胡 慶，張山起2，趙 超，李淑貞，顧 宇

糖尿病是引起動脈粥樣硬化的主要原因之一，據(jù)文獻(xiàn)報道，在40歲以上人群中病程5年以上的2型糖尿病病人并發(fā)血管病變達(dá)90.8%，并發(fā)血管病的發(fā)病率是非糖尿病的20倍[1]。糖尿病血管病變，即在糖尿病狀態(tài)下的血管重構(gòu)，是糖尿病心腦血管并發(fā)癥的主要病理學(xué)基礎(chǔ)，其發(fā)病機制尚未完全明確，臨床治療也沒有有效的方法。玉液湯記載于《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》，由清代著名醫(yī)家張錫純創(chuàng)立，具有益氣滋陰、固腎止渴之功，廣泛應(yīng)用于糖尿病、高血壓等疾病，但對糖尿病血管病變的療效報道較少。生脈散出自《醫(yī)學(xué)啟源》，是治療氣陰兩虛證的常用方，近年來常用于治療心血管病變等屬于氣陰兩虛者。針對糖尿病血管病變氣陰兩虛、瘀血阻絡(luò)的病機，本研究在玉液湯、生脈散原方基礎(chǔ)上加減化裁組成通絡(luò)玉液湯，行益氣養(yǎng)陰、活血通絡(luò)之功，以期達(dá)到治療糖尿病血管病變的作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物與分組 清潔級健康SD大鼠72只，體重170～190 g[購自天津軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院，編號：SCXX-(軍)2009-003]。隨機分為8組，每組12只。分別為：正常對照4周組、8 周組；糖尿病4周組、8周組；通絡(luò)玉液湯4周組、8周組。

1.2 藥物與試劑 通絡(luò)玉液湯組方：生曬參8 g，生黃芪30 g，生山藥20 g，麥冬15 g，知母10 g，花粉10 g，葛根10 g，五味子9 g，雞內(nèi)金6 g，丹參15 g，當(dāng)歸尾15 g，地龍8 g，據(jù)處方60 kg人臨床1 d劑量。以上中藥均購自滄州同仁堂藥店。將所購中藥飲片浸泡，水煎煮30 min，過濾；再加水煎煮30 min，過濾，兩次濾液合并，并濃縮成100%的液體(每毫升含原方生藥1.7 g)，4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 實驗方法

1.3.1 動物模型建立 72只大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，隨機選取24只，其中12只作為正常對照4 周組，另12只作為正常對照8周組，普通飼料喂養(yǎng)；其余48只作為造模組給予高糖高脂飼料(20.0%蔗糖、10.0%豬油、2.5%膽固醇和67.5%基礎(chǔ)飼料)分籠喂養(yǎng)4周。第5周造模組大鼠禁食12 h，給予一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ，購自Sigma公司)30 mg/kg(將STZ溶于0.1 mol/L、pH 4.4的檸檬酸緩沖液中，終濃度為2%，在冰水中進(jìn)行，現(xiàn)配現(xiàn)用，5 min內(nèi)用完)。注射72 h后采集尾尖血(禁食12 h)，檢測血糖，血糖>16.7 mmol/L確定為2型糖尿病模型；對照組僅給予等量檸檬酸鈉緩沖液(pH 4.4)腹腔注射。將符合2型糖尿病標(biāo)準(zhǔn)的大鼠分籠繼續(xù)原飼料喂養(yǎng)，自由飲水。6周后即成糖尿病血管病變模型，模型大鼠均以原飼料再分別喂養(yǎng)4周(12只)和8周(12只)。另24只作為通絡(luò)玉液湯組，12只治療4周，其余12只治療8周。

1.3.2 藥物干預(yù) 通絡(luò)玉液湯組灌服通絡(luò)玉液湯，劑量為17 g/(kg·d)；正常對照組和糖尿病組每日灌服相應(yīng)劑量的生理鹽水，每周根據(jù)大鼠體重以及飼料消耗來調(diào)整藥物劑量。

1.3.3 標(biāo)本采集及處理 每只大鼠以水合氯醛300 mg/kg腹腔注射麻醉，頸總動脈采血，備用。迅速在無菌條件下取出腹主動脈，用10%中性甲醛固定3 d，石蠟包埋切片，進(jìn)行常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色，觀察其形態(tài)學(xué)變化，用計算機彩色病理圖像分析系統(tǒng)(SPOT COOL CCD軟件)采集圖像，MAGEPRO plus 4.1 軟件分析圖像，測量腹主動脈中膜厚度和內(nèi)徑、中膜橫切面積，計算中膜厚度/內(nèi)徑的比值，用以估算管壁增厚程度。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠腹主動脈管壁的變化(見表1)

組別只數(shù)中膜厚度(μm) 中膜內(nèi)徑(μm) 中膜厚度/內(nèi)徑(%) 中膜橫切面積(μm2×103)正常對照4周組 12 87.42±13.64 1 236.43±55.28 5.46±1.17 486.53±82.81正常對照8周組 12 85.36±14.71 1 149.86±74.17 5.37±0.96 460.41±71.37糖尿病4周組 12 99.82±11.451)1 026.37±95.261)6.93±1.881)556.86±92.421)糖尿病8周組 12 107.17±26.451)927.56±62.811)7.02±1.471)572.45±86.561)通絡(luò)玉液湯4周組 12 89.22±9.512)1 196.57±84.272)5.31±2.562)497.12±59.872)通絡(luò)玉液湯8周組 12 90.59±8.672)1 181.35±95.662)5.47±0.952)473.09±39.642)

