胡紫薇，劉顯灼，戴小財(cái)，李 維

(華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬武漢中心醫(yī)院急診科，湖北武漢 430000)

流行病學(xué)研究證實(shí)，卵巢癌的發(fā)病率在(252～627)/10萬(wàn)人，近年來(lái)，其發(fā)病率或病死率等具有一定的上升趨勢(shì)[1]。臨床上卵巢癌患者的無(wú)瘤生存時(shí)間較短，治療后5年內(nèi)的病死率仍然超過35%[2]。在分析研究卵巢癌發(fā)病機(jī)制的過程中發(fā)現(xiàn)，腫瘤相關(guān)生物學(xué)蛋白分子的表達(dá)改變，能夠影響卵巢癌的癌細(xì)胞生物學(xué)特征，導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖、分化成熟障礙，促進(jìn)卵巢癌的發(fā)生。Yes相關(guān)蛋白(YAP1)的表達(dá)能夠通過促進(jìn)HIPPO信號(hào)通路的激活，導(dǎo)致下游腫瘤細(xì)胞的異常持續(xù)性增殖，促進(jìn)卵巢癌的早期發(fā)生過程[3-4]。FAT4蛋白是重要的甲基化修飾因子，其能夠通過對(duì)卵巢上皮細(xì)胞的甲基化作用，增加基因突變的風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致基因錯(cuò)配修復(fù)能力的顯著下降[5]。有研究探討YAP1蛋白在卵巢癌中的表達(dá)情況，認(rèn)為YAP1蛋白的高表達(dá)是增加卵巢癌患者臨床分期進(jìn)展、臨床預(yù)后惡化的重要風(fēng)險(xiǎn)[6]，但對(duì)于YAP1蛋白或FAT4蛋白與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系研究較少。為探討FAT4蛋白、YAP1蛋白與卵巢癌的發(fā)生關(guān)系，本研究選取本院2015年1月至2017年6月收集的術(shù)后卵巢癌組織，探討不同的蛋白表達(dá)情況，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院2015年1月至2017年6月收集的術(shù)后卵巢癌組織80例(惡性組)、卵巢良性腫瘤組織80例(良性組)為研究對(duì)象。惡性組患者年齡34～67歲，平均(54.8±9.6)歲；臨床分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期20例，Ⅲ期38例，Ⅳ期14例；分化程度：G1級(jí)14例，G2級(jí)21例，G3級(jí)45例；病理學(xué)類型：漿液性囊腺癌37例，黏液性囊腺癌28例，卵巢子宮內(nèi)膜樣癌15例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移39例。良性組患者年齡35～69歲，平均(53.5±10.0)歲，其中漿液性囊腺瘤59例，黏液性囊腺瘤21例。2組患者的年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2納入、排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)卵巢癌的臨床分期為Ⅰ～Ⅳ期；(2)手術(shù)后經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為卵巢癌或卵巢良性腫瘤；(3)未使用放化療治療、免疫治療；(4)納入對(duì)象資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)未經(jīng)病理學(xué)證實(shí)；(2)轉(zhuǎn)移性卵巢癌。

1.3方法

1.3.1免疫組織化學(xué)方法 石蠟切片脫蠟至水，過氧化氫封閉內(nèi)源性過氧化物酶，3% H2O2，室溫 10 min(避光),10 mmol/L pH 6.0 枸櫞酸鈉緩沖液，PBS沖洗5 min，滴加正常山羊或兔血清封閉處理，37 ℃ 15 min。用濾紙吸去血清，不洗，直接滴加第一抗體，37 ℃ 2 h，滴加生物素化二抗，37 ℃ 40 min，PBS沖洗5 min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，加拿大樹膠或中性樹膠封片。

1.3.2免疫組織化學(xué)結(jié)果判定 YAP1蛋白的陽(yáng)性著色表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核， FAT4蛋白定位于細(xì)胞核，二者陽(yáng)性均呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)。(1)根據(jù)著色強(qiáng)度：0分為無(wú)色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為褐色、黑色；(2)根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞比例：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例11%～50%為2分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占比例>75%為4分。2種積分相乘總分<3分為陰性，≥3分為陽(yáng)性。

2 結(jié) 果

2.12組標(biāo)本的YAP1蛋白、FAT4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較 惡性組患者的YAP1蛋白、FAT4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為61.25%、71.25%，均顯著高于良性組的18.75%、26.25%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 2組標(biāo)本的YAP1蛋白、FAT4蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較[n(%)]

2.2卵巢癌組織的YAP1蛋白、FAT4蛋白表達(dá)相關(guān)性 卵巢癌組織中的YAP1蛋白與FAT4蛋白陽(yáng)性表達(dá)呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.629，P=0.000),見表2。

表2 卵巢癌組織的YAP1蛋白、FAT4蛋白表達(dá)相關(guān)性

2.3卵巢癌組織的YAP1蛋白、FAT4蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系 卵巢癌組織中的YAP1蛋的陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤分化程度、臨床分期有關(guān)(P<0.05)；FAT4蛋白陽(yáng)性表達(dá)與卵巢癌患者的腫瘤分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)，見表3～4。

表3 卵巢癌組織的YAP1蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

表4 卵巢癌組織的FAT4蛋白表達(dá)與患者臨床病理特征的關(guān)系[n(%)]

