于曉銳 張德國(guó) 唐軍榮 羅旭璐 劉 云 趙 平

( 1. 西南林業(yè)大學(xué)西南山地森林資源保育與利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650233；2. 西南林業(yè)大學(xué)國(guó)家林業(yè)局西南地區(qū)生物多樣性保育重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，云南 昆明 650233)

樟葉越桔（Vaccinium dunalianum）為杜鵑花科（Ericaceae）越桔屬（Vaccinium）植物[1]，主要分布于云南西北部經(jīng)滇中高原至滇南、滇東南一帶[2-4]。其幼嫩葉芽呈錐狀，形似雀嘴，在云南彝族地區(qū)又稱之為“雀嘴茶”，據(jù)記載自明代開(kāi)始就作為一種茶代用品長(zhǎng)期飲用至今，具有祛風(fēng)除濕、舒筋活絡(luò)等功效[4]。樟葉越桔葉芽[5]和果實(shí)[6]中氨基酸、黃酮類等營(yíng)養(yǎng)成分豐富，存在明顯的高鉀低鈉特征。Zhao等[7]對(duì)樟葉越桔干燥葉芽進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，從中共分離鑒定了10余種咖啡酰熊果苷類衍生物，其中主要化學(xué)成分 6′-O-咖啡酰熊果苷（6′-O-caffeoylarbutin）的得率高達(dá)22%，可望作為熊果苷天然替代品資源加以應(yīng)用，具有重要的開(kāi)發(fā)價(jià)值。隨后，該研究組又圍繞其資源相繼開(kāi)展了化學(xué)分析[8-10]、生物活性[11]、成分制備[12-14]、組織培養(yǎng)[15]、基因克隆[16-19]、轉(zhuǎn)錄組[20]、內(nèi)生菌[21-22]等相關(guān)研究。

樟葉越桔目前仍處于野生狀態(tài)，且分布有限，隨著人們對(duì)雀嘴茶關(guān)注度的不斷提高，導(dǎo)致其連年遭受破壞性采摘，野生樟葉越桔的數(shù)量急劇減少。因此，開(kāi)展樟葉越桔的繁育研究顯得尤為重要，迄今為止，僅任國(guó)香等[23]初步開(kāi)展了不同處理方法對(duì)樟葉越桔種子萌發(fā)影響的研究。扦插育苗方法具有繁殖系數(shù)高、操作簡(jiǎn)便、成本低、保持品種優(yōu)良特性、提早開(kāi)花等優(yōu)點(diǎn)[24]。截至目前，有關(guān)樟葉越桔扦插的相關(guān)研究較少。本試驗(yàn)采用消毒方式、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度和施肥種類的四因素三水平正交試驗(yàn)組合對(duì)樟葉越桔嫩枝進(jìn)行處理，分別對(duì)各處理組合的生根率、發(fā)根數(shù)、根長(zhǎng)、新稍高度等指標(biāo)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析和比較，以期優(yōu)化樟葉越桔扦插技術(shù)，提高樟葉越桔扦插繁殖成活率，為進(jìn)一步樟葉越桔苗木的生產(chǎn)及應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

所用材料為2015年3月采自云南武定縣生長(zhǎng)良好的樹(shù)齡約20 a的樟葉越桔1年生春梢嫩枝。扦插試驗(yàn)在云南省昆明市西南林業(yè)大學(xué)林學(xué)院格林溫室內(nèi)進(jìn)行，內(nèi)搭小拱棚，設(shè)遮陽(yáng)網(wǎng)，通風(fēng)良好，無(wú)積水[25]。無(wú)水乙醇（分析純，廣東光華科技股份有限公司），NAA、ABT1和ABT3（化學(xué)純，北京艾比蒂（ABT）研究開(kāi)發(fā)中心）、尿素和奧西母液（葉面肥，購(gòu)于昆明斗南花市，主要成分：N（NH4-N、NO3-N）、P2O5、K2O、Mg、Cu、Zn）。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)試驗(yàn)?zāi)康模捎肔9（3）4正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，包括消毒方式（A）、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類（B）、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度（C）和施肥種類（D）4個(gè)因素，每因素設(shè)置3個(gè)水平（表1）。每組試驗(yàn)重復(fù)3次，共27個(gè)處理組合，每個(gè)處理各扦插50袋，每袋1株扦插苗，扦插苗合計(jì)1 350株。

1.2.2 扦插處理及管理

試驗(yàn)前將生紅土過(guò)篩后裝于10 cm×15 cm規(guī)格的黑色塑料營(yíng)養(yǎng)杯中，每個(gè)組合放3排，共50杯，苗床寬1.2 m，長(zhǎng)度根據(jù)需要而設(shè)定，用0.05% KMnO4溶液進(jìn)行消毒，將土壤澆透。每株穗條長(zhǎng)度為 5～8 cm，保留2～3個(gè)芽和葉片，剪好之后將所有扦插穗條置于水桶內(nèi)用水浸泡，以防失水。將浸泡后的穗條進(jìn)行隨機(jī)選取，每50株扎成1捆，置于燒杯中，在相應(yīng)燒杯中注入等量的水、3%乙醇、0.5% KMnO4。將消毒后的枝條按試驗(yàn)設(shè)計(jì)要求分別置于事先準(zhǔn)備好的燒杯中，分別注入不同濃度（50、100、200 mg/L）的不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑（NAA、ABT1、ABT3）的溶液，浸泡時(shí)間為 2 h。

