劉 云，朱善元，龔祝南，秦 楓，夏文龍，吳 雙，吳曉潔

(1.江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院/江蘇省獸用生物制藥高技術(shù)研究重點實驗室，江蘇 泰州 225300； 2.南京師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，江蘇 南京 210000)

豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起的豬繁殖與呼吸障礙的高度傳染性疾病，能引起豬分娩率降低、晚期墮胎，以及死胎數(shù)量增加等問題，對全球經(jīng)濟(jì)造成了嚴(yán)重的影響[1]。目前，對該病的主要防治手段是接種疫苗。市面上的PRRSV疫苗主要有滅活苗和弱毒苗，但是這2種疫苗均存在免疫效果差和安全性低等問題[2]，因此，急需開發(fā)安全有效的針對PRRSV的特效藥物。

近年來，已有許多學(xué)者研究了中藥抗PRRSV的作用，發(fā)現(xiàn)很多中藥具有較強(qiáng)的抗病毒活性。中藥對病毒具有多重作用，毒副作用小且很少產(chǎn)生耐藥性，一些中藥還具有解熱、增強(qiáng)機(jī)體免疫功能等優(yōu)勢。PRINGPROA等[3]研究了狗牙根提取物體外抗PRRSV的作用，發(fā)現(xiàn)質(zhì)量濃度為0.78 mg/mL的狗牙根粗提物可使PRRSV失活并在體外抑制PRRSV的復(fù)制。孫加節(jié)等[4]研究發(fā)現(xiàn)，人參多糖在體外可有效阻斷PRRSV對Marc-145細(xì)胞的感染，可作為預(yù)防和治療PRRSV的候選藥物。胡安君等[5]、劉櫻等[6]、汪志等[7]還發(fā)現(xiàn)，甘草酸、黃芪、葛根連芩提取液在體外對PRRSV也有抑制作用。

荊芥具有抗痙攣、利尿、平喘、鎮(zhèn)咳等功效，可用于兒童皮疹、蛇和蝎子等動物咬傷后的局部治療[8]，其藥理作用在國內(nèi)研究較少，國外也主要研究其揮發(fā)油成分的藥理作用[9]。委陵菜可清熱解毒、止血、止痢，目前對其藥理學(xué)作用的研究較少。啤酒花具有抗病毒、抗真菌、抗腫瘤、抗瘧原蟲等多種生物活性[10]，可用于治療消化不良、浮腫、小便淋痛、失眠、痢疾、結(jié)核、麻風(fēng)等[11-12]。翻白草是一種多年生草本，具有清熱、解毒、止血、消腫的功效。劉蕾等[13]研究發(fā)現(xiàn)，翻白草油能增加感染呼吸道合胞病毒細(xì)胞的存活率，且有一定的劑量依賴性。百部的主要活性成分為百部生物堿，具有驅(qū)蟲、殺蟲、鎮(zhèn)咳平喘、抗腫瘤和抗菌等作用[14]?；⒄染哂欣懲它S、清熱解毒、散瘀止痛、止咳化痰之功效[15]，SEMPLE等[16]報道了2型和3型小兒麻痹病素能夠被虎杖中的大黃酚顯著地抑制。荊芥、委陵菜、啤酒花、翻白草、百部和虎杖均具有清熱解毒的功效，但目前尚未有關(guān)于這6種中藥抗PRRSV的研究。為此，選取這6種藥物，研究它們體外抗PRRSV的作用，以尋找出有效預(yù)防和控制PRRS的措施。

1 材料和方法

1.1 細(xì)胞與病毒

Marc-145細(xì)胞、PRRSV SH1705毒株、病毒滴度為105TCID50/mL的PRRSV SH1705病毒液、針對PRRSV ORF7編碼序列的特異性引物(F:5′-GGGGAATGGCCAGYCAGTCAA-3′，R:5′-GCCAGRGGAAAATGKGGCTTCTC-3′)、拷貝數(shù)為4.34×109的pMD-ORF7標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒均由江蘇省獸用生物制藥高技術(shù)研究重點實驗室保存。

