鄭治洪　邵先強(qiáng)　邱志龍　黎啟高　劉鵬

摘要?[目的]測定貴州德江不同等級(jí)天麻的主要成分，并進(jìn)行相關(guān)性分析。[方法]采取硫酸-苯酚法、高效液相色譜法分別對(duì)天麻中的主要成分多糖、天麻素和對(duì)羥基苯甲醇等進(jìn)行測定分析。[結(jié)果]不同等級(jí)天麻多糖含量差異顯著，但是與規(guī)格等級(jí)沒有相關(guān)性;天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量與天麻規(guī)格等級(jí)之間不具有相關(guān)性，不同規(guī)格等級(jí)之間天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量差異顯著。[結(jié)論]該研究為天麻分級(jí)和產(chǎn)品開發(fā)研究提供理論指導(dǎo)依據(jù)。

關(guān)鍵詞?天麻;規(guī)格等級(jí);成分測定;相關(guān)性分析;質(zhì)量評(píng)價(jià)

中圖分類號(hào)?R284文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼?A

文章編號(hào)?0517-6611（2019）16-0223-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.16.063

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Determination?of?Main?Components?and?Correlation?Analysis?of?Gastrodia?aleta?in?Different?Specification?Levels

ZHENG?Zhi?hong1，SHAO?Xian?qiang2，QIU?Zhi?long2?et?al?（1.Institute?of?Crop?Germplasm?Resources，?Guizhou?Academy?of?Agricultural?Sciences，?Guiyang，Guizhou?550006;2.Dejiang?County?Chinese?Herbal?Medicine?Industry?Development?Office，?Dejiang，?Guizhou?565200）

Abstract?[Objective]?The?main?components?of?different?grades?of?Gastrodia?aleta?in?Guizhou?Dejiang?were?determined?and?analyzed?for?correlation.[Method]?The?main?components?of?Gastrodia?aleta?polysaccharide，?gastrodin?and?p?hydroxybenzyl?alcohol?were?measured?and?analyzed?by?sulfuric?acid?phenol?method?and?high?performance?liquid?chromatography.[Result]There?were?significant?differences?in?the?content?of?different?levels?of?Gastrodia?aleta?polysaccharide，?but?there?is?no?correlation?with?the?specification?level;there?was?no?correlation?between?the?total?content?of?gastrodin?and?p?hydroxybenzyl?alcohol?and?the?level?of?Gastrodia?aleta，?and?the?total?content?of?gastrodin?and?p?hydroxybenzyl?alcohol?was?significantly?different?between?different?grades.[Conclusion]This?study?provides?theoretical?guidance?for?the?research?of?classification?and?product?development?of?Gastrodia?aleta.

Key?words?Gastrodia?alela;Specification?grade;Composition?determination;Correlation?analysis;Quality?evaluation

天麻為蘭科植物天麻（Gastrodia?aleta?BI.）的干燥塊莖，名貴的中藥材之一[1]。天麻味甘，性平，歸肝經(jīng)，具有息風(fēng)止痙、平抑肝陽、祛風(fēng)通絡(luò)之功效[2]。天麻分布廣泛，全國大部分地區(qū)都有種植，大多是人工栽培，少數(shù)仿野生栽培。其中，云、貴、川等地種植歷史悠久，是天麻的地道產(chǎn)區(qū)，其非地道產(chǎn)區(qū)有湖南、安徽、西藏等地[3]。但各產(chǎn)區(qū)對(duì)天麻等級(jí)劃分有所不同，直至1984年國藥聯(lián)材字第72號(hào)文規(guī)定了標(biāo)準(zhǔn)，至此我國才有了中藥材產(chǎn)業(yè)市場流通的法律依據(jù)[4]。該標(biāo)準(zhǔn)將天麻分成4個(gè)等級(jí)，一直沿用至今。然而，該標(biāo)準(zhǔn)對(duì)天麻的劃分過于簡單，沒有考慮到栽培與野生間的差異，不同產(chǎn)區(qū)或產(chǎn)地間的差異以及冬天麻與春天麻間的差異，以致于市場上出現(xiàn)不同的劃分標(biāo)準(zhǔn)，導(dǎo)致天麻產(chǎn)業(yè)發(fā)展混亂[5]。筆者通過測定天麻多糖、天麻素、對(duì)羥基苯甲醇等主要成分[6]及其相關(guān)性分析，為天麻分級(jí)提供科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1?試驗(yàn)材料

