徐泰 張思明 李璐 朱文標 范苑林

[摘要]目的 分析DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱα（TopoⅡα）在乳腺癌患者中的表達情況及臨床意義。方法 選擇2017年6月～2018年8月本院收治的144名乳腺癌患者，患者均經(jīng)病理確診為乳腺浸潤性導管癌，術(shù)前均未行放化療治療，入院后接受手術(shù)治療，通過免疫組化方法檢測術(shù)后標本的TopoⅡα蛋白表達，觀察TopoⅡα的陽性表達與乳腺癌臨床特征的相關(guān)性。結(jié)果 病理分級Ⅲ級乳腺癌患者的TopoⅡα蛋白陽性比例高于病理分級Ⅰ～Ⅱ級的乳腺癌患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;Ki-67陽性乳腺癌患者的TopoⅡα蛋白陽性比例高于Ki-67陰性的乳腺癌患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;Spearman秩相關(guān)分析顯示，乳腺癌病理分級與Ki-67與TopoⅡα表達成顯著正相關(guān)（P<0.05）。結(jié)論 TopoⅡα與腫瘤病理分級及增值狀態(tài)相關(guān)。

[關(guān)鍵詞]乳腺癌;DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱα;免疫組化學;Ki-67

[中圖分類號] R737.9? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1674-4721（2019）6（c）-0028-03

[Abstract] Objective To analyze the expression of DNA topoisomerase Ⅱ alpha （TopoⅡα） in breast cancer patients and its clinical significance. Methods A total of 144 breast cancer patients admitted to our hospital from June 2017 to August 2018 were selected. All patients were pathologically diagnosed as invasive ductal carcinoma of the breast. No preoperative radiotherapy or chemotherapy was given. After admission， they received surgical treatment. The expression of TopoⅡα protein was detected by immunohistochemical method. The correlation between the positive expression of TopoⅡα and the clinical characteristics of breast cancer was observed. Results The positive rate of TopoⅡα protein in breast cancer patients with pathological grade Ⅲ was higher than that with pathological grade Ⅰ-Ⅱ （P<0.05）. The positive rate of TopoⅡα protein in breast cancer patients with Ki-67 positive was higher than that with Ki-67 negative （P<0.05）. Spearman rank correlation analysis showed that there was a significant positive correlation between pathological grading， Ki-67 and TopoⅡα expression in breast cancer tissues （P<0.05）. Conclusion The expression of TopoⅡα protein is significantly correlated with the pathological grading.

[Key words] Breast cancer; DNA topoisomerase Ⅱα; Immunohistochemistry; Ki-67

DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱα（DNA topoisomcrasen Ⅱα，TopoⅡα）是DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ的同工酶，通過改變DNA的α值而影響其拓撲結(jié)構(gòu)。引起拓撲異構(gòu)反應的酶，其分子量為170 kD，基因定位于17q21～22，以ATP供能發(fā)揮催化活性，在DNA復制、轉(zhuǎn)錄過程中起著重要作用[1]。乳腺癌是常見病，在婦女惡性腫瘤中發(fā)病率居于首位，是女性健康的第一殺手[2]。近年來，隨著研究的不斷深入，乳腺癌在治療上倡導以手術(shù)為主，結(jié)合化療、放療、內(nèi)分泌等個體化治療方案，獲得了令人滿意的效果。然而乳腺癌的療效仍舊存在極大的差異，這是因為乳腺癌的發(fā)生是多因素、多步驟的復雜過程。尋找預測乳腺癌治療的生物學指標是當下的研究熱點，其中雌激素受體（estrogen receptor，ER）、孕激素受體（progesterone receptor，PR）、增殖細胞相關(guān)的核抗原（Ki-67）、人類表皮生長因子受體2（CerB-2）已被證實與乳腺癌的治療與預后息息相關(guān)，根據(jù)表達情況可分為Luminal A、Luminal B樣型、Luminal B-like型、Her-2陽性型、基底樣型四種分子分型[3]。有研究發(fā)現(xiàn)TopoⅡα基因是一個與惡性腫瘤預后有密切關(guān)系的基因，其在多種腫瘤中均有改變且以表達增高為主[4]。本研究通過免疫組化學的方式檢測TopoⅡα在乳腺癌中的表達，探討其在乳腺癌中的臨床特征關(guān)系以及臨床意義。

1資料與方法

1.1一般資料

選取2017年6月～2018年8月本院經(jīng)粗針穿刺病理確診為乳腺癌的144例患者，術(shù)前均接受放化療治療，均為女性，年齡28～76歲，中位年齡48歲，平均（50.4±13.5）歲;病理TNM分期：Ⅰ期3例，Ⅱ期106例，Ⅲ期35例;分子分型Luminal A樣型38例，Luminal B樣型45例，Luminal B-like型19例，Her-2陽性型21例，基底樣型21例[5]。本研究經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準同意。

