張林堯，孟祥龍，王午可，任紅敏，胡同樂，曹克強

(1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院，河北 保定 071000； 2.中華人民共和國保定海關(guān)，河北 保定 071000)

蘋果輪紋病(Apple ring rot)，又稱白腐病(Apple white rot)，是蘋果枝干和果實常見病害之一，由蘋果輪紋病菌(Botryosphaeriadothidea)引起，該病害在世界范圍內(nèi)廣泛分布[1-5]。近年來，我國的山東省、陜西省、河北省、遼寧省等都發(fā)生了嚴(yán)重的蘋果輪紋病，河南省與山東省的蘋果枝干輪紋病發(fā)病率甚至達(dá)到95%以上，給當(dāng)?shù)氐奶O果產(chǎn)業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟損失[6]。蘋果枝干輪紋病主要導(dǎo)致枝干粗皮或者干枯，嚴(yán)重時造成樹勢衰弱，果實發(fā)病、腐爛，喪失其商業(yè)價值[7]。

1 材料和方法

1.1 供試菌株

供試菌株為蘋果輪紋病菌XCFS2-1，由河北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病害流行與綜合防治研究室提供。

1.2 供試果園及蘋果品種

試驗在5個不同的果園進(jìn)行，果園及樹體相關(guān)信息如表1所示。

表1 試驗果園及果樹種植情況Tab.1 Test orchards and fruit trees planting

1.3 供試藥劑

試驗所用生物菌劑LZ-1及其他化學(xué)藥劑相關(guān)信息如表2所示。

1.4 藥劑的田間防治效果試驗

在藥劑的田間防效試驗中，分別選取蘋果樹枝條和主干進(jìn)行了田間防治效果研究。

表2 研究所用藥劑Tab.2 The fungicides used in the experiments

2016年3月15日，在4號和5號果園各隨機選取10個發(fā)病較輕的枝條，其中5個枝條涂抹生物菌劑LZ-1，剩余5個枝條涂抹清水作為空白對照(CK)。將生物菌劑LZ-1按照推薦稀釋倍數(shù)對水，攪拌均勻，靜置0.5 h之后，用刷子均勻涂抹在所選擇的枝條上。

2016年5月10日，在2號果園隨機選取20棵發(fā)病程度中等的蘋果樹，其中10棵果樹主干涂抹甲基硫菌靈涂劑，剩余10棵果樹主干涂抹清水，作為空白對照(CK)。

近日，針對近期部分城市房地產(chǎn)市場出現(xiàn)過熱苗頭，投機炒作有所抬頭等情況，住建部印發(fā)《住房城鄉(xiāng)建設(shè)部關(guān)于進(jìn)一步做好房地產(chǎn)市場調(diào)控工作有關(guān)問題的通知》，重申堅持房地產(chǎn)調(diào)控目標(biāo)不動搖、力度不放松，并對進(jìn)一步做好房地產(chǎn)調(diào)控工作提出明確要求：一是加快制定實施住房發(fā)展規(guī)劃；二是抓緊調(diào)整住房和用地供應(yīng)結(jié)構(gòu)；三是切實加強資金管控；四是大力整頓規(guī)范市場秩序；五是加強輿論引導(dǎo)和預(yù)期管理；六是進(jìn)一步落實地方調(diào)控主體責(zé)任。

2016年6月8日在3號果園中隨機選取12棵發(fā)病較輕的蘋果樹，其中4棵果樹主干涂抹生物菌劑LZ-1，4棵果樹主干涂抹甲基硫菌靈涂劑，其余4棵果樹主干涂抹清水作為空白對照(CK)。上述甲基硫菌靈涂劑前期處理和涂抹方法同生物菌劑LZ-1。

在上述試驗進(jìn)行過程中，均在涂抹藥劑之前和涂抹藥劑6個月后分別進(jìn)行病害調(diào)查，統(tǒng)計每棵果樹的涂藥區(qū)域和空白對照區(qū)域的病瘤數(shù)、涂藥區(qū)域長度、枝條或主干直徑。

