杜改梅 胡志華 韓正強(qiáng) 張玉紅 晏文梅 方光遠(yuǎn) 蔣加進(jìn)

摘要：旨在探討中藥添加劑對高脂飲食小鼠脂肪沉積的影響。將30只健康雄性昆明小鼠隨機(jī)分為3組：對照組、高脂飲食組（HF）和高脂飲食+中藥組（HC），采用高脂飼料喂養(yǎng)的方法建立肥胖小鼠模型，并通過持續(xù)給藥觀察中藥添加劑對肥胖小鼠脂肪沉積的影響。試驗期為6周，試驗結(jié)束后處死小鼠，測量小鼠體質(zhì)量、體脂含量和肝臟質(zhì)量。結(jié)果表明，2周時HF組和FC組小鼠的體質(zhì)量顯著高于對照組，5周時FC組小鼠的體質(zhì)量出現(xiàn)下降，并與對照組相比差異不顯著;6周時，F(xiàn)C組小鼠的腎周脂肪和腸系膜脂肪含量均顯著低于HF組，而與對照組相比差異不顯著;肝臟指數(shù)沒有組間差異性。由結(jié)果可知，中藥添加劑有效降低了高脂飲食小鼠的脂肪沉積量。

關(guān)鍵詞：中藥添加劑;肥胖;小鼠;脂肪沉積;高脂飲食

中圖分類號： S858.91;S853.7 ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

文章編號：1002-1302（2019）16-0183-03

收稿日期：2018-06-10

基金項目：江蘇高?！扒嗨{(lán)工程”項目。

作者簡介：杜改梅（1976—），女，山西朔州人，博士，教授，主要從事中獸醫(yī)學(xué)、營養(yǎng)和消化生理方面的研究。

目前，隨著人們對膳食結(jié)構(gòu)要求和保健意識的逐漸提高，消費者對肉品質(zhì)有了更高的要求。大量動物脂肪的形成不僅僅影響飼料的利用率，降低動物肉品質(zhì)，還會對消費者的健康造成嚴(yán)重的危害。隨著人們生活水平的不斷提高，肉蛋奶的食用量日劇增加，過多脂肪的攝入是導(dǎo)致人類肥胖癥和心血管疾病發(fā)病率逐年上升的重要因素。肥胖人群是脂肪肝、糖尿病、高血脂、心腦血管疾病的高危人群，脂肪不僅對人體健康具有致病性，還具有致死性[1-3]。因此，如何降低體脂含量、促進(jìn)脂肪的分解已成為目前研究人員和消費者共同關(guān)注的熱點，也是降低高脂血癥的方法之一。近年來，在臨床上控制動物脂肪沉積的方法有諸多報道，但多以抗生素和應(yīng)用激素等藥物為主，雖然療效確切，但作用途徑單一，并且大量抗生素的殘留對人體造成了大量不良影響[4-7]。中獸藥理論在調(diào)控脂肪沉積方面能夠通過多途徑和多靶點的優(yōu)勢發(fā)揮廣泛作用，效果較好，天然，毒副作用小，容易得到消費者的接受。本研究旨在探討中藥添加劑對高脂飲食小鼠體脂沉積的調(diào)節(jié)作用，為研究開發(fā)具有確切降脂作用的中藥添加劑提供有效的理論支撐和科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

健康雄性昆明小白鼠30只，28日齡，體質(zhì)量為19～22 g。

1.2 試驗方法

1.2.1 中藥復(fù)方湯劑的制備

中藥復(fù)方制劑由金陵科技學(xué)院中獸醫(yī)實驗室配制。藥物為澤瀉、山楂、甘草等按一定比例組成中藥復(fù)方，煎煮使其最終濃度為1 mg/mL，離心得到藥物上清液，高壓裝瓶備用。

