Zhang等，2006），ALP的活性大小是判斷磷是否缺乏的標準（徐建業(yè)等，2004），本試驗中，飼料中添加南極磷蝦粉對血清ALP的活力沒有顯著影響，可見南極磷蝦粉替代適量魚粉時不影響大口黑鱸幼魚的非特異性免疫和對磷的吸收。南極磷蝦粉是生物利用礦物質(zhì)（銅101 ppm、硒12 ppm、鋅72 ppm、鈣1.7%和磷1.3%）的優(yōu)良來源（徐吟梅等，2010）。在正常生理狀態(tài)下，血鈣血磷的含量保持在動態(tài)平衡（繆明，2002），本試驗中，6%、9%磷蝦粉替代組血清中Ca/P顯著低于對照組，是否是因為較高水平磷蝦粉替代魚粉后對飼料中鈣、磷含量及利用率產(chǎn)生影響所致還有待進一步研究。

在正常的新陳代謝過程中，動物血清中會維持一定水平的轉(zhuǎn)氨酶活性。但當肝臟組織發(fā)生病變時，細胞內(nèi)的轉(zhuǎn)氨酶大量地釋放到血清中，從而引起血清中的ALT和AST活性超過正常水平，因此，血清轉(zhuǎn)氨酶活性大小可反映肝臟受損的程度（嚴俊麗等，2016），本試驗中，大口黑鱸血清中ALT、AST的活力與對照組相比沒有顯著差異，說明添加南極磷蝦粉不影響大口黑鱸肝臟的功能。肝臟亦是合成膽固醇和甘油三酯的主要器官，當肝臟嚴重損傷時，膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）合成減少，血清中膽固醇和甘油三酯的含量也就隨之下降（吳莉芳等，2009）。此外，總膽固醇是構(gòu)成細胞膜的一種重要的成分，也是膽汁、維生素D和激素在合成過程中所需要的一種原料，血漿中甘油三酯則是血脂的重要組成部分。本試驗結(jié)果顯示，飼糧中添加南極磷蝦粉組大口黑鱸血清中的TC與TG含量高于對照組，說明南極磷蝦粉對大口黑鱸肝臟沒有毒害作用，這與魏佳麗（2015）和Baldi（1999）研究結(jié)果一致。

4 結(jié)論

4.1 在大口黑鱸幼魚配合飼料中用3%～9%的南極磷蝦粉等量替代魚粉，可以提高大口黑鱸的生長性能和免疫功能。

4.2 大口黑鱸配合飼料中用南極磷蝦粉等量替代魚粉，可提高大口黑鱸肝臟抗氧化酶（SOD、GSH-Px）的活性，其中以9%磷蝦粉等量替代魚粉組效果最為明顯。