饒艷春 熊 煒 朱碧君

江西省藥品檢驗檢測研究院江西省藥品與醫(yī)療器械質(zhì)量工程技術研究中心，江西南昌 330029

藥用塑料瓶是由塑料吹塑加工成型而成，常用的材料有聚丙烯（PP）、聚乙烯（PE）、聚酯（PET）等，因具有無毒、耐腐蝕、強度高及質(zhì)輕攜帶方便等優(yōu)點，現(xiàn)已廣泛用于固體制劑和液體制劑的包裝[1-3]。在塑料的生產(chǎn)過程中，為使其在儲存、使用過程中更加穩(wěn)定，不因光、氧等因素的影響而導致材料老化、性質(zhì)改變等問題，通常需加入多種助劑，如抗氧劑、抑酸劑、潤滑劑等，這些添加劑在適當?shù)臈l件下可以從塑料中遷移出來，影響藥物的穩(wěn)定性，進入人體易引發(fā)安全性風險[4-6]?！八幤钒b材料與藥物相容性試驗指導原則”規(guī)定塑料包裝材料應重點考察添加劑、加工時分解產(chǎn)物對藥物的影響[7]。本研究參考相關文獻[8-15]，建立了高效液相色譜法同時測定PP、PE、PET 為原料制成的藥用塑料瓶中5 種抗氧劑含量的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1260 高效液相色譜儀（美國Agilent）；MS105 電子天平（瑞士梅特勒公司0.01 mg）；BAS224S 電子天平（德國賽多利斯0.1 mg）；Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；Micropure uv/uf 超純水儀（美國賽默飛世爾）。

1.2 試藥

抗氧劑1010、168、1076、330，批號：MKBC8710、MKAA3717、MKBB8963、05928TI，含量：98%、98%、99%、99%，均由SIGMA-ALDRICH 提供；抗氧劑BHT（批號：LB68565，含量99.9%），由SUPELCO 提供；甲醇為色譜純，由SIGMA-ALDRICH 提供；水為超純水。22 批樣品由13 個廠家提供，見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相：甲醇（A）∶水（B），梯度洗脫（0～7 min，90%A；7～8 min，90%A→100%A；8～43 min，100% A；43～44 min，100% A →90% A；44～55 min，90%A），檢測波長278 nm，流速1.0 mL/min，柱溫30℃，進樣量10 μL。

表1 樣品信息

2.2 對照液制備

2.2.1 對照儲備液 精密稱取抗氧劑BHT、330、1010、1076、168 各0.05 g，分別置于100 mL 容量瓶中，加稀釋液（甲苯∶甲醇=2∶3）至刻度。

2.2.2 混合對照液 精密吸取上述對照儲備液各5 mL置50 mL 量瓶中，加稀釋液至刻度，再依次稀釋成5、10、20、30、40、50 mg/L。

2.3 供試品溶液

精密稱取剪碎樣品2 g，置具塞錐形瓶中，加稀釋液20 mL，稱定重量，加熱回流3 h，放冷，用稀釋液補足減少的重量，用0.25 μm 微孔濾膜過濾。

2.4 空白溶液

不加樣品，按照“供試品溶液”制備方法進行操作。

2.5 系統(tǒng)適用性試驗

取空白溶液、混合對照液、供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定，結(jié)果顯示，5 種抗氧劑理論塔板數(shù)均＞20 000，各成分峰分離良好，分離度均＞5.0。見圖1。

2.6 線性關系考察

取“2.2.2”項下混合對照液，按“2.1”項下色譜條件測定，以峰面積Y 為縱坐標，質(zhì)量濃度X（mg/L）為橫坐標進行線性回歸，結(jié)果見表2。

2.7 檢測限與定量限

取混合對照液逐步稀釋后，按“2.1”項下色譜條件測定，以信噪比3∶1、10∶1 時的進樣量為檢測限、定量限。見表3。

2.8 精密度試驗

精密吸取“2.2.2”項下濃度為50 mg/L 混合對照液，按“2.1”項下色譜條件，進樣6 次，結(jié)果抗氧劑BHT、1010、330、1076、168 峰面積的RSD 分別為0.21%、0.10%、0.23%、0.09%、0.11%（n ＝6），說明方法精密度良好。