1.2.2 動物試驗

小鼠試驗前先適應(yīng)性飼喂1周，按照體質(zhì)量平均分為3組，每組10只，分別為對照組（CON），飼喂正常小鼠飼料和自來水;高脂飲食組（HF），飼喂含20%豬油的高脂肪飼料和飲用5%蔗糖水;高脂飲食+中藥組（FC），飼喂與HF組相同的高脂飼料和蔗糖水，3周后開始灌服中藥復(fù)方添加劑，1次/d，連服3周。試驗期為6周。采用自然通風(fēng)、自由采食和飲水的方式飼喂小鼠。每周測量體質(zhì)量1次，試驗結(jié)束后處死所有小鼠，分離并稱量小鼠腎周脂肪、腸系膜脂肪和肝臟質(zhì)量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件統(tǒng)計，差異顯著性檢驗采用獨立樣本t檢驗和單因子方差分析[One-Way ANOVA，LSD（最小顯著性差異法）]。

2 結(jié)果與分析

2.1 肥胖模型小鼠的日增質(zhì)量

由圖1可知，飼喂高脂飼料和5%蔗糖水3周后，HF組和FC組小鼠的平均日增質(zhì)量均顯著高于對照組（P<0.05），且分別是對照組小鼠平均日增質(zhì)量的2.02倍和1.86倍。在肥胖模型建立試驗中觀察發(fā)現(xiàn)，HF組和FC組的所有小鼠皮毛光滑，體型肥胖。

2.2 中藥添加劑對小鼠體質(zhì)量的影響

由圖2可知，在飼喂高脂飲食后1周后開始，HF組小鼠的體質(zhì)量一直呈穩(wěn)定升高的趨勢，且在2～6周均顯著高于對照組。FC組3周后開始灌服中藥添加劑，小鼠體質(zhì)量出現(xiàn)下降，并從試驗后4周開始顯著低于HF組，但在4周時仍顯著高于對照組。5周后，F(xiàn)C組小鼠的體質(zhì)量顯著低于HF組，但與對照組間差異不顯著。這表明中藥添加劑對小鼠的體質(zhì)量有明顯的下調(diào)作用。

2.3 中藥添加劑對高脂飲食小鼠腎臟脂肪質(zhì)量的影響

由圖3可知，給高脂飲食小鼠灌服中藥后，F(xiàn)C組小鼠的腎周脂肪質(zhì)量出現(xiàn)下降趨勢，且與HF組相比顯著降低 0.07 g，與對照組差異不顯著。這表明高脂飲食建立的小鼠模型中脂肪質(zhì)量的確有顯著升高，且本研究的中藥添加劑對腎周脂肪的沉積具有明顯的抑制作用。

2.4 中藥添加劑對高脂飲食小鼠腸系膜脂肪質(zhì)量的影響

由圖4可知，給小鼠灌服中藥后，F(xiàn)C組小鼠的腸系膜脂肪質(zhì)量顯著低于HF組，是HF組的67%。這表明高脂肪飼料可以顯著提高動物體內(nèi)脂肪含量，而該中藥添加劑對脂肪具有顯著的動員降解作用。FC組與對照組相比，差異不顯著，推測這可能與藥物作用的時間長短有關(guān)，延長中藥的作用時間有可能出現(xiàn)FC脂肪質(zhì)量下降更明顯的情況，這有待于后續(xù)進(jìn)行藥物最佳灌服時間的研究探索。

2.5 中藥添加劑對高脂飲食小鼠肝臟指數(shù)的影響

由圖5可知，與對照組相比，HF組和FC組小鼠的肝臟指數(shù)均沒有發(fā)生顯著變化，這表明高脂飲食沒有影響到肝臟功能，且中藥添加劑對小鼠肝臟沒有毒副作用。

