袁新躍　沈莉　袁燕村　周陽元　廖劉偉　季昱　陳瑜　張培洪　胡路平　劉建偉

摘要 [目的]建立超高壓微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用測定油脂含量高的堅(jiān)果食品中硒含量的方法。[方法]0.5 g樣品中加入4 mL濃硝酸和2 mL 30%雙氧水后，經(jīng)超高壓微波消解處理，采用甲烷作為反應(yīng)氣，用電感耦合等離子體質(zhì)譜測定其中硒含量。[結(jié)果]超高壓微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜聯(lián)用法在0.1～10.0 μg/L線性關(guān)系良好（R 2=0.999），方法檢出限為0.4 μg/kg，在5、10、50 μg/kg添標(biāo)水平下，回收率為93.2%～108.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于5%（n=6）。[結(jié)論]該方法準(zhǔn)確靈敏，可以加大油脂含量高的堅(jiān)果樣品的稱樣量，提高檢出限，適用于油脂含量高的堅(jiān)果食品中硒含量的測定。

關(guān)鍵詞 超高壓微波消解;電感耦合等離子體質(zhì)譜;堅(jiān)果;硒

中圖分類號 TS207.3文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A

文章編號 0517-6611（2019）17-0204-03

Abstract [Objective] The research aimed to establish a method for determination of selenium in high oil nuts with ultrahigh pressure microwaveassisted and ICPMS.[Method]Weight 0.5 g sample， added 4 mL nitric acid and 2 mL 30% hydrogen peroxide， treated by ultrahigh pressure microwave（Easyprep TM） ，with ICPMS to measure the contents of selenium. [Result]The proposed method had good linear relationships in the range of 0.1-10.0 μg/L （R 2=0.999）.The LODs was 0.4 μg/kg， the average recoveries of added standards at 5，10，50 μg/kg were range from 93.2% -108.1%， with the RSD less than 5%（n=6）. [Conclusion]The proposed method is accurate and sensitive， it can increase the sampling amount， improve LODs of sample. It can be used for determination of selenium in high oil nuts.

Key words Ultrahigh pressure microwaveassisted;ICPMS;Nuts;Selenium

硒是生態(tài)環(huán)境中重要的微量元素，也是人和動(dòng)植物體內(nèi)生理必需的微量元素之一[1-2]，其豐缺與人和動(dòng)植物的健康有著密切關(guān)系[3]。人體內(nèi)硒含量為14～20 mg，主要分布在肝、肺、皮膚、腎等部位，其中的1/3存在于肌肉尤其是心肌中[4]。硒能夠以低分子量化合物（包括游離Se 2+）和高分子量化合物形式存在于生物體內(nèi)[5]，在人體中參與多種免疫與生物學(xué)功能，對人類健康的巨大作用是其他物質(zhì)無法替代的。食物是人體攝入硒的主要來源[6]。研究表明，中國72%地區(qū)屬于缺硒、低硒帶，硒膳食攝入量不足嚴(yán)重影響著幾億人口的身體健康[7]。隨著生活水平的提高，富硒食品走入千家萬戶，人們對硒的攝入補(bǔ)充越來越重視[8]，關(guān)于硒的營養(yǎng)水平也成為研究的熱點(diǎn)，楊光圻[9]系統(tǒng)地研究了人體硒需要量及最低和最高安全攝入量范圍。因此，為了更好地指導(dǎo)人們通過合理健康膳食攝入硒元素，準(zhǔn)確測定食品中硒含量具有重要的意義。