1.2 TopoⅡα蛋白表達水平和基因擴增分析

鼠抗人TopoⅡα單克隆抗體（1∶100，MAB-0799，福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司）、辣根過氧化物酶標記的山羊抗鼠IgG標記二抗及DAB顯色試劑盒來自Polymer雙染檢測試劑盒（DS-0005，中杉金橋公司）;所有標本經(jīng)10%中性甲醛浸泡固定，常規(guī)石蠟包埋、切片4 μm厚、脫蠟水化，常規(guī)3% H2O2室溫孵育10 min;微波抗原修復2 min，分別加入一抗室溫孵育90 min，加入二抗室溫孵育10 min，PBS沖洗，DBA顯色，最后以蘇木素復染、脫水、透明、封片。用PBS代替一抗作陰性對照組，試劑盒陽性片作為陽性對照組。

1.3免疫組化結(jié)果判定標準

TopoⅡα陽性表達見于細胞核，核內(nèi)有黃色或者棕黃色顆粒為陽性，由兩位以上病理醫(yī)生對免疫組化結(jié)果進行評定，陽性細胞<5%定為（-），5%～<10%定為（+-），10%～<50%定為（+），50%～75%定為（++），>75%定為（+++）;其中（-）～（+-）判定為陰性患者，（+）～（+++）判定為陽性患者。ER、PR、Ki-67、CerB-2、人體抑癌基因（p53）免疫組化結(jié)果均來自本院病理報告。

1.4觀察指標

觀察TopoⅡα在乳腺癌中的表達情況，分析TopoⅡα與患者年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤病理組織學分級、ER、PR、HER-2、Ki-67的相關(guān)性。

1.5統(tǒng)計學方法

采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料以率表示，采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結(jié)果

2.1 TopoⅡα陽性表達與乳腺癌病理特征的關(guān)系

病理分級Ⅲ級乳腺癌患者的TopoⅡα蛋白陽性比例高于病理分級Ⅰ～Ⅱ級的乳腺癌患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;Ki-67陽性乳腺癌患者的TopoⅡα蛋白陽性比例高于Ki-67陰性的乳腺癌患者，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。不同年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、ER、PR、HER-2蛋白表達患者的TopoⅡα蛋白表達水平差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）（表1）。

2.2乳腺癌病理分級及Ki-67表達情況與TopoⅡα的相關(guān)性分析

Spearman秩相關(guān)分析顯示，乳腺癌病理分級及Ki-67與TopoⅡα表達成顯著正相關(guān)（P<0.05）（表2）。

2.3 TopoⅡα在乳腺癌組織中的表達情況

TopoⅡα陽性的細胞呈現(xiàn)淺黃、棕黃的細小顆粒。

3討論

1987年Villman等[6]首先在嚙齒動物細胞內(nèi)發(fā)現(xiàn)TopoⅡ具有α和β兩種同工酶，其中TopoⅡα與CerbB-2基因鄰近，此區(qū)在發(fā)生乳腺腫瘤時頻繁出現(xiàn)突變，Vici等[7]的研究發(fā)現(xiàn)1600例CerB-2陰性乳腺癌患者中未發(fā)現(xiàn)TopoⅡα基因擴增者，這一發(fā)現(xiàn)提示TopoⅡα與CerbB-2基因存在密切聯(lián)系。O′Malley等[8]的研究發(fā)現(xiàn)TopoⅡα蛋白表達與TopoⅡα基因或HER-2基因無直接關(guān)聯(lián)，但后期分析中發(fā)現(xiàn)，TopoⅡα蛋白表達的患者可以在蒽環(huán)類藥物獲得更好的療效。雖然本研究結(jié)果顯示，TopoⅡα蛋白表達與HER-2表達狀態(tài)差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），但TopoⅡα蛋白表達仍可作為預測蒽環(huán)類化療療效的生物指標。

既往研究顯示，TopoⅡα蛋白表達與腫瘤的增值活性相關(guān)[9]。何奇等[10]發(fā)現(xiàn)TopoⅡα在乳腺病組織、導管上皮不典型增生組織、導管內(nèi)癌組織及浸潤性導管癌組織中的陽性率分別為25.0%、28.0%、53.1%和53.6%，在乳腺上皮增生發(fā)展為癌的過程中，TopoⅡα表達水平逐漸增高。本研究結(jié)果顯示，TopoⅡα蛋白表達水平與腫瘤組織學分級存在正相關(guān)趨勢（P<0.05），提示TopoⅡα可能與腫瘤分化程度相關(guān)，在一定程度上反映乳腺癌的增值活性。