1.2 主要試劑與儀器

1.2.1 主要試劑 DMEM培養(yǎng)液(Hyclone公司)、PBS(上海培源公司)、青鏈霉素混合液(100×)(Solarbio公司)、胰蛋白酶(Gibco公司)、胎牛血清(FBS)(Gibco公司)、二甲基亞砜(DMSO)(Solarbio公司)、病毒核酸純化試劑盒(TaKaRa公司)、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa公司)、染料法熒光定量試劑盒(TaKaRa公司)、噻唑藍(lán)(MTT)(Sigma公司，用PBS溶液配制成2 mg/mL，用前新鮮配制)。

1.2.2 主要儀器 生物安全柜(MVE公司)、酶聯(lián)免疫檢測儀(Bioteck公司)、CO2培養(yǎng)箱(NVAIRE公司)、ABI 7300(Thermo公司)、倒置熒光顯微鏡(Olympus公司)、-80 ℃ 超低溫冰箱(Thermo公司)。

1.3 中藥提取

用傳統(tǒng)水煎煮法對荊芥、委陵菜、啤酒花、翻白草、百部和虎杖這6種中藥進(jìn)行提取。每種中藥稱取10 g，加10倍水浸泡過夜，煎煮2次，每次30 min，合并濾液，濃縮至1 g/mL，真空干燥，稱質(zhì)量，計算得率，并置于干燥器保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 藥物安全性測定

1.4.1 Marc-145細(xì)胞培養(yǎng) 取出凍存的細(xì)胞，擰緊管蓋，立即置于37 ℃恒溫水浴鍋中，不停搖動使其快速融化。將該細(xì)胞轉(zhuǎn)入含有預(yù)熱的完全培養(yǎng)基的離心管中，1 500 r/min離心5 min，棄上清，用預(yù)熱的完全培養(yǎng)基將其重懸后加入細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞長至單層后進(jìn)行消化，傳代備用[17]。

1.4.2 藥物安全性試驗 采用MTT法檢測藥物對細(xì)胞的抑制率，用酶聯(lián)免疫檢測儀在490 nm波長處測定其OD值，根據(jù)OD值計算細(xì)胞生長抑制率[18]。

將細(xì)胞瓶中長至單層的細(xì)胞消化后計數(shù)，用含10% FBS的DMEM稀釋至約2×105個/mL，加入96孔板,每孔100 μL細(xì)胞懸液。待細(xì)胞長至單層后，棄去培養(yǎng)液，第1～10列依次從低質(zhì)量濃度至高質(zhì)量濃度加入稀釋藥液，每個質(zhì)量濃度重復(fù)4孔，每孔100 μL,11～12列加入細(xì)胞培養(yǎng)液作為細(xì)胞對照,置于 5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中。培養(yǎng)72 h后，棄去藥液，加入MTT溶液(PBS溶解，2 mg/mL),50 μL/孔，培養(yǎng)4 h后，棄去MTT溶液，加入DMSO完全溶解結(jié)晶，測OD490值。計算生長抑制率：生長抑制率=(細(xì)胞對照組OD490值-藥物組OD490值)/細(xì)胞對照組OD490值×100%。

1.5 PRRSV病毒滴度測定

1.5.1 PRRSV的擴(kuò)增 將細(xì)胞瓶中長至單層的細(xì)胞消化后，棄去舊培養(yǎng)液，用 PBS洗2 遍。用含2% FBS的DMEM培養(yǎng)液稀釋 PRRSV，接種病毒液至細(xì)胞中，于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每天觀察，當(dāng)出現(xiàn)80%～90%細(xì)胞病變時，終止培養(yǎng)。將病變細(xì)胞在-80 ℃與4 ℃反復(fù)凍融3次后，收集細(xì)胞懸液，5 000 r/min離心5 min，收集上清液[19]，0.22 μm微孔濾膜過濾除菌，分裝至EP管內(nèi)，標(biāo)注好分裝時間與批次等信息后，置于-80 ℃?zhèn)溆谩?/p>