根據(jù)以下公式計算各區(qū)域病瘤增長率(P)和藥劑的防治效果：

P=(D2-D1)/D1×100%

其中，D1表示處理前單位面積病瘤數(shù)，D2表示處理后單位面積病瘤數(shù)。

防治效果=(P1-P2)/P1×100%

其中，P1表示空白對照區(qū)域病瘤增長率，P2表示藥劑處理區(qū)域病瘤增長率。

1.5 藥劑的施用關(guān)鍵時期篩選

分別于2015年3月20日、4月15日、5月18日，在2號果園進(jìn)行生物菌劑LZ-1施用關(guān)鍵時期篩選試驗，2016年3月進(jìn)行病害調(diào)查。每次試驗需選取蘋果枝干輪紋病發(fā)病程度中等、病瘤分布均勻的富士蘋果樹，將蘋果樹的主干由上而下分成4個區(qū)域，每個區(qū)域長度為15 cm，分別編號為1、2、3、4。測量每個區(qū)域的面積，記錄區(qū)域病瘤數(shù)量，計算樹皮表面單位面積病瘤數(shù)。將生物菌劑LZ-1按照推薦稀釋倍數(shù)對水，攪拌均勻，靜置0.5 h后，用刷子均勻涂抹于編號2和編號4區(qū)域表面，編號1和編號3不進(jìn)行任何處理，作為空白對照(CK)。每個處理隨機選取6棵樹作為6次重復(fù)。病害調(diào)查時統(tǒng)計每棵樹的涂藥區(qū)域和空白對照區(qū)域的病瘤數(shù)、主干直徑，以篩選生物菌劑LZ-1的施用關(guān)鍵時期，計算公式同1.4。

1.6 藥劑在蘋果樹枝條和主干上的附著期檢測

2015年5月4日，在1號果園選取1～6年生的枝條各6個，分別使用生物菌劑LZ-1和甲基硫菌靈涂劑對選取的枝條進(jìn)行處理。藥劑的前期處理同1.4，處理時用刷子將藥劑均勻涂抹在枝條上。涂藥之前測量涂藥區(qū)域的長度、枝條直徑。涂藥40、50、60、90 d后，測量脫落面積，用帶有方格的透明紙裹住枝條，用筆圈出脫落區(qū)域。

2016年5月8日，在3號果園隨機選取10棵蘋果樹，分別使用生物菌劑LZ-1和甲基硫菌靈涂劑對選取的果樹主干進(jìn)行處理。藥劑的前期處理同1.4，處理時用刷子將藥劑均勻涂抹在主干上。涂藥之前測量涂藥區(qū)域的長度、主干直徑，6個月以后，測量脫落面積，用帶有方格的透明紙裹住主干，用筆圈出脫落區(qū)域。

用相機拍攝方格紙，將圖片傳入CAD軟件測量藥斑脫落面積，根據(jù)以下公式計算藥劑在枝條或主干的附著率：

附著率=(S1-S2)/S1×100%

其中，S1表示涂抹藥斑總面積，S2表示藥斑脫落面積。

1.7 藥劑持效期檢測

2016年5月14日至2016年9月4日，在1號果園每隔10 d隨機選取3個枝條涂抹生物菌劑LZ-1和甲基硫菌靈涂劑。2017年3月15日收集所有處理枝條，刮取長度為1 cm左右的帶藥斑的枝條，置于玻片上，滴60 μL濃度為1×106個/mL的蘋果輪紋病菌孢懸液。將玻片置于培養(yǎng)皿中，保濕處理后放入25 ℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)12 h。觀察并記錄孢子萌發(fā)數(shù)量，每個時期設(shè)置3次重復(fù)。

根據(jù)以下公式計算孢子萌發(fā)率(A)和孢子萌發(fā)抑制率：

A=B2/B1×100%

其中，B1表示孢子總數(shù)量，B2表示孢子萌發(fā)數(shù)量。

孢子萌發(fā)抑制率=(A1-A2)/A1×100%

其中，A1表示空白對照的孢子萌發(fā)率，A2表示處理枝條的孢子萌發(fā)率。

1.8 數(shù)據(jù)處理

使用 Microsoft Excel 軟件進(jìn)行原始數(shù)據(jù)處理，使用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，采用LSD法進(jìn)行差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同藥劑的田間防治效果

