任勤 高麗嬌 姬聰慧 王瑞生

（重慶市畜牧科學(xué)院，重慶 402460）

囊狀幼蟲(chóng)病是中華蜜蜂疾病中較為嚴(yán)重的病害之一，蜂群一旦發(fā)病很難治愈，對(duì)養(yǎng)蜂生產(chǎn)帶來(lái)嚴(yán)重?fù)p失，目前對(duì)該病的防治效果不明顯。而且大多數(shù)蜂農(nóng)遇到該病都是利用藥物治療，對(duì)產(chǎn)品造成污染，導(dǎo)致藥物殘留，影響產(chǎn)品品質(zhì)。因此，抗病育種是從根本上解決囊狀幼蟲(chóng)病危害的有效途徑。

社會(huì)性免疫防衛(wèi)是蜜蜂的群體行為，這種行為可以減少疾病的發(fā)生和傳播。蜜蜂衛(wèi)生行為是蜂群抵抗疾病的潛在機(jī)制，而且這種特性可以遺傳。蜜蜂衛(wèi)生行為是工蜂識(shí)別和去除巢房中的病蟲(chóng)、受傷或者死去的蟲(chóng)體的過(guò)程[1,2]。蜜蜂衛(wèi)生行為由兩對(duì)隱性基因控制，這些隱性基因允許蜜蜂識(shí)別巢房?jī)?nèi)的生病或死去的蟲(chóng)體并將其移除，執(zhí)行此行為的蜂群被認(rèn)為具有衛(wèi)生行為[3]。

本實(shí)驗(yàn)采用液氮冷凍的方法對(duì)蜂群清除能力進(jìn)行測(cè)定，篩選出具有衛(wèi)生能力的蜂群，并采用同樣的方法進(jìn)行三代以上的選育，然后測(cè)定選育出蜂群的整體清除能力和對(duì)囊狀幼蟲(chóng)病的抵抗能力。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)所用蜂群收集自重慶市南川區(qū)部分養(yǎng)蜂專(zhuān)業(yè)合作社，并經(jīng)過(guò)考察具一定抗病能力的中華蜜蜂蜂群。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)蜂群組織

將收集篩選的中華蜜蜂蜂群30群進(jìn)行巢內(nèi)結(jié)構(gòu)調(diào)整，每群蜂都保持在4脾，巢內(nèi)蜂子結(jié)構(gòu)基本保持一致，并且每群蜂都健康無(wú)病，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中對(duì)蜂群進(jìn)行獎(jiǎng)勵(lì)飼喂。

1.2.2 具衛(wèi)生行為蜂群選育

采用液氮冷凍的方法對(duì)蜂群是否具有衛(wèi)生行為進(jìn)行篩選。具體做法是選擇封蓋整齊的封蓋子脾，然后將自制的PC管狀體放在封蓋子區(qū)域，緩慢倒入30ml液氮，防止濺出凍死周?chē)姆馍w子，并利用照相機(jī)拍照，然后將封蓋子脾放入原群，在24h后提出處理過(guò)的子脾，抖掉蜜蜂，再次拍照，對(duì)剛處理過(guò)的子脾區(qū)域和清理后的子脾區(qū)域進(jìn)行計(jì)數(shù)對(duì)比，算出清除率，達(dá)到95%以上的清除率就認(rèn)為蜂群具有衛(wèi)生行為。試驗(yàn)重復(fù)3次，每一次試驗(yàn)都將清除率達(dá)不到95%以上的蜂群淘汰，直到選育出三代為止。

1.2.3 蜂群衛(wèi)生能力測(cè)定

將選育出的具衛(wèi)生行為的第三代蜂群利用人工育王的方法擴(kuò)繁至30群作為實(shí)驗(yàn)組，然后組織未經(jīng)選育的蜂群30群作為對(duì)照組，保持實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組巢內(nèi)結(jié)構(gòu)基本一致。具體測(cè)定方法是：利用100只昆蟲(chóng)針制作一個(gè)圓形針?biāo)ⅲ▌偤媚芡瑫r(shí)刺死100個(gè)左右的封蓋子），然后分別對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的封蓋子脾進(jìn)行針刺處理，在處理后每隔2h進(jìn)行拍照計(jì)數(shù)清除出去的封蓋子數(shù)，連續(xù)測(cè)定12h，然后在處理24h的時(shí)候測(cè)定總的清除數(shù)。

1.2.4 蜂群抗囊狀幼蟲(chóng)病測(cè)定

分別對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行人為感染囊狀幼蟲(chóng)病病毒，10天后進(jìn)行抗病力測(cè)定。具體方法是：將感染囊狀病病毒的幼蟲(chóng)勻漿后均勻拌入稀糖水中，飼喂給實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，每次飼喂量保持500ml，連續(xù)飼喂3天，10天后，對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中的每群蜂隨機(jī)選取5個(gè)封蓋子區(qū)域（利用4.4×4.4cm2方格測(cè)定，每方格100個(gè)封蓋子）測(cè)定發(fā)病封蓋子數(shù)（根據(jù)典型癥狀判斷），統(tǒng)計(jì)每群蜂單位面積內(nèi)封蓋子的發(fā)病率[4]。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

