陳興邦 ，陳冉 ，邵俊杰 ，蔣先金 ，張美琴 ，萬金娟

（1.宿遷益佰飼料有限公司，江蘇 宿遷 223800；2.江蘇省淡水水產(chǎn)研究所，江蘇 南京 210017）

中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis），俗稱河蟹，是我國重要的養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)蟹類,在我國水產(chǎn)業(yè)中占據(jù)十分重要的地位[1]。統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示,至2017年,我國中國中華絨螯蟹的總產(chǎn)量已達(dá)到750 945 t，占蟹類總產(chǎn)量的75%左右[2]。在河蟹飼料中，魚粉用量通常達(dá)30%～40%，是蟹飼料成本中最大的組成部分。近年來，魚粉資源越來越匱乏，魚粉的價格逐年上漲,且我國優(yōu)質(zhì)魚粉主要依賴進(jìn)口，極大的限制了河蟹配合飼料和河蟹養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，也使得植物性蛋白替代魚粉的研究成為一個熱點問題[3-5]。其中，豆粕因其蛋白含量高、價格相對低廉，被廣泛用來作為替代魚粉的飼料蛋白源[6-7]。而目前，大豆價格僅為豆粕的60%左右，且在宿遷地區(qū)，大豆產(chǎn)量豐富，就地取材便捷；因此用大豆替代一部分豆粕，不但可以緩解豆粕資源緊缺,還可以降低飼料成本。關(guān)于中華絨螯蟹飼料蛋白源的研究，國內(nèi)外已有一些報道[8-9]，但尚未見大豆作為主要蛋白源對蟹的生長及免疫影響的相關(guān)研究。因此，該研究旨在考察不同比例大豆替代豆粕飼喂中華絨螯蟹幼蟹對其生長性能、消化酶活性和抗氧化能力的影響，以期為高性價比河蟹幼蟹飼料提供參考依據(jù)。

1 材料與制作

1.1 試驗飼料

該試驗共設(shè)4個組，即對照組（基礎(chǔ)飼料，D0），分別以大豆替代基礎(chǔ)飼料中40%、60%、80%豆粕的試驗組（D1、D2、D3），試驗飼料組成及營養(yǎng)水平見表1。飼料原料經(jīng)過粉碎80目篩，經(jīng)2次混合、制粒、熟化冷卻等工序，顆粒風(fēng)干冷卻后過篩，貯存?zhèn)溆谩?/p>

表1 飼料配方組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)/%）

1.2 試驗用蟹及飼養(yǎng)管理

試驗用的河蟹蟹苗購自江蘇省南通市，蟹苗在試驗的養(yǎng)殖環(huán)境條件下暫養(yǎng)1周，然后選擇附肢完整、健康無患病并處于脫皮期間的蟹苗2 000尾[平均體質(zhì)量為（5.34±0.19）g]進(jìn)行養(yǎng)殖試驗，隨機(jī)分為4組。養(yǎng)殖塘口為12個，面積為10×667 m2。每天的投喂量根據(jù)蟹苗體質(zhì)量5%，按實際攝食情況進(jìn)行調(diào)整。每天分2次投喂，時間為07：00和17：00，飼養(yǎng)周期為5個月。

1.3 生長性能測定

養(yǎng)殖試驗結(jié)束后，測定河蟹的增重率和存活率，按以下公式進(jìn)行計算：

增重率（%）=100×（Wt-W0）/W0；

飼料系數(shù)=（Wt-W0）/F；

存活率（%）=100×Nt/N0。

式中，W0為平均初始體質(zhì)量，W為平均終末體質(zhì)量，F(xiàn)為飼料投喂量，N0為初始尾數(shù)，Nt為終末尾數(shù)。

1.4 樣品采集與測定

河蟹進(jìn)行計數(shù)并稱重后，每個塘口隨機(jī)挑選3只蟹，取其肝胰腺，用生理鹽水（0.85%NaCl）沖洗干凈并用濾紙擦去水分，然后加入9倍體積的同濃度生理鹽水，在冰浴中進(jìn)行勻漿（工作時間5 s，間歇時間5 s，共反復(fù)3次），以10 000 r/min離心10 min，取上清液待測。肝胰腺的胰蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶以及總抗氧化能力、超氧化物歧化酶、過氧化氫酶。肝胰腺各指標(biāo)水平均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測定。

1.5 統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0統(tǒng)計軟件，對數(shù)據(jù)作單因素方差分析，若組間差異具統(tǒng)計學(xué)意義，則做ANOVA多重比較，不同的小寫字母表示各組之間比較差異具統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；試驗結(jié)果顯示為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SE）。