每個果園進(jìn)行處理之前，空白對照區(qū)域與藥劑處理區(qū)域單位面積病瘤數(shù)目無顯著差異。由表3可知，涂抹藥劑6個月以后，生物菌劑LZ-1在3、4、5號果園的防治效果分別為89.93%、53.93%、79.38%，其中，4號果園的藥劑防效略低于另外2個果園。涂抹藥劑6個月以后，甲基硫菌靈涂劑在2、3號果園防治效果分別為64.63%、85.77%，其中，3號果園的防治效果較好。

表3 2種藥劑對蘋果枝干輪紋病的防效Tab.3 Effect of using two kinds of agents against apple ring rot on branches and trunks

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示同一果園內(nèi)不同處理間差異顯著(P<0.05)。

Notes: Different lowercase letters in the same column indicate significant differences between different treatments in the same orchard (P<0.05).

2.2 生物菌劑LZ-1防治蘋果枝干輪紋病的施用關(guān)鍵期

2016年3月30日對2015年所做的生物菌劑LZ-1施用關(guān)鍵時期篩選試驗進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果見表4。2015年3月20日、4月15日和5月18日進(jìn)行生物菌劑LZ-1處理后，主干病瘤增長率分別為68.45%、47.61%、55.45%，而清水對照的蘋果樹主干病瘤增長率為174.98%，顯著高于生物菌劑LZ-1處理的主干病瘤增長率。從防治效果來看，3、4、5月涂抹生物菌劑LZ-1對蘋果枝干輪紋病的防治效果均在60%以上，但無顯著差異。

表4 生物菌劑LZ-1不同施用時期對蘋果枝干輪紋病的防治效果

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示不同施藥時期差異顯著(P<0.05)。

Notes: Different lowercase letters in the same column indicate significant differences during different application periods (P<0.05).

2.3 藥劑在蘋果樹枝條的有效附著率

藥劑在蘋果樹枝條上的附著率檢測結(jié)果見表5。涂抹生物菌劑LZ-1 60 d后，不同年生枝條的藥劑附著率都可以達(dá)到89%以上，而涂抹90 d之后不同年生枝條藥劑附著率均顯著下降，且2、3、4年生的枝條藥劑附著率均低于50%，認(rèn)為生物菌劑LZ-1在枝條上的有效附著期為60 d。涂抹甲基硫菌靈涂劑90 d后，除6年生枝條外，其他年生枝條的藥劑附著率都達(dá)到88%以上，表明甲基硫菌靈涂劑在枝條上的有效附著期可以達(dá)到90 d。

表5 2種藥劑在蘋果樹不同年生枝條上的附著率

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示同一藥劑處理同年生枝條不同涂抹天數(shù)間差異顯著(P<0.05)。

Notes: Different lowercase letters in the same row indicate that the same drug treatment has significant differences between different time with the same agent after smearing for different days combinations (P<0.05).

2.4 藥劑在蘋果樹主干的附著率

使用生物菌劑LZ-1和甲基硫菌靈涂劑對3號果園蘋果樹主干進(jìn)行表面涂抹試驗，調(diào)查結(jié)果(表6)表明，涂抹甲基硫菌靈涂劑6個月以后其附著率為98.63%，而涂布生物菌劑LZ-1 6個月以后其附著率為74.11%，生物菌劑LZ-1的附著率顯著低于甲基硫菌靈涂劑的附著率。

2.5 藥劑的持效期

涂抹生物菌劑LZ-1和甲基硫菌靈涂劑190 d后對藥斑抑制孢子萌發(fā)能力檢測的結(jié)果(表7)表明，使用生物菌劑LZ-1涂抹190～300 d，其藥斑中的有效成分對病菌孢子萌發(fā)的抑制率隨時間的延長而逐漸降低，從42.91%降低至6.07%。涂抹甲基硫菌靈涂劑190～300 d，其藥斑對病菌孢子萌發(fā)的抑制率隨時間的延長而逐漸降低，從46.86%降低至2.93%。

表6 2種藥劑施用6個月后在蘋果樹主干上的附著率

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示不同處理間差異顯著(P<0.05)。

Notes: Different lowercase letters in the same column indicate significant differences between different treatments (P<0.05).

