胡泓 周文斌

乳腺癌是臨床發(fā)病率較高的一種惡性腫瘤，且近年來(lái)其發(fā)病率不斷升高。在女性惡性腫瘤中其發(fā)病率居第一位，死亡率居第5位。而隨著細(xì)胞生物學(xué)和分子生物技術(shù)的不斷發(fā)展，乳腺癌發(fā)病機(jī)制也取得了長(zhǎng)足進(jìn)展。既往研究證實(shí)，乳腺癌與遺傳易感基因的突變密切相關(guān)，乳腺癌致病基因突變及基因多態(tài)性高危位點(diǎn)如何進(jìn)行鑒定，是遺傳傾向性乳腺癌的研究重點(diǎn)[1]。乳腺癌易感基因1/2（breast cancer susceptibility gene 1/2，BRCA1/2）是公認(rèn)的惡性腫瘤易感基因，參與染色體重組、轉(zhuǎn)錄、調(diào)控、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)及DNA損傷修復(fù)等[2]。本研究中，選取85例遺傳高風(fēng)險(xiǎn)乳腺癌患者和85例健康人員進(jìn)行，檢測(cè)其BRCA1/2編碼區(qū)SNP突變頻率，探討遺傳高風(fēng)險(xiǎn)乳腺癌患者BRCA1/2編碼區(qū)SNP突變頻率及其與腫瘤臨床病理特征相關(guān)性。現(xiàn)具體報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年月—2018年3月我院收治的85例遺傳高風(fēng)險(xiǎn)乳腺癌患者作為乳腺癌組，另外選取同期健康人員85例為健康對(duì)照組，所有入組人員均自愿簽署研究知情同意書(shū)，經(jīng)病理學(xué)診斷確診為遺傳高風(fēng)險(xiǎn)乳腺癌[3]；發(fā)病年齡≤50歲，至少有1個(gè)一級(jí)或二級(jí)親屬為發(fā)病年齡≤50歲的乳腺癌患者。排除同時(shí)合并其他類型腫瘤或乳腺癌為繼發(fā)性腫瘤者。乳腺癌組患者年齡35～75歲，平均年齡（56.91±7.12）歲；BMI18.3～25.1 kg/m2，平均BMI（22.48±0.94）kg/m2。健康對(duì)照組受檢人員年齡35～75歲，平均年齡（57.10±7.63）歲；BMI18.2～24.8 kg/m2，平均BMI（22.57±1.01）kg/m2。兩組人員的基線資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

取受檢者外周靜脈血5 mL，置于抗凝管中備用。提取基因組DNA，對(duì)BRCA1和BRCA2基因所有編碼區(qū)及內(nèi)含子和外顯子拼接區(qū)進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction，PCR）。PCR產(chǎn)物經(jīng)變性高效液相色譜分析篩查，若出現(xiàn)異常峰型的PCR樣品則進(jìn)行DNA直接測(cè)序。

核酸序列位置編碼在美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心網(wǎng)站和乳腺癌信息中心網(wǎng)站數(shù)據(jù)庫(kù)上進(jìn)行查詢比對(duì)[4]，對(duì)無(wú)報(bào)道的致病意義不明的編碼區(qū)突變位點(diǎn)分類為未知功能突變，將非編碼區(qū)或不引起氨基酸改變的突變位點(diǎn)分類為基因多態(tài)性位點(diǎn)。

1.3 觀測(cè)指標(biāo)

記錄入組遺傳高風(fēng)險(xiǎn)乳腺癌患者BRCA1/2編碼區(qū)SNP突變頻率，突變率＞5%作為高頻突變位點(diǎn)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)；比較遺傳高風(fēng)險(xiǎn)乳腺癌患者與健康人員BRCA1/2編碼區(qū)SNP突變頻率；單因素分析rs80356892位點(diǎn)多態(tài)性和與腫瘤臨床病理特征相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 遺傳高風(fēng)險(xiǎn)乳腺癌患者BRCA1/2編碼區(qū)SNP突變頻率

研究中共發(fā)現(xiàn)34個(gè)BRCA1/2編碼區(qū)SNP基因位點(diǎn)，其中14個(gè)SNP位點(diǎn)位于BRCA1基因，20個(gè)SNP位點(diǎn)位于BRCA2基因。所有SNP基因位點(diǎn)中，根據(jù)突變率＞5%，共有19個(gè)SNP基因位點(diǎn)屬于高頻突變位點(diǎn)。乳腺癌患者共有22個(gè)SNP基因位點(diǎn)的突變頻率高于正常人群，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 rs80356892位點(diǎn)多態(tài)性和與腫瘤臨床病理特征相關(guān)性

rs80356892基因位點(diǎn)突變與遺傳高風(fēng)險(xiǎn)乳腺癌患者是否有家族遺傳性、腫瘤位置、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER陰性以及PR陰性有密切聯(lián)系（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

3 討論

既往研究證實(shí)，遺傳性乳腺癌主要與多種基因的高外顯性突變有關(guān)[5]。基因突變一般是由于堿基的插入或缺失引起，可導(dǎo)致基因功能的改變，導(dǎo)致蛋白翻譯的中斷或改變[6]。大數(shù)據(jù)顯示，所有基因突變中，致病性突變占60%～70%[7-8]。BRCA1/2基因作為公認(rèn)的，與乳腺癌關(guān)系密切的抑癌基因[9-10]。本研究中，共發(fā)現(xiàn)34個(gè)BRCA1/2編碼區(qū)SNP基因位點(diǎn)，其中14個(gè)SNP位點(diǎn)位于BRCA1基因，20個(gè)SNP位點(diǎn)位于BRCA2基因。所有SNP基因位點(diǎn)中，根據(jù)突變率＞5%，共有14個(gè)基因位點(diǎn)屬于高頻突變位點(diǎn)。乳腺癌患者共有22個(gè)SNP位點(diǎn)的突變頻率高于正常人群（P＜0.05）。此外，針對(duì)過(guò)往研究[11-12]中證實(shí)與乳腺癌發(fā)生有密切聯(lián)系的rs80356892基因位點(diǎn)，本研究中發(fā)現(xiàn)其突變與遺傳高風(fēng)險(xiǎn)乳腺癌患者是否有家族遺傳性、腫瘤位置、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、ER陰性以及PR陰性有密切聯(lián)系（P＜0.05）。由此可見(jiàn)，部分BRCA1/2編碼區(qū)SNP基因位點(diǎn)可能參與乳腺癌的發(fā)生與發(fā)展。

表1 遺傳高風(fēng)險(xiǎn)乳腺癌患者BRCA1/2 編碼區(qū)SNP 突變頻率

表2 rs80356892 位點(diǎn)多態(tài)性和與腫瘤臨床病理特征相關(guān)性

綜上所述，BRCA1/2基因的有害突變可能是遺傳性乳腺癌發(fā)生的原因之一，部分BRCA1/2基因編碼區(qū)突變與遺傳高風(fēng)險(xiǎn)乳腺癌臨床病理特征有密切聯(lián)系。