1.5.2 熒光定量PCR法測定病毒滴度

1.5.2.1 RNA的提取 按照TaKaRa病毒核酸純化試劑盒的操作說明，從PRRSV SH1705病毒液和保存的已知病毒滴度為105TCID50/mL的病毒液中提取RNA，所得RNA于-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.2.2 反轉(zhuǎn)錄 按照TaKaRa逆轉(zhuǎn)錄試劑盒的操作說明，反應(yīng)體系：PrimeScript RT Master Mix 2 μL，RNA 2 μL，DDW 6 μL。反應(yīng)條件：37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s，4 ℃保溫，并將獲得的cDNA于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.5.2.3 熒光定量PCR 取標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒，依次10倍倍比稀釋，配制成10-1～10-9的稀釋液，共9個梯度，每個梯度設(shè)3個重復(fù)，作為模板，按照TaKaRa染料法熒光定量試劑盒說明書的反應(yīng)體系配制反應(yīng)液，將反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA模板以及稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品，用PRRSV ORF7特異性引物，在ABI 7300儀器上進(jìn)行熒光定量PCR反應(yīng)[20]。反應(yīng)體系：SYBR Premix ExTaqⅡ 10 μL，ORF7F(10 μmol/L)0.8 μL，ORF7R(10 μmol/L) 0.8 μL，ROX Reference Dye(50×) 0.4 μL，DNA 模板2 μL，DDW 6 μL。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性30 s；95 ℃變性5 s，60 ℃退火并延伸31 s，共擴(kuò)增40個循環(huán)。延伸結(jié)束收集熒光信號。

1.6 6種中藥水提物體外抗PRRSV的效果測定

以荊芥、委陵菜、啤酒花、翻白草、百部和虎杖水提物的最大安全質(zhì)量濃度為起始質(zhì)量濃度，用含2% FBS的DMEM培養(yǎng)液2倍倍比稀釋成4個質(zhì)量濃度梯度，每個質(zhì)量濃度梯度重復(fù)4孔。將PRRSV病毒液稀釋為100TCID50，另設(shè)利巴韋林陽性對照，病毒對照及細(xì)胞對照。于5% CO2、37 ℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng),每天觀察細(xì)胞病變情況，待病毒對照組細(xì)胞病變程度達(dá)到80%～90%后，采用MTT法測各孔OD值，計算藥物對病毒抑制率[21]：

藥物對病毒的抑制率=(加藥孔OD490值-病毒對照組OD490值)/(細(xì)胞對照孔OD490值-病毒對照孔OD490值)×100%。

1.6.1 阻斷作用試驗 Marc-145細(xì)胞在96孔板中長至單層后，棄去舊培養(yǎng)液，加入以最大安全質(zhì)量濃度為起始質(zhì)量濃度的中藥液，每孔100 μL，培養(yǎng)4 h后，棄去藥液，加入100TCID50PRRSV病毒液，每孔100 μL，培養(yǎng)2 h后，棄去病毒液，加入含2% FBS的DMEM培養(yǎng)液。

1.6.2 抑制作用試驗 Marc-145細(xì)胞在96孔板中長至單層后，棄去舊培養(yǎng)液，加入100TCID50PRRSV病毒液，每孔100 μL，培養(yǎng)2 h后，棄去病毒液，加入以最大安全質(zhì)量濃度為起始質(zhì)量濃度的中藥液，每孔100 μL，培養(yǎng)4 h后，棄去中藥液，加入含2% FBS 的DMEM培養(yǎng)液。

1.6.3 直接滅活試驗 Marc-145細(xì)胞在96孔板中長至單層后，棄去舊培養(yǎng)液，同時加入50 μL藥液和50 μL病毒液(使藥液最高質(zhì)量濃度為最大安全質(zhì)量濃度和病毒液終含量為100TCID50)，培養(yǎng)4 h后，棄去藥液，加入含2% FBS的DMEM培養(yǎng)液。

1.7 數(shù)據(jù)處理及藥效評價

每天用顯微鏡觀察上述各藥物組細(xì)胞病變情況并記錄，根據(jù)中藥對病毒的抑制率評價其抗病毒的效果，抑制率越高，說明其抗病毒作用越強(qiáng)。應(yīng)用SPSS 17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 6種中藥水提物得率

荊芥、委陵菜、啤酒花、翻白草、百部和虎杖經(jīng)提取干燥后粉末質(zhì)量分別為2.32 g、2.22 g、3.61 g、2.26 g、5.27 g和3.49 g，其得率分別為23.2%、22.2%、36.1%、22.6%、52.7%和34.9%。