2.9 重復性與穩(wěn)定性試驗

精密稱取3 種材質(zhì)的樣品（批號：170501、161003、16011901），各6 份，分別加入對照液適量，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件測定，計算含量（n=6），取重復性試驗樣品液分別于0、2、4、8、12、24 h 進樣10 μL，記錄峰面積，結(jié)果顯示方法的重復性良好，供試品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定。見表4。

圖1 空白溶液、混合對照品和供試品溶液高效液相色譜圖

表2 回歸方程、相關系數(shù)和線性范圍

表3 檢測限與定量限結(jié)果（ng）

2.10 樣品含量測定

取“2.3”項下制備的供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件測定（n=2），結(jié)果顯示，抗氧劑BHT 均未檢出，口服液體藥用聚酯瓶、聚酯藥用滴眼劑瓶未檢出抗氧劑，其余結(jié)果見表5。

表4 重復性與穩(wěn)定性試驗的結(jié)果（RSD，%，n=6）

表5 樣品含量測定結(jié)果（μg/g）

2.11 加樣回收率試驗

精密稱取3 種材質(zhì)已知含量的樣品（批號：170501、161003、16011901，分別為樣品1、2、3，樣品3 中未檢出抗氧劑）適量，各9 份，按樣品含量的80%、100%、120%分別加入對照液適量。按“2.3”項下方法制備回收率溶液，按“2.1”項下色譜條件測定。樣品1、2 加樣回收率結(jié)果見表6。

3 討論

通過比較丙酮、環(huán)己烷、異丙醇、甲苯∶甲醇等溶劑對抗氧劑的提取情況，結(jié)合提取溶劑與流動相互溶情況，確定以甲苯∶甲醇（2∶3）作為提取溶劑，預實驗選擇超聲和加熱回流兩種提取方法進行比較，回流提取效果更好，同時比較回流時間對抗氧劑提取量的影響，結(jié)果加熱回流3 h 基本提取完全[16-20]。

分別以甲醇∶水、乙腈∶四氫呋喃∶水、乙腈∶甲醇為流動相，不同流速、不同梯度洗脫程序考察抗氧劑的分離效果，采用甲醇∶水為流動相梯度洗脫，各成分色譜峰分離效果最佳。

表6 加樣回收率試驗結(jié)果（n=9）

由于樣品中未檢出抗氧劑或檢出部分抗氧劑，所以樣品加入對照液進行重復性和穩(wěn)定性試驗。國內(nèi)外標準及相關資料，對抗氧劑限度均有規(guī)定，如食品藥品監(jiān)督管理局要求食品中抗氧劑總量不得超過0.02%，《歐洲藥典》規(guī)定非腸道制劑及眼科制劑用容器PE、PP等材料中抗氧劑添加不能超過3 種，單個抗氧劑及抗氧劑總量均不得超過0.3%。GB9685-2016 規(guī)定抗氧劑BHT 在PE、PP 中不得超過0.5%，PET 中不得超過0.13%，抗氧劑1010、330、1076 在PE、PP、PET 中均不得超過0.5%，抗氧劑168 在PE 中不得超過0.2%，PP 中不得超過0.25%[21-23]。本次試驗每批樣品中檢出的抗氧劑不超過3 種，總量≤0.047%，小于《歐洲藥典》和GB9685-2016 規(guī)定的限值，該方法可用于3 種材質(zhì)藥用塑料瓶中5 種抗氧劑的測定，可為藥用塑料瓶質(zhì)量研究及藥物相容性試驗提供參考。