何邵波 ,何躍華,伍美蘭

(邵陽學(xué)院 1.醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院；2.醫(yī)學(xué)院；3.附屬第二醫(yī)院，湖南 邵陽，422000)

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)是引起乙型肝炎的病原體。據(jù)國內(nèi)外研究統(tǒng)計(jì)報(bào)道，全球約有1/3的人群曾經(jīng)感染過HBV。該病毒干擾肝功能并造成病理損害，少部分感染者無法消滅該病毒從而成為慢性感染者[1]。慢性HBV感染表現(xiàn)多樣，可以為攜帶者或慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)，也可以進(jìn)展為肝硬化，甚至是肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)。據(jù)有關(guān)研究報(bào)道，我國目前大約有CHB患者2 000萬例[2-3]。晚期肝硬化和肝癌常常是CHB患者致死的原因，但目前尚缺乏經(jīng)濟(jì)實(shí)惠、有效地反映肝衰竭預(yù)后的特異指標(biāo)。視黃醇結(jié)合蛋白4(retinol binding protein 4，RBP4)主要由肝細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分泌，在協(xié)助視黃醇發(fā)揮生理功能中起著不可替代的作用[4-5]。已經(jīng)有研究表明，血清RBP4水平升高與非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)和肝臟脂肪積累增加之間存在一定的關(guān)系[6]，因此RBP4與肝病的關(guān)系越來越受到人們的關(guān)注。但目前有關(guān)RBP4與HBV感染引起肝損傷的報(bào)道較少。本研究旨在探討HBV感染者血清RBP4水平與不同類型肝臟疾病間的關(guān)系及與血清ALT、TBIL的相關(guān)性，以期為臨床HBV感染的早期診斷、治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取邵陽學(xué)院附屬第二醫(yī)院2017年1月～2018年1月感染科確診的乙型肝炎肝硬化患者(LC)18例，其中男10例，女8例，平均年齡(45.30±3.5)歲；重型肝炎肝衰竭患者(LF)15例，其中男9例，女6例，平均年齡(42.19±4.2)歲；CHB患者25例，其中男17例，女8例，平均年齡(36.91±6.3)歲；并抽取邵陽學(xué)院附屬第二醫(yī)院健康體檢者(Con)20例作為對照組，其中男13例，女7例，平均(34.59±4.4)歲。CHB、LC 診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會慢性乙型肝炎防治指南[7]，LF診斷標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)中華醫(yī)學(xué)會肝衰竭診療指南[8]，Con組入選標(biāo)準(zhǔn)：排除肝疾病、腎疾病、糖尿病、胰島素抵抗等相關(guān)性疾病，近2個(gè)月未服用任何藥物者。且這些研究組之間在體質(zhì)量指數(shù)(BMI)比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本研究采取的方法及過程均經(jīng)醫(yī)院倫理委員會的審批及同意。

1.2 儀器試劑

RBP4 ELISA試劑盒購自上海高創(chuàng)化學(xué)科技有限公司；多功能酶標(biāo)儀(美國 Thermo Scientific 公司)；全自動(dòng)生化分析儀(日立7600-020ISE)；HBV-DNA定量檢測試劑盒購自上?？迫A生物工程股份有限公司。

1.3 血清樣本收集

靜脈采集空腹受試者血標(biāo)本6 mL，以3 000 r/min離心10 min，分離出全部血清，部分血清分裝置于-30 ℃冰箱中備檢RBP4及HBV-DNA載量。剩余血清置于普通試管，采用日立7600-020ISE全自動(dòng)生化分析儀檢測血清谷氨酸氨基轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)及其他生化指標(biāo)。

1.4 RBP4測定

采用RBP4 ELISA試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒中試劑操作說明書操作。酶標(biāo)儀的檢測波長450 nm，并通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各樣本濃度。

1.5 RT-PCR檢測血清HBV-DNA載量

將收集的患者血清按照HBV-DNA定量檢測試劑盒說明書制備檢測樣本，并通過熒光定量PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行檢測，最后計(jì)算血清中HBV-DNA載量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 HBV感染者血清RBP4的表達(dá)水平

結(jié)果顯示，LC、LF以及CHB組患者血清RBP4含量顯著低于正常對照組(P<0.05)，LF組患者血清RBP4含量顯著低于CHB組(P<0.05)。詳見表1。

表1 各組HBV感染者血清RBP4水平比較Table 1 Serum RBP4 levels in groups patients with HBV infection

注：與Con組相比，*P<0.05；與CHB組相比，#P<0.05

2.2 HBV感染者血清RBP4與血清HBV-DNA載量的相關(guān)性

LC組患者血清RBP4含量與HBV-DNA載量呈負(fù)相關(guān)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而LF、CHB組患者血清RBP4含量與HBV-DNA載量也呈一定的負(fù)相關(guān)關(guān)系，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見圖1。