3 討論

肥胖是一種以脂肪過度累積為特征的慢性代謝疾病，是導(dǎo)致心腦血管病的高危因素，會對人類的健康造成較大危害[8-9]。肥胖能夠引發(fā)糖尿病、?脂肪肝、心血管疾病， 甚至癌癥等多種疾病[10]。大量攝入脂肪是誘發(fā)肥胖的重要原因之一，而目前消費者餐桌上的肉蛋奶已成為一日三餐的主食品，因此，降低動物脂肪、提高動物產(chǎn)品質(zhì)量已成為當(dāng)前研究的熱點問題。建立肥胖動物模型是研究調(diào)節(jié)脂肪沉積的中藥添加劑的前提條件，只有成功建立肥胖動物模型才能保證后續(xù)研究的進(jìn)一步開展。本研究通過給小鼠飼喂高脂飼料和飲用5%蔗糖水，3周后高脂飲食組小鼠的平均日增質(zhì)量升高為對照組的2.02倍，體質(zhì)量也顯著高于對照組，證明肥胖小鼠模型建立成功，這與之前的一些研究結(jié)果[11-12]相一致。飼喂高脂飼料制造肥胖模型的機(jī)制是飼喂高脂飼料后，動物能量攝入過剩，從而發(fā)展成肥胖，這正與人類肥胖具有很好的可比性。高脂飼料的組方有很多種，主要由油脂類物質(zhì)和飼料相混合而成[13]，該方法為今后的降脂研究奠定了重要基礎(chǔ)。

研究表明，抗生素、應(yīng)用性激素和脂肪膜抗血清均有較好的降低動物脂肪沉積的作用[14-16]。但由于這些方法均存在一定的弊端，因此目前更多有關(guān)調(diào)節(jié)脂肪沉積的研究集中于天然無毒副作用的中藥上。中藥調(diào)節(jié)脂肪沉積的研究較多，但由于中藥的配伍禁忌原則，不同復(fù)方的調(diào)節(jié)脂肪的作用及機(jī)制各不相同，效果也各有差異。研究證實，高密度脂蛋白（HDL）升高能夠調(diào)節(jié)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運，可將肝臟外組織的膽固醇運送至肝臟進(jìn)行代謝，促進(jìn)脂質(zhì)排泄，防止膽固醇在肝臟外組織或血管壁堆積而形成冠心病、動脈粥樣硬化等疾病[17]。葛根芩連湯對大鼠血脂含量具有顯著的降低作用，不同劑量的葛根芩連湯均能顯著降低大鼠血清總膽固醇（TC）、低密度脂層蛋白膽固醇（LDL-C）水平，升高高密度脂層蛋白膽固醇（HDL-C）水平[18]。筆者所在課題組曾研究發(fā)現(xiàn)，山楂等中藥復(fù)方制劑可以有效提高血清中游離脂肪酸的含量[19]。蟲草素可通過升高HDL有效清除大鼠血清中高濃度的TG和LDL，促進(jìn)外周脂肪的分解代謝，減少體內(nèi)白色脂肪的堆積[20]。本研究以中醫(yī)藥學(xué)理論和現(xiàn)代醫(yī)學(xué)理論為指導(dǎo)，根據(jù)藥物的性能和配伍禁忌原則，在前期研究的基礎(chǔ)上，改進(jìn)了調(diào)節(jié)脂肪沉積的中藥復(fù)方。研究發(fā)現(xiàn)，該中藥添加劑能有效地降低高脂飲食導(dǎo)致的肥胖小鼠的體脂質(zhì)量，且對肝臟指數(shù)沒有影響，該復(fù)方中澤瀉具有重要的發(fā)揮動員脂肪分解的作用，山楂通過活血化瘀等作用參與動物體內(nèi)脂肪代謝的調(diào)節(jié)，與澤瀉和其他藥物協(xié)同完成脂肪沉積的調(diào)控，而上述研究中蟲草素通過改善新陳代謝、調(diào)血脂等作用來達(dá)到降解脂肪的作用，葛根芩連湯通過葛根素調(diào)節(jié)脂肪代謝，黃芩和黃連清熱燥濕，配伍使用可降低血清TC水平[18，20]。

參考文獻(xiàn)：

[1]崔曉曼，于海寧，徐潔嵐，等. 黃櫻椒提取物干預(yù)脂肪代謝的實驗動物研究[J]. 浙江大學(xué)學(xué)報（農(nóng)業(yè)與生命科學(xué)版），2013，39（3）：335-342.