Ki-67是一種與細胞增殖特異性相關(guān)的核抗原，已被證實與多種惡性腫瘤的發(fā)展、轉(zhuǎn)移、預后有關(guān)[11-12]。相關(guān)文獻報道Ki-67及TopoⅡα的表達具有相關(guān)性[13]，孫旸等[14]發(fā)現(xiàn)在子宮肉瘤中，Ki-67與TopoⅡα存在線性相關(guān);黃炳臣等[15]的研究顯示Ki-67與TopoⅡα在大腸腺癌中成正相關(guān)性，可作為腫瘤細胞增值的特異性標志物。本研究結(jié)果顯示，乳腺癌患者中TopoⅡα蛋白表達水平越高，Ki-67表達水平也相應增高，兩者存在相關(guān)性（P<0.05）。

綜上所述，在乳腺癌患者中，TopoⅡα的蛋白表達水平與乳腺癌的惡性程度存在密切關(guān)系，同時也是預測蒽環(huán)藥物化療的敏感指標，而且針對TopoⅡα免疫組化檢測更為經(jīng)濟，易廣泛應用于臨床，但能否作為評價患者預后的預測因子仍需進一步行生存預后相關(guān)分析。本研究雖然發(fā)現(xiàn)了TopoⅡα與腫瘤增值分化相關(guān)，但也存在缺陷，未能闡明其是否與預后相關(guān)以及其與腫瘤增值分化的作用機制。今后將進一步擴大樣本進行驗證，并探討其與患者預后的相關(guān)性。

[參考文獻]

[1]Berger JM，Gamblin SJ，Harrison SC，et al.Structure and mechanism of DNA topoisomerase Ⅱ[J].Nature，1996，379（6562）：225-232.

[2]Wanqing C，Kexin S，Rongshou Z，et al.Cancer incidence and mortality in China，2014[J].Chin J Cancer Res，2018，30（1）：1-12.

[3]Dalgin GS，Alexe G，Scanfeld D，et al.Portraits of breast cancer progression[J].BMC Bioinformatics，2007，8：291.

[4]Park K，Kim J，Lim S，et al.Topoisomerase Ⅱ-alpha （topoⅡ） and HER2 amplification in breast cancers and response to preoperative doxorubicin chemotherapy[J].Eur J Cancer，2003，39（5）：631-634.

[5]康宇娟，劉思，宋健，等.乳腺癌分子分型的研究進展[J].中華實驗外科雜志，2016，33（4）：1158-1160.

[6]Villman K，Stahl E，Liljegren G，et al.Topoisomerase Ⅱ-alpha expression in different cell cycle phases in fresh human breast carcinomas[J].Mod Pathol，2002，15（5）：486-491.

[7]Vici P，Viola G，Botti C，et al.Docetaxel in the adjuvant therapy of HER-2 positive breast cancer patients[J].Clin Ter，2008，159（6）：449-452.

[8]O′Malley FP，Chia S，Shepherd LE，et al.Topoisomerase Ⅱ alpha protein overexpression has predictive utility in a randomized trial comparing CMF to CEF in premenopausal women with node positive breast cancer（NCIC CTG MA，5）[J].Breast Cancer Res Treat，2006，100：S18.

[9]Zaczek AJ，Markiewicz A，Seroczynska B，et al.Prognostic significance of TOP2A gene dosage in HER-2-negative breast cancer[J].Oncologist，2012，17（10）：1246-1255.

[10]何奇，徐國萍，王杰，等.TopoⅡα在乳腺癌中的表達及其臨床意義[J].中國癌癥雜志，2011，21（1）：41-45.

[11]李珂珂，童創(chuàng)，王建國，等.TopoⅡα和Ki67在浸潤性乳腺癌中的表達及其臨床意義[J].安徽醫(yī)學，2016，37（1）：18-21.

[12]帥萍.乳腺癌組織中HER2和TopoⅡα的表達及其臨床意義[J].中南大學學報（醫(yī)學版），2016，41（11）：1143-1147.

[13]劉源.TOPOⅡ、Ki67及E-Cadherin在乳腺癌組織中的表達及臨床意義[J].哈爾濱醫(yī)科大學學報，2016，50（6）：548-550.

[14]孫旸，李立安，宋磊，等.拓撲異構(gòu)酶Ⅱα和Ki-67表達與子宮肉瘤預后的相關(guān)性研究[J].解放軍醫(yī)學雜志，2008，33（11）：1325-1328.

[15]黃炳臣，覃忠衛(wèi)，羅春英，等.大腸腺癌中拓撲異構(gòu)酶Ⅱα和ki67的表達及意義[J].實用醫(yī)學雜志，2012，28（10）：1637-1639.

（收稿日期：2019-05-14? 本文編輯：祁海文）