2 結(jié)果

2.1 大豆替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹生長性能的影響

經(jīng)過5個月養(yǎng)殖，各組蟹的增重率、成活率及飼料系數(shù)見表2。從表2中可見，試驗結(jié)束時，各組幼蟹的生長性能指標(biāo)十分接近，差異均不具統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。隨著大豆替代豆粕的比例提高，幼蟹的末體質(zhì)量、增重率和成活率呈上升趨勢，飼料系數(shù)呈下降趨勢。

2.2 大豆替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺消化酶活性的影響

飼料中大豆替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺消化酶活性的影響見表3。由表3可知，隨著飼料中大豆替代豆粕的比例增高，蟹肝胰腺胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶水平呈降低趨勢。其中，60%和80%組胰蛋白酶水平顯著低于豆粕組；40%、60%和80%組脂肪酶和淀粉酶水平均顯著低于豆粕組（P＜0.05）。

表2 大豆替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹生長性能的影響

表3 大豆替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺消化酶活性的影響

2.3 大豆替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺抗氧化活力的影響

飼料中大豆替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺抗氧化活力的影響見表4，由表4可知，各組蟹肝胰腺中超氧化物歧化酶、過氧化氫酶及總抗氧化活力的水平均差異不具統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

表4 大豆替代豆粕對中華絨螯蟹幼蟹肝胰腺抗氧化活力的影響

3 討論

近年來，大豆雖然可以作為水產(chǎn)動物的優(yōu)質(zhì)蛋白源，但因其所含的大豆蛋白酶抑制因子、凝集素和植酸等抗?fàn)I養(yǎng)因子對機(jī)體有一定的影響[10]，未能在水產(chǎn)飼料中得到很好地利用。但隨著豆粕資源供應(yīng)日趨緊張、價格逐年上升，大豆這一當(dāng)?shù)毓?yīng)量大，價格低廉的蛋白源逐漸受到當(dāng)?shù)仫暳掀髽I(yè)的關(guān)注。該試驗結(jié)果顯示，在飼料蛋白、脂肪水平相近的情況下，用大豆替代40%～80%的豆粕，河蟹的生長、對飼料的利用情況及存活率未受影響。由于目前尚未見關(guān)于大豆替代豆粕對其他水生動物生長影響的報道，其具體影響機(jī)制有待進(jìn)一步研究。

研究表明，影響甲殼動物消化酶活性的因素可分為兩類，一類是內(nèi)在因素，例如蛻皮周期和生長發(fā)育期等[7-8]，一類是外在因素，例如溫度和餌料等[11-12]。其中，餌料是影響甲殼動物消化酶活性的關(guān)鍵因素，可以作為機(jī)體對營養(yǎng)物質(zhì)消化利用的重要指標(biāo)[13]。江洪波等[14]研究了餌料蛋白質(zhì)對中華絨螯蟹仔蟹消化酶活性的影響，其研究結(jié)果指出蟹胰蛋白酶活性與飼料中蛋白質(zhì)水平呈一定的正相關(guān)，而淀粉酶則受到飼料蛋白質(zhì)的抑制。該試驗中，各組飼料蛋白質(zhì)水平相近，但隨著飼料中大豆替代豆粕水平的增加，蟹肝胰腺胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶水平均呈降低趨勢（P＜0.05）；表明大豆替代豆粕對肝胰腺造成了一定的損傷，這可能是由于大豆中所含的大豆蛋白酶抑制因子、凝集素和植酸等抗?fàn)I養(yǎng)因子對機(jī)體造成了影響。

甲殼動物的抗氧化防御系統(tǒng)由酶促和非酶促兩個體系組成，其中酶促體系包括超氧化物歧化酶、過氧化氫酶等抗氧化酶，它們可在不同水平上清除體內(nèi)多余的自由基，恢復(fù)機(jī)體正常的細(xì)胞代謝和功能；非酶促體系包括維生素、氨基酸、金屬蛋白等，這兩個體系在機(jī)體內(nèi)相互協(xié)作，使機(jī)體免受自由基的侵害[15-17]。在該研究結(jié)果表明，各組蟹肝胰腺中超氧化物歧化酶、過氧化氫酶及總抗氧化活力的水平差異均不具統(tǒng)計學(xué)意義，表明大豆與豆粕在抗氧化能力無統(tǒng)計學(xué)意義差異。

綜上所述，用大豆替代40%～80%的豆粕，對中華絨螯蟹的生長、飼料利用率、存活率以及抗氧化能力無顯著影響，但對機(jī)體消化酶有一定的負(fù)面影響，在具體替代過程中應(yīng)綜合考慮，酌情添加。