王香存 班恒 沈凡

摘要 ?[目的]測(cè)定合肥市售鯽魚(yú)和河蝦的鏈霉素殘留量，并與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比，評(píng)價(jià)其殘留情況。[方法]于2018年10—12月在合肥市蜀山區(qū)、廬陽(yáng)區(qū)、瑤海區(qū)、包河區(qū)共16個(gè)水產(chǎn)品市場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和大型超市隨機(jī)購(gòu)買(mǎi)不同品種的魚(yú)蝦，采用酶聯(lián)免疫吸附方法檢測(cè)其中鏈霉素的殘留量。[結(jié)果]合肥市售魚(yú)蝦中鏈霉素的檢出率為100%，殘留范圍為1.50～11.88 μg/kg，平均含量為4.40 μg/kg。[結(jié)論]根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《動(dòng)物源性食品中鏈霉素殘留量測(cè)定方法酶聯(lián)免疫法》（GB/T 21330-2007）的規(guī)定，水產(chǎn)品中鏈霉素的檢測(cè)下限為50.0 μg/kg，此次試驗(yàn)檢測(cè)魚(yú)蝦中鏈霉素的殘留量均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

關(guān)鍵詞合肥市;鯽魚(yú);河蝦;酶聯(lián)免疫法;鏈霉素

中圖分類號(hào)：S859.84文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：2095-3305（2019）03-121-03

DOI： 10.19383/j.cnki.nyzhyj.2019.03.052

鏈霉素是一種從革蘭氏陽(yáng)性的灰色鏈霉菌培養(yǎng)液中提取出來(lái)的氨基糖苷類抗生素，在食品行業(yè)，鏈霉素常見(jiàn)于農(nóng)產(chǎn)品和水產(chǎn)品中，作為抗菌藥物使用。但是過(guò)量使用鏈霉素，會(huì)造成其在動(dòng)物源性食品中殘留，對(duì)人類健康造成危害，尤其對(duì)聽(tīng)覺(jué)神經(jīng)毒性較大，長(zhǎng)期使用會(huì)對(duì)人體腎臟和聽(tīng)覺(jué)神經(jīng)造成不可逆轉(zhuǎn)的損害，還會(huì)使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性。因此，鏈霉素殘留檢測(cè)方法是否快捷、準(zhǔn)確、高效，對(duì)食品安全具有重要的意義。

該試驗(yàn)采用酶聯(lián)免疫間接競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)魚(yú)蝦樣本中的鏈霉素殘留情況。試驗(yàn)原理是樣品吸光度值與其鏈霉素殘留量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。酶聯(lián)免疫競(jìng)爭(zhēng)性試驗(yàn)中，酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原和待測(cè)樣品中殘留的鏈霉素一起競(jìng)爭(zhēng)抗鏈霉素抗體，當(dāng)加入酶標(biāo)記物后，再加入四甲基聯(lián)苯胺（TMB）底物顯色，測(cè)得其吸光度，再將試驗(yàn)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較，就可以得到樣品中鏈霉素的殘留量。將試驗(yàn)結(jié)果得到的鏈霉素殘留量與國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比分析，即可粗略得出合肥市售鯽魚(yú)和河蝦鏈霉素殘留情況。

1材料與方法

1.1樣品采集

課題小組于2018年10月至12月在合肥市蜀山、廬陽(yáng)、瑤海、包河4個(gè)區(qū)共16個(gè)水產(chǎn)品市場(chǎng)、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和大型超市分別隨機(jī)采購(gòu)了鯽魚(yú)和河蝦。采樣后在冰箱-20℃進(jìn)行低溫保存。

1.2試驗(yàn)儀器與試劑

1.2.1儀器勻漿機(jī)（T10，德國(guó)IKA公司）;離心機(jī)（H1650，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司）;酶標(biāo)儀（SpectraMax M，美國(guó)MD公司）。

1.2.2試劑鏈霉素檢測(cè)試劑盒（深圳芬德生物技術(shù)有限公司），其余化學(xué)試劑均為分析純。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1樣品處理分別配置PB緩沖液（1. 2 g NaH2PO4·2H2O和2. 175 g NaH2PO4·2H2O加入去離子水1 000 ml溶解，0.05 mol/L）、復(fù)溶液以及工作洗滌液。將配好的洗滌液稀釋20倍。處理待測(cè)魚(yú)蝦樣品，取肉，粉碎并制成勻漿。然后稱取2 g去除脂肪的勻漿待測(cè)樣品，加入8 ml PB緩沖液（0.05 mol/L），將其充分震蕩混勻。在56℃的水浴環(huán)境下放置0.5 h后，接著在室溫下上離心10 min，轉(zhuǎn)速為4 000 r/min。用移液器取1 ml上清液加入離心管中，再加入1 ml正己烷，充分混勻，室溫下4 000 r/min轉(zhuǎn)速離心。用移液器取50 ml用于分析。