2.3 HBV感染者ALT、TBIL水平

結(jié)果顯示，LC、LF以及CHB組患者血清ALT、TBIL含量顯著高于正常對照組(P<0.05)。詳見表2。

圖1 HBV感染患者體內(nèi)RBP4與血清HBV-DNA載量的相關(guān)性Fig.1 Correlation between serum HBV-DNA load and RBP4 in patients with HBV infection

表2 各組HBV感染者血清ALT、TBIL水平比較Table 2 Serum ALT、TBIL levels in groups patients with HBV infection

注：與Con組相比，*P<0.01

2.4 HBV感染者ALT、TBIL與RBP4水平的相關(guān)性

LC、LF組患者血清RBP4含量與ALT、TBIL存在負(fù)相關(guān)關(guān)系，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CHB組患者血清RBP4含量與ALT、TBIL的相關(guān)性比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。詳見圖2。

3 討論

RBP4屬于視黃醇結(jié)合蛋白(RBP)家族中的分泌型RBP，主要由肝細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分泌，因此，RBP4與肝病的關(guān)系備受人們的關(guān)注[4]。同時(shí)RBP4作為一種循環(huán)性脂肪細(xì)胞因子，在胰島素抵抗(insulin resistance，IR)狀態(tài)下，RBP4的表達(dá)會顯著高于正常水平。RBP4誘導(dǎo)細(xì)胞炎癥因子表達(dá)增高，可引起NAFLD的發(fā)生發(fā)展，因此，血清RBP4水平升高與NAFLD和肝臟脂肪積累增加之間存在一定的關(guān)系[6]。

圖2 HBV感染患者ALT、TBIL與RBP4水平的相關(guān)性Fig.2 Correlation between ALT,TBIL and RBP4 levels in HBV infected patients

有研究證實(shí)，慢性肝炎患者血清RBP4偏低，急性肝炎患者血清RBP4水平會顯著降低，提示RBP4可能間接反應(yīng)肝的損傷程度[9]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)LC、LF及CHB組患者血清RBP4含量顯著低于正常Con組(P<0.05)，提示RBP4可能參與了HBV感染引起肝損傷，導(dǎo)致肝臟生物合成RBP4的能力降低。LF組患者血清RBP4含量顯著低于CHB組(P<0.05)，則表示RBP4可能反映了肝損傷的程度。

有研究表明，HCC患者血清中RBP4 mRNA的表達(dá)低于非癌性肝炎患者，血清RBP4 mRNA與血液HBV-DNA載量相關(guān)性較差，因?yàn)镽BP4主要在肝臟組織中受修飾或轉(zhuǎn)錄后調(diào)控[10]。本研究發(fā)現(xiàn)LC、LF、CHB組患者血清RBP4含量與HBV-DNA載量均存在一定的負(fù)相關(guān)關(guān)系，進(jìn)一步證實(shí)了RBP4可以反映HBV的感染程度。

ALT是臨床常用的轉(zhuǎn)氨酶之一，廣泛存在于肝臟，其次為腎臟、心肌、骨骼肌等多種組織器官中[11]。肝中ALT絕大多數(shù)存在于細(xì)胞質(zhì)中，只有少量在線粒體中，其細(xì)胞內(nèi)濃度遠(yuǎn)高于血清1 000～3 000倍。因此，只要有1%的肝細(xì)胞壞死，血清ALT就可增高1倍，故ALT是反映肝功能損害最敏感的指標(biāo)之一。本研究中LC、LF以及CHB組患者血清ALT分別高達(dá)(167.80±98.22)、(249.28±102.89)、(119.24±101.42) μ/L，均顯著高于對照組(P<0.01)，結(jié)果與相關(guān)報(bào)道相符[12]。

TBIL是血清中結(jié)合膽紅素和未結(jié)合膽紅素的總和。膽紅素的代謝主要在肝臟進(jìn)行，TBIL水平可反映肝細(xì)胞對膽紅素的攝取、結(jié)合和排泄功能等[13]。本研究通過檢測LC、LF以及CHB組患者血清TBIL，分別為(79.56±41.24)、(113.87±101.56)、(56.12±22.98) μmol/L，明顯高于對照組(P<0.01)，提示肝臟代謝功能受損，與劉睿等結(jié)果[13]報(bào)道相符。

本研究發(fā)現(xiàn)LC、LF組患者血清RBP4含量與ALT、TBIL存在負(fù)相關(guān)關(guān)系，其r值分別為-0.514、-0.694、-0.437、-0.577，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示RBP4可能參與了CHB肝硬化及重型肝炎肝衰竭的發(fā)生過程。類似的研究也表明急、慢性肝炎患者體內(nèi)RBP4含量均會顯著降低[9]。

本研究表明，HBV感染者血清RBP4水平可反映HBV的感染程度及肝損傷的程度，并證實(shí)血清RBP4水平與ALT、TBIL存在一定的相關(guān)性。因此，監(jiān)測HBV感染者血清RBP4水平對于及時(shí)診斷治療HBV感染具有一定的臨床意義。