堅(jiān)果作為人類喜愛食物之一，其本身含有豐富的營養(yǎng)元素，硒就是其中之一。但是由于堅(jiān)果本身含有大量的油脂，油脂在消解時(shí)產(chǎn)生大量的氣體，從而增大消解罐的壓力，限制了樣品的取樣量，降低了樣品的代表性，影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此，樣品前處理方法是準(zhǔn)確測定堅(jiān)果中痕量硒元素的關(guān)鍵。目前常用的前處理方法有干灰化法[10]和微波輔助消化法[11-14]，干灰化法操作步驟繁瑣、耗時(shí)較長，且回收率不高;微波輔助消化法雖然操作簡單、耗時(shí)較短，也能解決回收率不高的問題，但是在處理高油脂含量樣品時(shí)，由于微波消解儀能承受的消解壓力一般不能超過6 000 kPa，因此在處理油脂含量高的樣品取樣量上受到了極大的限制，一般取樣量不能超過0.2 g，從而不能準(zhǔn)確地測定出堅(jiān)果中硒元素的含量。超高壓微波消解系統(tǒng)可以承受的消解壓力可達(dá)12 000 kPa[15-16]，能有效解決普通微波輔助消化法取樣量小、代表性不夠的問題。該研究采用超高壓微波消解前處理方法，結(jié)合電感耦合等離子體質(zhì)譜測定堅(jiān)果食品中硒含量，可以大幅度提高方法的檢出限，滿足堅(jiān)果食品中痕量硒元素的測定要求。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

超高壓微波消解儀，Easyprep TM（最高壓力8 000 kPa），美國CEM公司;微波消解儀，Xpress TM（最高壓力5 000 kPa），美國CEM公司;ICP-MS，Nexion 300D，美國PE公司;電子天平，AL204，瑞士Mettler Toledo公司;硝酸，優(yōu)級純，69%，德國默克公司;雙氧水，優(yōu)級純，30%，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;硒（Se）標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 mg/mL），中國計(jì)量科學(xué)研究院。

1.2 ICP-MS儀器條件

采用1 μg/L質(zhì)譜調(diào)諧液（含有Be、Mg、 In、Ce、Pb、U）對儀器進(jìn)行調(diào)諧優(yōu)化，儀器靈敏度In≥ 40 000 cps/ppb，氧化物CeO/Ce≤2.5%，雙電荷Ce ++/Ce≤ 3%。為了去除質(zhì)譜干擾得到較高的靈敏度，滿足堅(jiān)果中硒元素的測定要求，該試驗(yàn)選擇80Se質(zhì)量數(shù)，在動(dòng)態(tài)反應(yīng)池（DRC）條件下，采用甲烷（CH4）作為反應(yīng)氣來消除80Ar +的干擾。試驗(yàn)采用5%硝酸溶液配制10 μg/L硒元素標(biāo)準(zhǔn)溶液對儀器進(jìn)行優(yōu)化，通過優(yōu)化后得出：CH4流量為0.8 mL/min，RPq電壓為0.7 V時(shí)硒元素的信號最強(qiáng)，背景濃度最低，具體參數(shù)設(shè)置見表1。

1.3 樣品前處理

1.3.1 超高壓微波消解樣品前處理。稱取0.5 g樣品于聚四氟乙烯微波消解管中，分別加入濃硝酸（3、4、5和6 mL）和30%雙氧水（0、1和2 mL），放進(jìn)Easyprep TM微波消解儀中，以表2升溫程序進(jìn)行消解，消解完成后，待消解管冷卻到60 ℃以下，取出消解管，在180 ℃溫度下進(jìn)行趕酸，待消解液小于0.5 mL后，將消解液轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶，用1%的硝酸溶液定容至25 mL。

1.3.2 微波消解樣品前處理。稱取0.2 g樣品于聚四氟乙烯微波消解管中，分別加入濃硝酸5 mL和30%雙氧水2 mL，放進(jìn)Xpress TM微波消解儀中，以表3升溫程序進(jìn)行消解，消解完成后，待消解管冷卻到60 ℃以下，取出消解管，在180 ℃溫度下進(jìn)行趕酸，待消解液小于0.5 mL后，將消解液轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶，用1%的硝酸溶液定容至25 mL。