2.2 6種中藥水提物對細(xì)胞的安全質(zhì)量濃度測定結(jié)果

細(xì)胞病變觀察發(fā)現(xiàn)，不同藥物對Marc-145細(xì)胞都有一定程度的毒性作用，并且藥物質(zhì)量濃度越高毒性作用越強(qiáng)，主要表現(xiàn)為細(xì)胞折光性增加，變圓、粘連、破碎，甚至脫落。根據(jù)公式以O(shè)D490值計算藥物對細(xì)胞的生長抑制率，當(dāng)抑制率為0時，則該質(zhì)量濃度下藥物對細(xì)胞沒有毒性作用，從而確定藥物的最大安全質(zhì)量濃度，結(jié)果見表1。荊芥、委陵菜、啤酒花、翻白草、百部和虎杖水提物的最大安全質(zhì)量濃度分別為0.25 mg/mL、1.25 mg/mL、0.63 mg/mL、0.31 mg/mL、0.16 mg/mL和0.47 mg/mL。

表1 中藥水提物對Marc-145細(xì)胞的抑制率及安全質(zhì)量濃度

注：A、B、C、D、E、F分別表示荊芥、委陵菜、啤酒花、翻白草、百部和虎杖。委陵菜、啤酒花、翻白草和百部的起始質(zhì)量濃度為5 mg/mL，荊芥和虎杖的起始質(zhì)量濃度分別為1 mg/mL、15 mg/mL。

Notes: A, B, C, D, E, and F respectively representNepetacatariaL.,PotentillachinensisSer.,HumuluslupulusLinn.,PotentilladiscolorBge.,Stemonajaponica(Blume) Miq. andReynoutriajaponicaHoutt respectively.The initial mass concentrations ofPotentillachinensisSer.,HumuluslupulusLinn.,PotentilladiscolorBge. andStemonajaponica(Blume) Miq. are 5 mg/mL,NepetacatariaL. andReynoutriajaponicaHoutt. are 1 mg/mL and 15 mg/mL, respectively.

2.3 PRRSV的TCID50測定結(jié)果

檢測結(jié)果表明，已知病毒滴度為105TCID50/mL PRRSV病毒液的病毒載量為1.98×108拷貝/mL，擴(kuò)增后得到的PRRSV病毒液的病毒載量為5.27×108拷貝/mL，經(jīng)計算，擴(kuò)增后得到的PRRSV病毒液的病毒滴度為2.66×105TCID50/mL。

2.4 6種中藥水提物抗PRRSV的藥效

2.4.1 細(xì)胞形態(tài)觀察 各試驗組3種作用方式下的細(xì)胞形態(tài)見圖1—3。病毒對照組細(xì)胞大部分出現(xiàn)圓縮、團(tuán)聚、脫落現(xiàn)象，而細(xì)胞對照組細(xì)胞呈單層生長，形態(tài)完好。

2.4.1.1 對PRRSV的阻斷作用 從圖1可以看出，翻白草藥物組細(xì)胞病變嚴(yán)重，細(xì)胞大量圓縮、團(tuán)聚，并伴有脫落現(xiàn)象，荊芥和啤酒花藥物組出現(xiàn)了輕微細(xì)胞病變，細(xì)胞出現(xiàn)團(tuán)聚現(xiàn)象，其他藥物組基本無病變，細(xì)胞生長正常，有較好的保護(hù)作用。

2.4.1.2 對PRRSV的抑制作用 從圖2可以看出，啤酒花藥物組細(xì)胞病變程度嚴(yán)重，細(xì)胞圓縮、脫落，荊芥、翻白草和百部藥物組出現(xiàn)了細(xì)胞團(tuán)聚現(xiàn)象，有輕微細(xì)胞病變，委陵菜和虎杖藥物組細(xì)胞呈單層生長，形態(tài)完好，未出現(xiàn)細(xì)胞病變，對細(xì)胞保護(hù)作用良好。

1：荊芥藥物組(0.25 mg/mL)；2:委陵菜藥物組(1.25 mg/mL)；3：啤酒花藥物組(0.63 mg/mL)；4：翻白草藥物組(0.31 mg/mL)；

圖2 藥物對PRRSV的抑制作用Fig.2 Inhibition effect of drugs on PRRSV

2.4.1.3 對PRRSV的直接滅活作用 從圖3可以看出，委陵菜和虎杖藥物組未出現(xiàn)細(xì)胞病變，顯示出對細(xì)胞的保護(hù)作用，其他藥物組都出現(xiàn)不同程度的細(xì)胞病變。