扦插后，拉上遮蔭網(wǎng)控制光照強(qiáng)度，每天記錄溫濕度。插后棚內(nèi)溫度控制在20～25 ℃，每天13：00—15：00噴霧進(jìn)行控溫。每2周揭開(kāi)棚模，按試驗(yàn)設(shè)計(jì)要求在相應(yīng)組合內(nèi)用噴壺噴灑0.1%奧西母液、0.1%尿素溶液、清水，噴灑完畢后立即封嚴(yán)塑料膜。結(jié)合施肥時(shí)定期清除小棚內(nèi)雜草，以保證樟葉越桔插穗生根和生長(zhǎng)空間。同時(shí)觀察小拱棚內(nèi)基質(zhì)水分變化，適當(dāng)補(bǔ)水。

1.2.3 數(shù)據(jù)采集與分析

扦插試驗(yàn)時(shí)間為2015年3月至2015年8月，試驗(yàn)周期結(jié)束后對(duì)每個(gè)處理組合成活扦插苗的生根率、發(fā)根數(shù)、根長(zhǎng)和新稍高度進(jìn)行測(cè)定。利用Excel 2010和SPSS 17.0對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，若指標(biāo)間差異顯著或極顯著，則進(jìn)一步采用Duncan's 法進(jìn)行多重比較[26]。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理對(duì)嫩枝扦插性狀的影響

不同處理對(duì)樟葉越桔嫩枝生根率、發(fā)根數(shù)、根長(zhǎng)和新稍高度的影響結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可知，27個(gè)處理組合的生根率范圍為22.0%～42.7%，其生根率的差異不顯著（P＞0.05）。No.1（不消毒，50 mg/L NAA植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理，施肥種類0.1%奧西母液），No.4（3%乙醇消毒，100 mg/L NAA植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理，不施肥）和No.7（0.5% KMnO4消毒，200 mg/L NAA植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理，施肥種類0.1%尿素）的生根率均在30%以上，其中No.7的最高（42.7%）。上述3個(gè)處理組合所使用的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑均為NAA，其他因素水平均不相同，說(shuō)明NAA對(duì)樟葉越桔的扦插生根起著較為關(guān)鍵的作用。其他不同處理組合的生根率均在20%～30%之間，No.5的生根率最低（3%乙醇消毒，200 mg/L ABT1植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理，施肥種類0.1%奧西母液）。

不同處理組合間的根數(shù)和根長(zhǎng)均達(dá)到極顯著差異（P＜0.01），其中No.1的根數(shù)極顯著的多于其他處理組合，達(dá)到 6.77～7.63個(gè)，No.5和No.1的根長(zhǎng)極顯著地多于其他處理組合，分別達(dá)到2.89～8.83 cm和3.57～8.12 cm。采用不消毒的No.1、No.2和No.3的根數(shù)與其他組合達(dá)到顯著差異，表明不消毒對(duì)根系的發(fā)育起到輔助作用。施肥種類為0.1%奧西母液的No.1和No.5的根長(zhǎng)顯著高于其他組合，說(shuō)明0.1%奧西母液有利于根的伸長(zhǎng)。不同處理組合間新梢高度的差異不顯著（P＞0.05），No.1、No.2和 No.3的新梢高度均在平均值以上，表明不消毒有利于新梢的生長(zhǎng)。

2.2 影響嫩枝扦插的主導(dǎo)因子及優(yōu)水平組合

各因素水平的極差分析結(jié)果見(jiàn)表3。從表3可知，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類（B）是影響樟葉越桔生根率的主導(dǎo)因子，消毒方式（A）是影響樟葉越桔根數(shù)和新梢高度的主導(dǎo)因子，根長(zhǎng)的主導(dǎo)因子是施肥種類（D）。生根率因子的主次順序依次為：B＞D＞C＞A，生根率的理論優(yōu)水平組合是A3B1C3D2（0.5% KMnO4消毒，200 mg/L NAA植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理，施肥種類0.1%尿素），與實(shí)際最優(yōu)結(jié)果相一致。根數(shù)因子的主次順序依次為 ：A1＞C1＞D1＞B1， 根數(shù) 的 理論 優(yōu) 水 平 組 合 是A1B1C1D1（不消毒，50 mg/L NAA植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑處理，施肥種類為0.1%奧西母液），也與實(shí)際最優(yōu)結(jié)果相符。植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類與濃度對(duì)根長(zhǎng)的影響效果相同，根長(zhǎng)和新梢高度理論優(yōu)水平組合在實(shí)際中沒(méi)有出現(xiàn)，可能是因素水平間的交互作用所致。