表7 涂抹不同時間2種藥劑對蘋果枝干輪紋病菌孢子萌發(fā)能力的影響

注：同列數(shù)據(jù)后不同小寫字母表示同一藥劑處理不同天數(shù)差異顯著(P<0.05)。

Notes: Different lowercase letters in the same column indicate that the difference among application days of the same fungicide treatment is significant (P<0.05).

3 結(jié)論與討論

蘋果輪紋病菌通常可以深入至枝干的韌皮部，常規(guī)藥劑處理難以有效接觸病原菌，因此，很多在室內(nèi)試驗毒力較高的藥劑在田間對其卻難以達(dá)到有效的防治效果。本研究采取田間試驗的方法，在不同的果園對自主研發(fā)的生物菌劑LZ-1進(jìn)行了田間防效的研究。結(jié)果表明，生物菌劑LZ-1與對照甲基硫菌靈涂劑相比，防效最高可達(dá)89.93%。王彥榮等[13]的研究表明，戊唑醇、苯醚甲環(huán)唑等化學(xué)藥劑是目前市面上防治蘋果枝干輪紋病最有效的藥劑，其田間防效分別為50.2%、48.2%。相比來說，本研究的防效較高，主要是藥劑劑型不同所致，生物菌劑和甲基硫菌靈涂劑在植物表明均能形成一層較厚的白色藥膜，藥在膜里面持效期較長，且該膜對蘋果輪紋病菌的再侵染表現(xiàn)出較強的保護(hù)性抑制作用。雖然生物菌劑LZ-1與甲基硫菌靈涂劑具有相同的抑菌效果，但是由于LZ-1是生物涂干劑，從環(huán)境保護(hù)的角度來說，其具有更廣闊的應(yīng)用前景。

藥劑的田間防效與施藥時期有密切關(guān)系。本研究表明，在3—5月涂施生物菌劑LZ-1，對已發(fā)生輪紋病的蘋果樹都具有良好的防效。其中，3月份施藥的防效略低，這是由于在2016年3月份施藥之后有1次降雨，導(dǎo)致藥劑被雨水沖刷，造成藥劑附著率下降所致，因此，認(rèn)為3—5月是藥劑涂抹的關(guān)鍵時期。進(jìn)行藥劑涂抹時，應(yīng)注意避開陰雨天氣，避免藥斑在沒有成膜的情況下被雨水沖刷而脫落。蘋果輪紋病菌在田間形成大量分生孢子的時間是6月份，在6月之前對樹體涂藥能夠起到很好的保護(hù)作用。

生物菌劑LZ-1在蘋果枝條上施用后，60 d之內(nèi)涂抹的藥劑可以有效附著，超過60 d后藥劑在枝條上的附著率明顯降低。這是因為枝條橫向生長更容易受雨水沖刷，而且枝條比較光滑，生長也快，導(dǎo)致藥劑的附著難以持久，而主干受枝條和葉片的保護(hù)，在一定程度上減少了雨水沖刷對藥斑造成的影響。本研究中，在蘋果樹主干上涂抹生物菌劑LZ-1和甲基硫菌靈涂劑 6個月內(nèi)，藥劑都可以有效附著。

此外，對涂抹190 d后的藥斑進(jìn)行檢測時發(fā)現(xiàn)，生物菌劑LZ-1和甲基硫菌靈涂劑殘余藥斑對蘋果輪紋病菌的孢子萌發(fā)抑制率分別可達(dá)42.91%、46.86%，表明涂抹190 d后，殘余的藥斑仍然具有一定的抵御病原菌侵染的能力。生物菌劑LZ-1與常規(guī)化學(xué)藥劑相比，在蘋果樹主干上的附著期長、持效期可達(dá)6個月，而常規(guī)噴施的化學(xué)藥劑的持效期通常僅為7 d左右[17-18]，常規(guī)化學(xué)藥劑的持效期遠(yuǎn)低于生物菌劑LZ-1的持效期。

綜上所述，作為保護(hù)性涂干劑，生物菌劑LZ-1不僅對果園各樹齡蘋果枝干輪紋病都具有預(yù)防和保護(hù)作用，而且施用該生物菌劑可以減少化學(xué)藥劑的使用量，達(dá)到減藥的目的。