2.4.2 6種中藥水提物對細(xì)胞的保護(hù)作用 MTT法檢測中藥處理組OD490值，其值越高，說明藥物對細(xì)胞的保護(hù)作用越強(qiáng)，即對PRRSV的抑制作用越強(qiáng)，6種中藥水提物抗PRRSV作用的抑制率見表2。從表2可以看出，這6種中藥抗PRRSV效果最好的藥物質(zhì)量濃度大部分為最大安全質(zhì)量濃度，隨著質(zhì)量濃度越來越低，其抑制作用逐漸變?nèi)酢?/p>

從阻斷作用來看，翻白草對PRRSV沒有阻斷作用，委陵菜、百部和虎杖對PRRSV的阻斷作用最強(qiáng)，其對PRRSV的最高抑制率分別為115.8%、120.2%和110.4%，其次是荊芥和啤酒花，其對PRRSV的最高抑制率分別為80.6%和61.5%，也表現(xiàn)出了對細(xì)胞良好的保護(hù)作用。

圖3 藥物對PRRSV的直接滅活作用Fig.3 Direct inactivation of drugs on PRRSV

Tab.2 Inhibition rate of PRRSV by different mass concentrations of water extracts of traditional Chinese medicines %

注：C1、C2、C3、C4表示從中藥水提物的最大安全質(zhì)量濃度開始2倍倍比稀釋的4個不同質(zhì)量濃度。

Notes: C1, C2, C3 and C4 represent 4 different mass concentrations diluted from the maximum safe mass concentration of the Chinese herbal medicine water extracts.

從抑制作用看，除啤酒花對細(xì)胞幾乎沒有保護(hù)作用外，翻白草對PRRSV的抑制作用最強(qiáng)，其對PRRSV的最高抑制率為129.4%，可以較好地保護(hù)細(xì)胞，其次是委陵菜和虎杖，其對PRRSV的最高抑制率分別為93.0%和94.3%，對細(xì)胞具有很好的保護(hù)作用，荊芥和百部對PRRSV的最高抑制率分別為52.2%和61.8%，也可以對細(xì)胞起到一定的保護(hù)作用。

從直接滅活作用來看，這6種中藥水提物對細(xì)胞都有不同程度的保護(hù)作用，其中委陵菜和虎杖的效果最好,對PRRSV的最高抑制率分別為125.4%和130.8%。

綜合3種作用方式的細(xì)胞病變情況和抑制率結(jié)果，荊芥、委陵菜、啤酒花、翻白草、百部和虎杖6種中藥水提物均具有抗病毒活性，對PRRSV具有不同程度的抗病毒作用。其中，委陵菜和虎杖體外抗PRRSV效果最好，其次是荊芥和百部。啤酒花的阻斷作用和直接滅活作用明顯強(qiáng)于抑制作用，幾乎沒有抑制作用。翻白草對PRRSV無阻斷作用，但其抑制作用和直接滅活作用較強(qiáng)。

3 結(jié)論與討論

中藥是天然存在的具有藥用價值的一類植物，自從其藥用價值被發(fā)現(xiàn)以后，就一直被用來治療各種疾病，且療效顯著[22]。水煎煮法是最早使用的中藥提取的傳統(tǒng)方法，該方法以水為溶劑，易操作，應(yīng)用廣泛。隨著科技的進(jìn)步，許多新型提取技術(shù)得到了越來越廣泛的應(yīng)用，如超臨界液體萃取法、超聲波提取法、半仿生提取法等，這些提取技術(shù)具有提取速度快、效率高、收率好、無污染的特點[23]。但考慮到試驗的成本及溶劑的殘留可能對細(xì)胞造成的毒性作用，本試驗采用水煎煮法對荊芥、委陵菜、啤酒花、翻白草、百部和虎杖6種中藥進(jìn)行提取。