表3 極差分析結(jié)果Table 3 Results of range analysis

2.3 扦插性狀隨因素水平的變化情況

由表4可知，消毒方式和植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度極顯著的影響根數(shù)（PA＜0.01，PC＜0.01），植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度和施肥種類對(duì)根長(zhǎng)產(chǎn)生極顯著影響（PC＜0.01，PD＜0.01），說(shuō)明植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度對(duì)扦插根的生長(zhǎng)有顯著影響，而且針對(duì)根數(shù)和根長(zhǎng)的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度最優(yōu)水平不同。說(shuō)明低濃度（50 mg/L）植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑更有利于發(fā)根，高濃度（200 mg/L）植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑有利于根的生長(zhǎng)。而因素水平變化對(duì)生根率和新梢高度2個(gè)指標(biāo)的影響均不顯著。

表4 扦插性狀隨因素水平的變化結(jié)果Table 4 The variation of cutting characters with factor and level

2.4 扦插性狀的相關(guān)性分析

樟葉越桔扦插苗生根性狀相關(guān)性分析結(jié)果見(jiàn)表5。從表5可知，生根率與根長(zhǎng)、根數(shù)無(wú)相關(guān)性，與新梢高度（R=-0.443，P＜0.01）呈現(xiàn)極顯著的負(fù)相關(guān)，說(shuō)明新稍高度和生根率相互起到抑制作用，新梢高度增長(zhǎng)的同時(shí)，消耗養(yǎng)分，生根率下降，與觀察到試驗(yàn)現(xiàn)象相符合。根數(shù)、根長(zhǎng)與新梢高度（R=0.218～0.274，P＜0.01）呈現(xiàn)極顯著的正相關(guān)關(guān)系，說(shuō)明根長(zhǎng)與根數(shù)起到相互促進(jìn)作用，地下部分與地上部分也是相互協(xié)同促進(jìn)，生根的同時(shí)，新梢也在生長(zhǎng)。

表5 測(cè)定指標(biāo)的相關(guān)系數(shù)Table 5 Correlation coefficient of tested indexes

3 結(jié)論與討論

本試驗(yàn)采用L9（3）4正交試驗(yàn)方法，考察了消毒方式、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度和施肥種類4個(gè)因素對(duì)樟葉越桔嫩枝扦插的影響。結(jié)果表明，不消毒、50 mg/L NAA處理和0.1%奧西母液施肥為樟葉越桔嫩枝扦插的最適條件。

許多試驗(yàn)研究表明，插穗本身的特性[27-28]和培養(yǎng)基質(zhì)、植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類及濃度、苗期施肥管理等因素[29-32]與扦插的成活率和生根情況等有著密切的關(guān)系。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)學(xué)者對(duì)越桔屬植物的扦插開(kāi)展了一些研究，發(fā)現(xiàn)用綠枝扦插的生根率優(yōu)于硬枝[33-35]，ABT1生根粉有利于兔眼藍(lán)莓（Vaccinium ashei）[36]和篤斯越桔（V. uliginosum）[37]生根，而IBA對(duì)篤斯越桔根系伸長(zhǎng)生長(zhǎng)有促進(jìn)作用[38]。本試驗(yàn)的9個(gè)處理組合生根率介于22.0%～42.7%，根數(shù)為3.15～7.20個(gè)，根長(zhǎng)為3.90～5.83 cm，新稍高度為3.24～4.57 cm，不同處理組合間的根數(shù)和根長(zhǎng)均達(dá)到極顯著差異（P＜0.01），同樣也發(fā)現(xiàn)植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑種類是影響樟葉越桔嫩枝扦插生根率的主導(dǎo)因子，這與廖優(yōu)江等[34]對(duì)同屬植物美國(guó)兔眼藍(lán)莓扦插生根結(jié)果相符，但呂躍東等[37]報(bào)道不同植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)篤斯越桔扦插生根率影響不明顯，可能與其所使用的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑濃度有關(guān)。此外，消毒方式是影響樟葉越桔嫩枝扦插根數(shù)和新稍高度的主導(dǎo)因子，這與羅建讓等[39]、武新琴等[40]關(guān)于百合（Lilium browniivar.viridulum）鱗片、月季（Rosa chinensis）扦插試驗(yàn)結(jié)果相一致；施肥種類是影響影響樟葉越桔嫩枝扦插根長(zhǎng)的主導(dǎo)因子，噴施0.1%奧西母液對(duì)根長(zhǎng)有促進(jìn)作用，這與張翼鴻[41]的雪松（Cedrus deodara）扦插育苗試驗(yàn)結(jié)果一致，在苗木的扦插過(guò)程中應(yīng)適當(dāng)追施葉面肥。本次試驗(yàn)所采用的基質(zhì)為昆明過(guò)篩紅土，由于其透氣性較差，可能是導(dǎo)致扦插生根率偏低的原因，值得進(jìn)一步開(kāi)展其不同基質(zhì)扦插的對(duì)比試驗(yàn)加以驗(yàn)證。