供試材料均為貴州德江天麻，經(jīng)鑒定為蘭科植物天麻（Gastrodia?aleta?BI.）的干燥塊莖，共分4個(gè)等級(jí)（一等麻平均長度11.7?cm，平均寬度4.1?cm?;二等麻平均長度?8.6?cm，平均寬度2.7?cm;三等麻平均長度7.1?cm，平均寬度1.7?cm;四等麻平均長度5.1?cm，平均寬度1.1?cm）。葡糖糖標(biāo)準(zhǔn)品、乙腈（高效液相色譜），天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司;無水乙醇、乙醇（95%）、磷酸，天津市富宇精細(xì)化工有限公司;苯酚，天津市永大化學(xué)試劑有限公司;濃硫酸，重慶川東化工（集團(tuán)）有限公司;超純水;磷（P）、鉀（K）、鈣（Ca）、鎂（Mg）、鈉（Na）、鐵（Fe）、鋅（Zn）、硼（B）、錳（Mn）、鉬（Mo）、銅（Cu）元素標(biāo)準(zhǔn)溶液等。

1.2?試驗(yàn)儀器

SG8200HDT型超聲波清洗器，上海冠特超聲儀器有限公司;萬分之一電子天平，型號(hào)JF1204，余姚市金諾天平儀器有限公司;酶標(biāo)儀，上海賽默生物科技發(fā)展有限公司;TD5-II低速離心機(jī)，長沙平凡儀器儀表有限公司;電子恒溫水浴鍋，型號(hào)HH-S8型，北京科偉永興儀器有限公司;Agilent?Technologies?1206高效液相色譜儀;Optima?8100?電感耦合等離子體發(fā)射光譜儀，Perkin?Elmer公司;Kjeltec?8400凱氏定氮儀，F(xiàn)OSS公司。

1.3?試驗(yàn)方法

1.3.1?天麻多糖含量測定。

1.3.1.1?葡萄糖對(duì)照品溶液的制備。

精確定量稱取10?mg?的葡萄糖于?100mL?容量瓶中，配成0.1?mg/mL的溶液。分別取?0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL?葡萄糖母液，加蒸餾水到??1.0mL，移液槍分別加入?5%的苯酚溶液?1.0mL，搖勻，然后加入4.5mL濃硫酸，充分搖勻，靜置10?min后在?490?nm?下測定吸光度。以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)、測量的吸光度（A）為縱坐標(biāo)，繪制葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.1.2?苯酚溶液的配制。

精密稱5.000?0?g?苯酚，燒杯溶解，全部轉(zhuǎn)移至?100mL?的棕色容量瓶中并定容，避光保存，?備用。

1.3.1.3?樣品溶液的制備。

采用水提醇沉法提取多糖[7]。精密稱取天麻干粉0.300?0?g，按1∶25（g∶mL）料液比加入蒸餾水，超聲波提取35?min，溫度50?℃，提取液及殘?jiān)哭D(zhuǎn)移至?100?mL?容量瓶中定容，取25?mL定容后的提取液于離心管中，經(jīng)離心（3?000r/min，20?min）去沉淀，得到上清液，精密吸取?10?mL于裝有40?mL乙醇（95%）的離心管中，靜置過夜，?3?000?r/min離心20?min棄上清，沉淀物熱水溶解，定容至?50?mL，得到提取液。

1.3.1.4?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

采用硫酸-苯酚法，在490?nm波長下測定溶液吸光度。以吸光度（y）為縱坐標(biāo)、濃度?（x，mg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），得回歸方程y=?3.562?1x-0.001?4（R2=0.999?5），結(jié)果表明，葡萄糖在0.02～?0.10?mg/mL具有很好的線性關(guān)系。

1.3.2?天麻素、對(duì)羥基苯甲醇含量測定。

1.3.2.1?色譜條件。

以十八烷基硅膠鍵合硅膠為填充劑，流動(dòng)相為乙腈-0.05%磷酸水（3∶97，V/V），流速為1.0?mL/min，檢測波長為?220?nm，柱溫為?30℃，進(jìn)樣量為10?μL。其色譜圖詳見圖2。

1.3.2.2?標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制。

分別精密稱取對(duì)照品天麻中天麻素和對(duì)羥基苯甲醇適量，用乙腈-水（3∶97，V/V）溶解，并定容至100?mL容量瓶中，分別配成0.188?8mg/mL的天麻素對(duì)照品溶液和0.342?mg/mL的對(duì)羥基苯甲醇對(duì)照品溶液。用注射器分別吸取1?mL經(jīng)0.45?μm微孔濾膜過濾于安瓿瓶中，除進(jìn)樣量依次為2、3、5、8、10?μL外，按色譜條件檢測峰面積，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、濃度（X）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸[8]，得天麻素的回歸方程為Y=17?587X+5.374?3（r=?1.000?0）;對(duì)羥基苯甲醇的回歸方程為Y=32?681X+18.732?（r=1.000?0）。結(jié)果表明，天麻素和對(duì)羥基苯甲醇分別在0～18.8和0～?34.2?mg/μL?具有很好的線性關(guān)系。