[2]呂志偉，馬云霞，孫 澤. 脂肪代謝的調(diào)節(jié)因素及運動對脂肪代謝的影響[J]. 伊犁師范學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版），2010（1）：56-60.

[3]Spiegelman B M. Banting lecture 2012：regulation of adipogenesis：toward new therapeutics for metabolic disease[J]. Diabetes，2013，62（6）：1774-1782.

[4]王俊東，董希德. 畜禽營養(yǎng)代謝與中毒病[M]. 北京：中國林業(yè)出版社，2001：780-782.

[5]魏建英，張 然，丁 勝，等. 抗生素類飼料添加劑在畜牧業(yè)中的使用[J]. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)科技，2004（4）：52-53.

[6]孫豐梅，鄭志新，趙瑞平. 瘦肉精與肉類食品安全[J]. 河北北方學(xué)院學(xué)報（自然科學(xué)版），2005，21（6）：62-64.

[7]Kim J，Lee Y J，Kim J M，et al. PPAR gamma agonists induce adipocyte differentiation by modulating the expression of Lipin-1，which acts as a PPAR gamma phosphatase[J]. International Journal of Biochemistry & Cell Biology，2016，81（A）：57-66.

[8]Bischoff S C，Boirie Y，Cederholm T A，et al. Towards a multidisciplinary approach to understand and manage obesity and related diseases[J]. Clinical Nutrition，2017，36（4）：917-938.

[9]Afshin A，F(xiàn)orouzanfar M H，Reitsma M B，et al. Health effects of overweight and obesity in 195 countries over 25 years[J]. The New England Journal of Medicine，2017，377（15）：1496-1511.

[10]Hruby A，Manson J E，Qi L，et al. Determinants and Consequences of obesity[J]. American Journal of Public Health，2016，106（9）：1656-1662.

[11]劉 芳，高南南，楊潤梅，等. 不同品系小鼠肥胖模型比較及C57BL/6J小鼠肥胖機(jī)制研究[J]. 中國藥理學(xué)通報，2013，29（3）：360-365.

[12]Levin B E，Dunnmeynell A A，Balkan B，et al. Selective breeding for diet-induced obesity and resistance in Sprague-Dawley rats[J]. The American Journal of Physiology，1997，273：725-730.

[13]胡益僑. 肥胖癥的治療方法研究進(jìn)展[J]. 中國保健營養(yǎng)（中旬刊），2012（4）：648.

[14]Flint D J. Immunological manipulation of adiposity[J]. Proceedings of the Nutrition Society，1992，51（3）：433-439.

[15]姚浪群，佟建明，霍啟光. 飼用抗生素與動物免疫機(jī)能研究進(jìn)展[J]. 飼料博覽，2000（10）：30-32.

[16]賈立軍. 家禽飼料中禁用抗生素類促生長劑帶來的問題和對策[J]. 中國家禽，2001，23（15）：4-6，20.

[17]鄭 麗，侯彩云，任發(fā)政. 白茶壽眉預(yù)防小鼠肥胖作用研究及安全性評價[J]. 茶葉科學(xué)，2017，37（6）：586-596.

[18]盧錕剛，樂智勇，陳桂林，等. 決明子、丹參、苦丁茶、絞股藍(lán)不同組分配伍的降血脂作用[J]. 中國實驗方劑學(xué)雜志，2012，18（9）：191-195.

[19]杜改梅，陳 清，蔣加進(jìn)，等. 中草藥飼料添加劑對肉雞脂質(zhì)代謝的影響[J]. 金陵科技學(xué)院學(xué)報，2010，26（3）：76-78.

[20]李 燕，徐紅月，李樹林，等. 蟲草素預(yù)防肥胖及通過ADORA1介導(dǎo)GH3細(xì)胞中泌乳素分泌研究[J]. 中國畜牧獸醫(yī)，2018，45（5）：1382-1388.