金菊 丁小文 喬恩奇 張喜平*

目前，我國已成為乳腺癌發(fā)病率增長最快的國家之一［1］。美國癌癥統(tǒng)計研究報告，乳腺癌的發(fā)病率在女性惡性腫瘤中位居榜首［2］。乳腺癌的侵襲和轉移是一個由多因素調(diào)控的復雜、動態(tài)過程，但其作用機制尚不清楚?；|相互作用分子1（stim1）是一種鈣離子感受器，其可以刺激并激活Orai1分子，引起細胞外鈣離子流入，并且進一步誘發(fā)相應的細胞活動。stim1作為鈣離子調(diào)節(jié)感受器，對癌細胞的增殖、浸潤、轉移具有一定程度的促進作用，其與腫瘤細胞的侵襲、轉移具有直接關系。由于不同的乳腺癌亞型的分子調(diào)節(jié)機制有所不同，作者推測stim1在不同亞型乳腺癌中的表達量也會有所區(qū)別。本文通過分析不同分子亞型無淋巴結轉移的乳腺癌組織中stim1表達水平，探討其在乳腺癌中的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗試劑 stim1抗體購置于Thermo Fisher公司（美國，貨號CDN3H4），Western blot檢測試劑盒（貨號KGP1201）、全蛋白抽提試劑盒（KGA902）、SDSPAGE凝膠配制試劑盒（KGP113）購自江蘇凱基生物技術開發(fā)有限公司。

1.2 樣本來源 選擇2012年8月至2013年8本院腫瘤生物樣本庫中保存的經(jīng)手術當天取材的無淋巴結轉移的三陰性、Her-2陽性、Luminal A型、Luminal B型乳腺癌組織各5例。其中Luminal B型中ER（陽性）、PR（陽性）、Ki 67高表達 2例、ER（陽性）、PR（陽性）、Her-2（陽性）3例。所有患者年齡33～68歲，平均50.3歲；上述患者均通過病理學檢測診斷為乳腺浸潤性導管癌，術前未進行放化療及內(nèi)分泌治療。所有患者均實施相應的乳腺癌改良或保乳根治術，收集了上述患者的乳腺癌腫瘤組織樣本，并放置于樣本庫中低溫保存，術后隨訪時間截止到2018年12月底?？偵妫∣S）指隨訪截止日期的時間或隨訪中出現(xiàn)死亡的時間；無復發(fā)生存（RFS）指隨訪中出現(xiàn)首次復發(fā)轉移的時間。

1.3 方法 采用Western blot檢測stim1在不同分子亞型乳腺癌組織中的表達水平，實驗方法如下：配制細胞裂解液、將制備的蛋白樣品與上樣緩沖液混合，并在100℃處理5min，每孔加載100μg細胞總蛋白，進行電泳、轉膜、封閉，接著進行一抗雜交、洗膜和二抗雜交和顯影。

1.4 統(tǒng)計學方法 各組樣本stim1蛋白表達灰度分析采用單因素方差分析（one-way ANOVA），使用COX回歸分析，納入腫瘤的最大直徑、不同分子亞型、病理分期和stim1蛋白表達量為變量，分析這4個變量對患者OS和RFS的影響。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

Stim1蛋白表達水平在三陰性乳腺癌組織中最高，Her-2陽性乳腺癌組織其次，Luminal A型乳腺癌組織最弱。與三陰性乳腺癌患者樣本相比，Her-2陽性乳腺癌組織中stim1蛋白表達有所降低，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；Luminal A型患者乳腺癌組織與Luminal B型患者乳腺癌組織中stim1蛋白表達顯著降低（P＜0.01）。與Her-2陽性乳腺癌組織相比，Luminal A型與Luminal B型乳腺癌組織stim1蛋白表達顯著降低（P＜0.01）。與Luminal A型乳腺癌組織相比，Luminal B型乳腺癌組織stim1蛋白表達雖然略有增加，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。不同分子亞型乳腺癌組織中腫瘤的最大直徑、病理分期和stim1蛋白表達量與OS和RFS無關，各指標差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表 1，圖 1、2。

表1 不同分子亞型乳腺癌組織stim1表達水平

圖1 各組樣本stim1蛋白表達條帶圖

圖2 各組樣本stim1蛋白表達灰度分析

3 討論

鈣離子（Ca2+）調(diào)節(jié)不平衡可誘發(fā)乳腺癌，促進乳腺癌的進展。stim1/Orai1在雌激素受體陰性（ERα-）的人乳腺癌細胞系MDA-MB-231中，對于SOCs和細胞遷移很重要。Orai3在雌激素受體陽性（ERα+）的人乳腺癌細胞MCF-7中，表達顯著增加，stim1和Orai3對SOCs的調(diào)控起主導作用。因此，stim1與Orai相互作用與乳腺癌細胞分型直接相關。內(nèi)質網(wǎng)中Ca2+的減少導致stim1易位到質膜下點狀突起，并激活Orai 1通道。ERα+乳腺癌細胞系中的SOCE由stim1/2和Orai3介導，而ERα-乳腺癌細胞則是經(jīng)典的stim1/Orai1途徑［3］。已發(fā)現(xiàn)stim1和Orai1在乳腺腫瘤細胞遷移和轉移起重要作用，Stims和Orais有望成為癌癥治療的新靶點。

已發(fā)現(xiàn)stim和orai蛋白在較多惡性腫瘤的發(fā)展和轉移中起著至關重要的作用，例如乳腺癌、前列腺癌等［4］。在多形性腦膠質母細胞瘤中，stim1和Orai1的下調(diào)導致入侵的腫瘤細胞顯著減少。相比之下，敲除stim1和Orai1基因對腦多形性膠質母細胞瘤細胞增殖幾乎無影響。這些結果表明，stim1和Orai1編碼SOCE和CRAC電流，并控制腦多形性膠質母細胞瘤細胞的侵襲［5］。一些研究人員發(fā)現(xiàn)肝細胞癌細胞系stim1表達升高，其在肝癌組織中的表達水平高于癌旁組織。有研究者提出stim1可作為檢測肝癌高轉移潛能的預后指標，stim1具有作為轉移性肝癌新的分子靶點的治療潛力［6］。

本資料顯示，stim1蛋白表達水平在三陰性乳腺癌組織中最高，Her-2陽性乳腺癌次之，Luminal A型則最弱。Luminal A型與Luminal B型乳腺癌組織stim1蛋白表達水平明顯低于三陰性乳腺癌和Her-2陽性乳腺癌，而三陰性和Her-2陽性型乳腺癌又是預后最差的腫瘤。因此，作者認為stim1的表達水平與乳腺癌惡性程度有關，其在乳腺癌發(fā)病機制中的作用有待進一步闡明。