1.3.2.3?供試樣品溶液的制備。

稱取天麻藥材粉末2.0?g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇（50%?50?mL，稱定重量），超聲處理（功率?250?W，溫度40?℃，頻率?59?kHz）??30?min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液?10?mL，濃縮至近干無醇味，殘?jiān)右译?水（?3∶97，V/V）?溶解，轉(zhuǎn)移至?25?mL容量瓶中，用乙腈-水?（3∶97，V/V）?稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)?0.45?μm?微孔濾膜過濾?即得。

1.3.2.4?樣品含量的測定。

對(duì)不同規(guī)格等級(jí)天麻各做3次重復(fù)制備樣品溶液，進(jìn)樣10?μL，按圖2中色譜條件測定天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量[9]。

2?結(jié)果與分析

2.1?天麻樣品中多糖含量的計(jì)算

對(duì)不同規(guī)格等級(jí)天麻各做3次重復(fù)，根據(jù)吸光度，計(jì)算樣品中多糖含量。結(jié)果表明，不同等級(jí)天麻多糖含量有所差異，其中多糖含量最多的是三等天麻14.26%，其次是二等天麻，多糖含量為11.41%，一、四等天麻多糖含量差異較小，分別為9.86%和9.97%，多糖含量最少的是一等天麻。

2.2?不同規(guī)格等級(jí)天麻多糖含量方差分析

對(duì)不同規(guī)格等級(jí)天麻多糖含量進(jìn)行方差分析[10]，分析其差異顯著性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同規(guī)格等級(jí)間的F介于F0.05（3，8）和F0.01（3，8）之間、?0.01

2.3?天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量計(jì)算

根據(jù)峰面積，可計(jì)算出天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的含量，結(jié)果表明，一等、二等、三等、四等天麻素和對(duì)羥基苯甲醇平均含量分別為?0.09%、?0.09%、0.11%和0.12%，差異不明顯。

2.4?不同規(guī)格等級(jí)天麻天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量的方差分析

對(duì)不同等級(jí)天麻天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量進(jìn)行方差分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，不同等級(jí)間的F>F0.01（3，8），P≤0.01，表明4個(gè)等級(jí)天麻天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量差異極顯著。

3?小結(jié)與討論

隨著中醫(yī)藥的快速發(fā)展，天麻產(chǎn)品中的其他微量成分正在引起人們的高度重視。通過對(duì)不同規(guī)格等級(jí)天麻主要成分測定及其相關(guān)性分析，由此得知，不同等級(jí)的天麻多糖含量差異顯著，但是與規(guī)格沒有相關(guān)性;天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量與天麻規(guī)格等級(jí)之間不具有相關(guān)性，不同規(guī)格等級(jí)之間天麻素和對(duì)羥基苯甲醇含量差異顯著。因此，該試驗(yàn)結(jié)果為天麻分級(jí)提供理論依據(jù)，同時(shí)，也為今后天麻的產(chǎn)品開發(fā)研究提供指導(dǎo)意義。

參考文獻(xiàn)

[1] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[2]?鐘贛生，劉樹民，宋捷民，等.中藥學(xué)[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2012：351-352.

[3]?陽明，龐邦斌，銀勝高，等.天麻傳統(tǒng)規(guī)格等級(jí)與化學(xué)成分研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué)，2015，27（3）：42-43.

[4]?任守利.中藥天麻商品規(guī)格等級(jí)相關(guān)性及劃分合理性的研究[D].長沙：湖南中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

[5]?國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：三部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[6]?李云，?王志偉，?劉大會(huì)，等.?HPLC法測定鮮天麻中多指標(biāo)成分的含量[J].山東科學(xué)，?2017，?30（2）：7-12.

[7]?楊天友，劉金濤，李剛鳳.超聲波輔助提取德江天麻多糖工藝優(yōu)化[J].中國釀造，2015，34（12）：117-121.

[8]?朱鶴云，張秀榮，于德水，等.正交試驗(yàn)優(yōu)選天麻中天麻素與對(duì)羥基苯甲醇的提取工藝[J].吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2017，38（6）：415-417.

[9]?呂紫璇，?車早紅，?唐瑜，等.?HPLC法測定6省各等級(jí)天麻中天麻素和對(duì)羥基苯甲醇的含量[J].?醫(yī)學(xué)信息，?2016，?29（30）：212-213.

[10]?雷有成，?李建蕊，?肖佳佳，等.?天麻商品等級(jí)與天麻素和天麻多糖的相關(guān)性研究[J].中草藥，?2015，46（3）：418-423.