與正常對照組同期比較，1)P<0.05；與同時間點糖尿病組比較，2)P<0.05

2.2 各組大鼠腹主動脈HE染色切片管腔、管壁的變化 光學(xué)顯微鏡(日本 Olympus)觀察HE染色切片，正常對照組(4周、8周)大鼠腹主動脈內(nèi)皮細(xì)胞扁平、完整，緊貼于平滑的內(nèi)彈力板上，中膜平滑肌細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞核大小均一，胞漿染色均勻。糖尿病組(4周、8周)血管壁水腫，可見脂類物質(zhì)沉積，局部平滑肌增生，平滑肌細(xì)胞排列稀疏、紊亂、核大小不一、甚不規(guī)則，內(nèi)皮細(xì)胞腫脹，增生平滑肌細(xì)胞處彈力板厚薄不勻、排列紊亂，呈波浪狀，甚至可見彈力板出現(xiàn)斷裂和分離現(xiàn)象，糖尿病8周組可見輕微向管腔內(nèi)凸起。通絡(luò)玉液湯組(4周、8周)平滑肌細(xì)胞排列、細(xì)胞核形狀均較糖尿病組明顯好轉(zhuǎn)，而且很少見到內(nèi)彈力板破壞現(xiàn)象。詳見圖1。

圖1 各組大鼠腹主動脈管壁變化(10×40倍)

3 討 論

糖尿病時動脈病變彌散、廣泛，這可能是糖尿病病人更易罹患動脈粥樣硬化的主要原因。研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病時血管結(jié)締組織基質(zhì)成分顯著改變，高糖誘導(dǎo)的膠原過度表達(dá)與血管壁纖維化、硬化高度相關(guān)，血管纖維化使動脈僵硬度增加、順應(yīng)性降低和動脈管壁增厚，這些變化在細(xì)胞水平主要表現(xiàn)為內(nèi)皮細(xì)胞損傷、平滑肌增殖和纖維組織增生等[2]，即為血管重構(gòu)。本研究結(jié)果顯示，糖尿病對大動脈的影響主要表現(xiàn)為內(nèi)皮細(xì)胞損傷、血管平滑肌增生、彈性纖維紊亂、大量脂質(zhì)沉積，由此引發(fā)的血流紊亂，最終造成血流動力學(xué)障礙，成為動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的基礎(chǔ)[3-4]。

本研究結(jié)果提示，通絡(luò)玉液湯能明顯減輕高糖對血管壁的損害，能抑制糖尿病SD大鼠的血管重構(gòu)，但對其機制還是不清楚，認(rèn)為可能與以下幾方面有關(guān)：①糖尿病血管病變發(fā)生原因主要源于病人血糖升高導(dǎo)致蛋白質(zhì)非酶糖基化反應(yīng)增加、多元醇的代謝功能發(fā)生亢進(jìn)，加之自由基產(chǎn)生較多等因素所致，造成病人血管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生損傷、平滑肌增殖，管腔狹窄、動脈粥樣硬化加重，致使病人血流動力學(xué)發(fā)生改變[5]。通絡(luò)玉液湯能降低血糖、血脂水平，進(jìn)而減少內(nèi)彈力膜蛋白和內(nèi)皮細(xì)胞膜糖基化，減輕平滑肌增殖，同時減輕高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的氧化作用[6]。②通絡(luò)玉液湯作用于血管激活過氧化物酶體增生物激活受體γ(PPAR-γ)進(jìn)而調(diào)整與血管重塑相關(guān)因子——刺激細(xì)胞因子和生長因子的表達(dá)，抑制細(xì)胞外基質(zhì)沉積，抑制血管中膜增厚，延緩了動脈硬化的發(fā)生[7]。③通絡(luò)玉液湯通過提高胰升糖素樣肽1水平，抑制血管平滑肌細(xì)胞的增殖，發(fā)揮抗動脈硬化作用[8]。④腫瘤壞死因子具有促進(jìn)血管內(nèi)平滑肌的浸潤、聚集、增生的作用[9]，通絡(luò)玉液湯通過抑制腫瘤壞死因子的表達(dá)減少平滑肌增殖，抑制中膜增厚，減輕了動脈硬化[10]。⑤通過升高一氧化氮(NO)水平、總一氧化氮合酶(NOS)水平抑制血管緊張素Ⅱ誘導(dǎo)的血管平滑肌增殖[11]。⑥脂肪代謝紊亂也可以促進(jìn)血管平滑肌增殖，并使脂質(zhì)在動脈內(nèi)膜中沉積，更易使單核巨噬細(xì)胞沉積于血管壁，促進(jìn)粥樣斑塊形成，最終致管壁增厚變硬、管腔狹窄[12]。今后的工作重點是進(jìn)一步闡明通絡(luò)玉液湯作用于血管重構(gòu)的有效成分、作用部位和作用途徑，期望能為糖尿病的治療提供理論基礎(chǔ)和途徑。