3 討 論

環(huán)境因素、遺傳因素等均可能影響卵巢癌的發(fā)生，促進(jìn)卵巢癌臨床病理特征的進(jìn)展。作為生殖系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，卵巢癌的無(wú)瘤生存時(shí)間不足38個(gè)月[7]，包括手術(shù)在內(nèi)的相關(guān)綜合性治療措施治療后的3年病死率仍然超過35%[8]?，F(xiàn)階段臨床缺乏對(duì)卵巢癌早期診斷的有效生物學(xué)血清分子，而本研究通過探討腫瘤相關(guān)蛋白的表達(dá)，為揭示卵巢癌的發(fā)生機(jī)制提供參考，為卵巢癌的免疫靶向治療提供基礎(chǔ)，為卵巢癌早期高危人群的血清學(xué)篩查提供依據(jù)。

生物學(xué)因子的濃度波動(dòng)，能夠在促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的早期核異型性的發(fā)生或中晚期臨床病理特征進(jìn)展中發(fā)揮重要作用，能夠調(diào)控癌細(xì)胞的生物學(xué)特性，干預(yù)癌細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移速率等，進(jìn)而影響患者的整體生存預(yù)后。YAP1是重要的信號(hào)通路激活因子，其對(duì)于HIPPO信號(hào)通路的激活作用，能夠提高卵巢癌上皮細(xì)胞核DNA的轉(zhuǎn)錄風(fēng)險(xiǎn)，導(dǎo)致啟動(dòng)子的增強(qiáng)和增強(qiáng)子的激活，增加癌細(xì)胞的調(diào)控異常風(fēng)險(xiǎn)?；A(chǔ)方面的研究也顯示，YAP1夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞對(duì)于基底膜的黏附和浸潤(rùn)，增加其突破基底膜的風(fēng)險(xiǎn)[9-10]；FAT4蛋白能夠與卵巢癌細(xì)胞膜內(nèi)的轉(zhuǎn)錄基因結(jié)合，促進(jìn)其甲基化的修飾，提高癌細(xì)胞的浸潤(rùn)能力，從而為癌細(xì)胞變形能力的獲得及轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)的提升提供基礎(chǔ)?；A(chǔ)領(lǐng)域的研究也認(rèn)為，F(xiàn)AT4蛋白能夠通過誘導(dǎo)癌細(xì)胞的偽足形成及對(duì)于淋巴結(jié)的黏附，從而提高了其腦部轉(zhuǎn)移及肺部轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)[11]。

本次研究發(fā)現(xiàn)，在卵巢癌病灶組織中，YAP1蛋白、FAT4蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率均明顯上升，高于良性組病灶組織，差異較為明顯，提示YAP1蛋白、FAT4蛋白二者均可能影響卵巢癌的發(fā)生過程。薈萃國(guó)內(nèi)外的相關(guān)研究，筆者認(rèn)為YAP1蛋白、FAT4蛋白主要通過以下幾個(gè)方面的因素影響卵巢癌的發(fā)生發(fā)展[12-13]：(1)YAP1蛋白能夠?qū)е麦w內(nèi)HIPPO信號(hào)通路的激活，導(dǎo)致癌細(xì)胞膜內(nèi)的第二信使如鈣離子或者三磷酸腺苷的濃度上調(diào)，增加癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)錄激活風(fēng)險(xiǎn)；(2)FAT4蛋白的表達(dá)能夠?qū)е掳┘?xì)胞錯(cuò)配基因修復(fù)能力下降，導(dǎo)致癌細(xì)胞腫瘤相關(guān)基因突變風(fēng)險(xiǎn)增強(qiáng)，增加相關(guān)腫瘤效應(yīng)分子的激活風(fēng)險(xiǎn)。安錦丹等[14]研究也通過免疫組織化學(xué)分析研究揭示卵巢癌病灶組織中的YAP1蛋白的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)YAP1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可平均上升28%，同時(shí)在病死率較高或者臨床分期較晚的卵巢癌病灶組織中，YAP1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率可進(jìn)一步上升。相關(guān)關(guān)系分析結(jié)果顯示，YAP1蛋白、FAT4蛋白的表達(dá)具有一定的內(nèi)在關(guān)系，二者可能相互影響，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)錄基因的表達(dá)，在腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特征的變化方面發(fā)揮了重要的調(diào)控作用，但具體的機(jī)制仍然需要后續(xù)研究進(jìn)一步證實(shí)。卵巢癌組織中的YAP1蛋白陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤分化程度、臨床分期具有關(guān)，提示YAP1蛋白與卵巢癌的臨床病理特征密切相關(guān)，這主要是由于YAP1蛋白能夠影響到卵巢癌細(xì)胞的分化成熟過程，提高癌細(xì)胞對(duì)臨近正常上皮組織的浸潤(rùn)能力；FAT4蛋白陽(yáng)性表達(dá)與卵巢癌患者的腫瘤分化程度、臨床分期、發(fā)生淋巴是否結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，這主要與FAT4蛋白能夠影響到卵巢癌細(xì)胞對(duì)于淋巴結(jié)的黏附能力等有關(guān)。

綜上所述，卵巢癌組織中的YAP1蛋白、FAT4蛋白表達(dá)上調(diào)，相互間呈正相關(guān)性，與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。