使用Excel 2013版和SPSS 21.0進(jìn)行數(shù)據(jù)整理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。當(dāng)P<0.05時(shí)，差異達(dá)到顯著水平。

2 結(jié)果與分析

2.1 蜂群衛(wèi)生能力測(cè)定

蜂群清除能力如表1和圖1所示。從表1可知：在最初的4h內(nèi)，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組對(duì)死亡蛹的清除能力沒(méi)有顯著差異，在6h后，實(shí)驗(yàn)組的清除能力顯著高于對(duì)照組蜂群的清除能力，24h后最為明顯，實(shí)驗(yàn)組清除死亡蛹的百分比達(dá)到我們篩選具衛(wèi)生行為能力蜂群的標(biāo)準(zhǔn)。從圖1可以看出，隨著時(shí)間的推移，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組清除死亡蛹的個(gè)數(shù)明顯提高，但實(shí)驗(yàn)組的清除能力更強(qiáng)。即通過(guò)具衛(wèi)生行為蜂群的篩選，并經(jīng)過(guò)世代的繁育，可以培育出清除能力更強(qiáng)的蜂群。

表1 蜂群對(duì)針刺死亡蛹的清除率

表2 蜂群對(duì)人為感染囊狀幼蟲(chóng)病病毒的發(fā)病率

2.2 蜂群抗囊狀幼蟲(chóng)病能力測(cè)定

從表2可知：實(shí)驗(yàn)組蜂群發(fā)病率明顯低于對(duì)照組，且實(shí)驗(yàn)組蜂群發(fā)病程度顯著低于對(duì)照組蜂群發(fā)病程度。即通過(guò)對(duì)蜂群衛(wèi)生能力的篩選和選育，可以顯著提高蜂群的抗囊狀幼蟲(chóng)病能力。

3 討論

抗病育種已經(jīng)成為蜜蜂選育工作中最為重要的任務(wù)之一，其對(duì)現(xiàn)代養(yǎng)蜂業(yè)的發(fā)展具有重要意義[5]。本研究基于蜜蜂的衛(wèi)生行為，通過(guò)液氮冷凍的方法篩選出具有衛(wèi)生行為的中華蜜蜂蜂群，并對(duì)其清除能力和抗病能力進(jìn)行了研究，從其對(duì)死亡蛹的清除率及對(duì)人為感染囊狀幼蟲(chóng)病毒的發(fā)病率對(duì)比發(fā)現(xiàn)，蜂群對(duì)病害的抵抗能力與其清除能力有關(guān)，這和國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究一致[5-9]，表明通過(guò)對(duì)具衛(wèi)生行為的蜂群的選育，可以提高蜂群對(duì)囊狀幼蟲(chóng)病的抵抗能力。國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，蜂群對(duì)多數(shù)病害的抵抗能力與其自身的衛(wèi)生行為有關(guān)[10-13]。本研究中蜂群對(duì)刺死蛹的清除在起初的4h內(nèi)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組差異不顯著，而在6h后差異明顯，這和蜜蜂啟動(dòng)衛(wèi)生行為過(guò)程及清除能力的強(qiáng)弱基本一致。對(duì)人為感染蜂群發(fā)病率及發(fā)病程度實(shí)驗(yàn)研究中發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)組不管是發(fā)病率還是發(fā)病程度都明顯低于對(duì)照組，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)組蜂群具有更強(qiáng)的清除能力，能及時(shí)將感染幼蟲(chóng)清理出去，減少傳染，更好的執(zhí)行了衛(wèi)生行為。科學(xué)界研究證實(shí)，衛(wèi)生行為的遺傳基礎(chǔ)基于幾個(gè)基因的控制。Rothenbuhler[14]得出衛(wèi)生行為是由兩個(gè)隱性基因控制，包括打開(kāi)行為（u）和移走行為（r）。Moritz[15]在Rothenbuhler的基礎(chǔ)上提出3個(gè)數(shù)量性狀位點(diǎn)（u，r1和r2），再后來(lái)Lapidge[16]提出7個(gè)與衛(wèi)生行為相關(guān)的性狀位點(diǎn)。蜂群中蜜蜂執(zhí)行打開(kāi)和移走死蛹或染病幼蟲(chóng)，存在明顯區(qū)別，本研究中，不管是對(duì)死蛹的清除能力，還是對(duì)病害的抵抗能力，實(shí)驗(yàn)組都明顯強(qiáng)于對(duì)照組，這個(gè)都是受到數(shù)量性狀位點(diǎn)的控制，也就是實(shí)驗(yàn)組的衛(wèi)生行為相比對(duì)照組更為明顯。衛(wèi)生行為是蜂群抵抗外界病害的主要機(jī)制，具衛(wèi)生行為的蜂群能及時(shí)將病蟲(chóng)等清除出去，而非衛(wèi)生行為的蜂群不能及時(shí)清除病蟲(chóng)，從而導(dǎo)致病害的發(fā)生。因此，要從根本上減少病害對(duì)蜂群的危害，選育具衛(wèi)生行為的抗病蜂群不失為一種好的方法和途徑。