2 結(jié)果與分析

2.1 超高壓微波消解前處理中酸和雙氧水比例優(yōu)化

一般而言，樣品在足量的濃硝酸和雙氧水作用下都會完全消解，但是過量的酸和雙氧水加入會引起樣品在消解過程中炭化，影響消解效率和檢測儀器的靈敏度，此外，加入過量的酸和雙氧水會造成浪費(fèi)。該試驗(yàn)對濃硝酸和雙氧水的加入比例進(jìn)行優(yōu)化，以濃硝酸加入體積（A：3、4、5和6 mL）和雙氧水加入體積（B：0、1和2 mL）做雙因素正交試驗(yàn)優(yōu)化，結(jié)果表明加入4 mL濃硝酸和2 mL雙氧水作為氧化劑的情況下，消解效率最好，既不會造成樣品消解過程中炭化的情況，影響ICP-MS的檢測靈敏度，又可以達(dá)到樣品完全消解的目的，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

2.2 方法學(xué)評價(jià)

2.2.1 線性范圍和檢出限。

用1%硝酸溶液配制硒元素系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在表1所列的儀器參數(shù)條件下測定，在0.1～10.0 μg/L呈良好的線性關(guān)系（R 2=0.999）。按照3倍空白樣品連續(xù)測定10次的濃度的標(biāo)準(zhǔn)偏差，乘以定容體積，除以稱樣量得出方法檢出限（LOD）為0.4 μg/kg，方法定量限（LOQ）按照3倍方法檢出限計(jì)算，得出該方法的定量限為1 μg/kg。從表4可以看出，采用超高壓微波消解前處理方式，方法的檢出限比普通微波消解前處理方式降低了2.5倍，能夠更準(zhǔn)確地測定出堅(jiān)果食品中痕量的硒含量。

2.2.2 方法回收率和精密度。

選擇硒含量低于1 μg/kg的樣品分別進(jìn)行5、10和50 μg/kg 3種添加水平時(shí)，方法的回收率為93.2%～108.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于5%（n=6），具體結(jié)果見表5。從表5可以看出，采用超高壓微波消解前處理方式，加標(biāo)回收率更好，且具有更好的精密度。

2.3 實(shí)際樣品檢測

應(yīng)用所建立的方法對市場上購買的花生、瓜子、松子、核桃、山核桃、南瓜子和鮑魚果等堅(jiān)果食品共57批次進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)有56批次樣品中均檢出硒，說明堅(jiān)果食品中含有豐富的硒營養(yǎng)元素。樣品中硒元素含量為ND～1.680 mg/kg，不同類別的堅(jiān)果食品中硒元素含量差異較大，其中鮑魚果和南瓜子中硒元素含量較高，而瓜子、核桃和松子等堅(jiān)果中硒元素相對低一些，具體檢測結(jié)果見表6。

3 結(jié)論與討論

該研究采用超高壓微波消解樣品前處理，結(jié)合電感耦合等離子體質(zhì)譜，可以解決一般微波消解前處理過程中油脂含量高的堅(jiān)果樣品稱樣量小、代表性不夠的問題。通過超高壓微波消解-電感耦合等離子體質(zhì)譜法可以增大高油脂含量堅(jiān)果樣品的稱樣量，提高方法的檢出限及精密度，具有較好的回收率，方法在0.1～10.0 μg/L線性關(guān)系良好（R 2=0.999），方法檢出限為0.4 μg/kg，在5、10、50 μg/kg添標(biāo)水平下，回收率為93.2%～108.1%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）均小于5%（n=6）。該方法操作簡便、快速準(zhǔn)確，適用于高油脂樣品中硒含量的定量分析。

通過實(shí)際樣品檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，堅(jiān)果食品中含有豐富的硒營養(yǎng)元素，可以有效地增加人體膳食攝入硒元素的含量，有利于人體健康。該研究方法可以準(zhǔn)確地測定出堅(jiān)果食品中硒元素的含量，為人們合理選擇食品補(bǔ)充人體必需的硒元素提供重要的參考依據(jù)。

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