1.3.2酶聯(lián)免疫法檢測(cè)鏈霉素含量分別將標(biāo)準(zhǔn)品和樣本取50 μl/孔加入到微孔中，分別向每個(gè)微孔中加入50 μl抗體工作液，混勻，在室溫條件下避光反應(yīng)30 min。將孔內(nèi)的液體甩干，向每孔中加入350 μl工作洗滌液充分洗滌，共洗滌5次，最后用吸水紙拍干。向每個(gè)微孔中加入100 μl酶標(biāo)記物，室溫條件下避光反應(yīng)30 min。重復(fù)洗滌操作。然后，向每孔中加入底物液A 50 μl，再加底物液B 50 μl，混勻，在室溫條件下避光顯色15 min。最后，在每孔中加入50 μl終止液，混勻，終止反應(yīng)。終止反應(yīng)10 min內(nèi)，用酶標(biāo)儀在450 nm和630 nm波長(zhǎng)處測(cè)定每孔吸光度值。

1.3.3繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品數(shù)據(jù)（表1）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1）。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

試驗(yàn)結(jié)果以x±s表示，采用SPSS 22.0軟件中的t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析處理。P<0.05即有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果與分析

2.1樣品檢測(cè)結(jié)果

從表2來(lái)看，合肥市售魚(yú)蝦中鏈霉素的檢出率為100%，殘留范圍為1.5～11.88 μg/kg，鏈霉素平均殘留量為4.40 μg/kg，均在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)范圍之內(nèi)。

2.2數(shù)據(jù)分析對(duì)比

如圖2a所示，在全部樣本中，盡管河蝦中鏈霉素殘留濃度均值高于鯽魚(yú)，但無(wú)顯著性差異（P>0.05）。如圖2b所示，鯽魚(yú)中鏈霉素殘留濃度均值按從大到小排列為：包河區(qū)>瑤海區(qū)>蜀山區(qū)>廬陽(yáng)區(qū)，但是各區(qū)樣本數(shù)據(jù)沒(méi)有顯著性差異（P>0.05）。如圖2c所示，河蝦中鏈霉素水平在各區(qū)變化趨勢(shì)與鯽魚(yú)相同。然而，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，包河區(qū)河蝦中鏈霉素殘留量顯著高于其他3個(gè)區(qū)（P<0.05）。

3討論

3.1魚(yú)蝦中鏈霉素殘留的原因

所有樣品中鏈霉素的檢出率為100%，但其殘留量均在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)范圍之內(nèi)。引起魚(yú)蝦中鏈霉素殘留的因素主要有魚(yú)蝦生病、魚(yú)蝦防腐、飼料添加等，因此建議水產(chǎn)養(yǎng)殖戶加強(qiáng)生產(chǎn)和運(yùn)輸管理，合理用藥，為消費(fèi)者提供放心安全的水產(chǎn)品。

3.2可能影響試驗(yàn)結(jié)果的因素

3.2.1溫度當(dāng)室溫低于25℃，或者試劑和待測(cè)樣品的溫度高于25℃的情況下，所測(cè)得的吸光度值會(huì)偏低。

3.2.2洗滌操作不當(dāng)在洗板過(guò)程中如果過(guò)度洗滌，或者洗滌不充分，可能會(huì)導(dǎo)致所測(cè)得的數(shù)值偏大或者偏小。洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作，否則可能會(huì)出現(xiàn)板孔干燥的情況，使得標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好。

3.2.3孵育不完全在整個(gè)孵育過(guò)程中，都應(yīng)該用蓋板膜封住酶標(biāo)板，避免反應(yīng)。

3.3魚(yú)蝦中鏈霉素殘留情況評(píng)價(jià)

此次調(diào)查中采集的樣品均為可食用的魚(yú)蝦，是人們?nèi)粘Ｊ秤玫乃a(chǎn)品。鏈霉素在水產(chǎn)品防治感染性疾病方面發(fā)揮了重要作用，但其毒副作用大，尤其對(duì)聽(tīng)覺(jué)神經(jīng)毒性較大，長(zhǎng)期使用會(huì)使細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，還會(huì)對(duì)人體腎臟和聽(tīng)覺(jué)神經(jīng)造成不可逆轉(zhuǎn)的損害。依據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《動(dòng)物源性食品中鏈霉素殘留量測(cè)定方法酶聯(lián)免疫法》（GB/T 21330-2007）的規(guī)定，水產(chǎn)品中鏈霉素的殘留量檢測(cè)下限為50.0 μg/kg，因此此次試驗(yàn)魚(yú)蝦中鏈霉素的殘留量符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

4結(jié)論

（1）樣品魚(yú)蝦中鏈霉素的檢出率為100%，殘留范圍為1.5～11.88 μg/kg，平均含量為4.40 μg/kg，所有魚(yú)蝦樣品中鏈霉素的殘留量均符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。

（2）雖然檢測(cè)魚(yú)蝦樣品中鏈霉素的殘留結(jié)果均在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，但其檢出率為100%，仍需要完善水產(chǎn)品藥物殘留監(jiān)控體系，加強(qiáng)監(jiān)管，并提高養(yǎng)殖人員的技術(shù)和素養(yǎng)，從源頭上控制濫用抗生素的現(xiàn)象，保證食品安全。

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責(zé)任編輯：李楊