體外細(xì)胞毒性試驗是一種在離體狀態(tài)下模擬生物體生長環(huán)境，檢測生物醫(yī)用材料或藥物等作用于細(xì)胞后所造成的細(xì)胞死亡、細(xì)胞溶解和細(xì)胞生長抑制的方法[24]。該方法具有效率高、成本低等優(yōu)點。評價中藥提取物對細(xì)胞是否具有毒性最直觀的方法是觀察細(xì)胞的生長狀態(tài)。中藥提取物對細(xì)胞有毒性時，主要表現(xiàn)為細(xì)胞折光性增加、變圓、粘連、破碎，甚至脫落[25]。而MTT法也可較為直觀地反映細(xì)胞活力及狀態(tài)，其能夠用于檢測細(xì)胞的存活與增殖，可以較為精確地反映活細(xì)胞數(shù)量。本試驗采用MTT法來評價中藥提取物對細(xì)胞的毒性。這6種中藥水提物對細(xì)胞的毒性作用各不相同，抑制率為0時，表明該質(zhì)量濃度下的中藥水提物對Marc-145細(xì)胞無毒性，得到中藥水提物的最大安全質(zhì)量濃度。荊芥、委陵菜、啤酒花、翻白草、百部和虎杖對Marc-145細(xì)胞的最大安全質(zhì)量濃度分別為0.25 mg/mL、1.25 mg/mL、0.63 mg/mL、0.31 mg/mL、1.56 mg/mL和0.47 mg/mL。冼瓊珍等[26]研究了16種中藥提取物抗PRRSV的作用，大部分提取物安全質(zhì)量濃度都在1.56～6.25 mg/mL，本試驗中6種中藥水提物安全質(zhì)量濃度的測定結(jié)果與其相似，表明本試驗所得的中藥水提物的安全質(zhì)量濃度結(jié)果真實、可信。

熒光定量PCR是目前檢測核酸含量以及分析基因表達(dá)水平相對變化的主要技術(shù)[27]，其準(zhǔn)確性高、特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡便，廣泛應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)等多個學(xué)科領(lǐng)域[28-29]。本研究采用熒光定量PCR方法檢測PRRSV病毒液的病毒載量，根據(jù)已知病毒滴度的病毒液，更為快速、準(zhǔn)確地得到擴(kuò)增后PRRSV病毒液的病毒滴度。

體外細(xì)胞培養(yǎng)法是進(jìn)行藥物抗病毒體外篩選的主要方法，即在細(xì)胞感染病毒后，檢測藥物對病毒的抑制作用。常用的檢測方法有染料攝入法、MTT法、空斑法、細(xì)胞病變效應(yīng)法等[30]。本試驗結(jié)合MTT法和細(xì)胞病變觀察法，評價中藥提取物抗PRRSV的作用效果。大部分細(xì)胞在感染病毒后，細(xì)胞發(fā)生圓縮、團(tuán)聚、脫落，甚至損傷、死亡等現(xiàn)象，可在顯微鏡下觀察，這些細(xì)胞特性的改變稱之為細(xì)胞病變效應(yīng)，該法有助于對抗病毒藥物的初步鑒定。同時結(jié)合MTT法，可較為準(zhǔn)確地找出抗病毒效果強(qiáng)的中藥提取物。

綜合3種作用方式，荊芥、委陵菜、啤酒花、翻白草、百部和虎杖這6種中藥對PRRSV都有不同程度的抗病毒作用，其中委陵菜和虎杖對PRRSV的抗病毒效果顯著，這2種中藥的3種作用方式最高抑制率都達(dá)到90%以上，且細(xì)胞未出現(xiàn)明顯病變，說明無論是對病毒的阻斷、抑制，還是殺滅作用，這2種藥物均具有很好的療效，能夠較好地起到保護(hù)細(xì)胞的作用。百部和荊芥對PRRSV的抗病毒作用也較強(qiáng)。啤酒花對PRRSV不能起到很好的抑制作用，翻白草對PRRSV的阻斷作用較弱，但這2種藥物的其他2種作用方式都能夠?qū)?xì)胞起到良好的保護(hù)作用，說明其具有一定的抗病毒活性。從中藥提取物對PRRSV的抑制率看，部分中藥提取物對病毒的最大抑制率達(dá)到了100%以上，表明在此質(zhì)量濃度下的中藥提取物對細(xì)胞是無毒的，也說明一定質(zhì)量濃度的中藥提取物能促進(jìn)細(xì)胞的生長，這與胡元亮等[31]、布瑋瑋[32]測定結(jié)果相符，可能與中藥自身所含的多糖類、生物堿類、黃酮類或揮發(fā)油類以及生長調(diào)節(jié)因子促進(jìn)細(xì)胞生長密切相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，荊芥、委陵菜、啤酒花、翻白草、百部和虎杖這6種中藥均具有體外抗PRRSV病毒活性，其中委陵菜和虎杖體外抗PRRSV的作用最佳，其次是荊芥和百部，啤酒花和翻白草也具有一定的抗PRRSV作用，可以用于PRRSV的臨床治療，但這6種中藥的抗病毒機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。