劉治芳，朱艷妮

（長(zhǎng)沙醫(yī)學(xué)院，湖南長(zhǎng)沙 410219）

厄洛替尼又稱特羅凱，適用于兩個(gè)或兩個(gè)以上化療方案失敗的局部晚期或轉(zhuǎn)移的非小細(xì)胞肺癌的三線治療，是一種選擇性EGFR-TKI（表皮生長(zhǎng)因子受體酪氨酸激酶抑制劑），通過(guò)阻斷非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞生存、增殖中的某些信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路而發(fā)揮作用[1]。但是，厄洛替尼在臨床應(yīng)用中常引發(fā)皮疹、腹瀉等毒副反應(yīng)，導(dǎo)致患者營(yíng)養(yǎng)吸收障礙，甚至出現(xiàn)胃腸道出血。因此，本文旨在探討厄洛替尼對(duì)大鼠小腸上皮細(xì)胞跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的影響，通過(guò)多次灌胃給予大鼠厄洛替尼，觀測(cè)大鼠體重及攝食量的變化，并建立在體腸循環(huán)及藥動(dòng)學(xué)模型，考察厄洛替尼對(duì)合用藥物吸收的影響。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SD大鼠12只，體重（200±20）g，雌雄各半，由長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 儀器與試劑

高效液相色譜儀（美國(guó)，安捷倫公司）；熒光分光光度檢測(cè)器（日本島津RF-5301PC）；冷凍離心機(jī)（長(zhǎng)沙英泰）；超純水機(jī)；pH計(jì)。

厄洛替尼原料藥（南京安格醫(yī)藥化工有限公司）；熒光素鈉（北京索萊寶科技有限公司）；頭孢克洛對(duì)照品（中檢所）；頭孢克洛膠囊（上海健坤）；β-羥乙基茶堿對(duì)照品（東京株式）。

1.3 方法

1.3.1 厄洛替尼對(duì)熒光素鈉大鼠在體腸循環(huán)的影響

對(duì)12只SD大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，對(duì)照組和給藥組均為每組6只（雌雄各半）。每天灌胃給予給藥組大鼠30mg/（kg·d）厄洛替尼混懸液，給予對(duì)照組大鼠同體積生理鹽水，每天1次，連續(xù)灌胃7天，并每天記錄大鼠的體重與攝食量的變化。

第8天，將大鼠禁食12h進(jìn)行在體腸循環(huán)試驗(yàn)。每只大鼠采用腹腔注射烏拉坦溶液麻醉后固定，沿大鼠腹部中線打開(kāi)腹腔（約3cm），在十二指腸上部至空腸下部（約20cm）各切一小口，插入循環(huán)管，先用注射器將37℃的生理鹽水（150 mL）緩緩注入腸管，洗凈腸管內(nèi)容物，再注入空氣排凈生理鹽水，將循環(huán)管接通蠕動(dòng)泵，形成回路。

循環(huán)液為5μg/mL的熒光素鈉溶液20mL置于錐形瓶（恒溫37℃），先以5mL/min循環(huán)10min后，將流速調(diào)節(jié)為2.5mL/min，立即自供試液錐形瓶中取樣 100μL，并及時(shí)向錐形瓶中補(bǔ)加100μL空白K氏液（恒溫37℃），之后每隔30min按同法取樣及補(bǔ)加K氏液，共取樣9次，停止循環(huán)。

向各采血時(shí)間點(diǎn)樣品中加入2mL純水，采用熒光分光光度計(jì)測(cè)定熒光強(qiáng)度，設(shè)置發(fā)射波長(zhǎng)515nm，激發(fā)波長(zhǎng)490nm，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出熒光素鈉的濃度，進(jìn)而得到熒光素鈉的各時(shí)間段吸收量Qt，公式為：

式中，Ct為各時(shí)間點(diǎn)熒光素鈉的濃度（μg/mL），Vt為各時(shí)間點(diǎn)熒光素鈉的體積（mL），l為腸段長(zhǎng)度（cm），d為腸段直徑（cm）。

1.3.2 單次灌胃給予厄洛替尼對(duì)頭孢克洛藥動(dòng)學(xué)的影響

對(duì)12只SD大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，對(duì)照組和給藥組均為每組6只（雌雄各半），其中對(duì)照組給予單次灌胃生理鹽水和50mg/kg頭孢克洛水溶液，給藥組給予單次灌胃13.5mg/kg厄洛替尼混懸液和50mg/kg頭孢克洛水溶液。在給藥前和給藥后進(jìn)行眼眶取血0.5 mL，采血時(shí)間點(diǎn)分別為0、10 min、20 min、30 min、45 min、1.0h、1.5h、2.0 h、3.0h、4.0 h、5.0 h、6.0 h。立即分離血漿，精密移取100μL血漿樣本于EP管中，加入適量冰醋酸以增加穩(wěn)定性。

采用HPLC-UV法進(jìn)行測(cè)定血漿中的頭孢克洛，以β-羥乙基茶堿為內(nèi)標(biāo)，每100μL血漿樣本加入20μLβ-羥乙基茶堿（5mg/L），渦旋混勻30 s，再加10%高氯酸甲醇溶液30μL，渦旋混勻3 min，12 000 r/min低溫離心10 min，精密吸取上清液進(jìn)樣分析。

測(cè)試條件：C18柱（4.6×150 mm，5μm，Agilent公司，美國(guó)）；流動(dòng)相：醋酸水溶液（pH3.2）∶甲醇=80∶20（v/v）；流速：1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：265nm；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：40μL。

2 結(jié)果與分析

2.1 厄洛替尼對(duì)大鼠體重及攝食量的影響

記錄對(duì)照組及給藥組大鼠的體重與攝食量的變化，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，差異結(jié)果表示為*p＜0.05，見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照組及給藥組大鼠體重及攝食量的變化（n=6）

給予厄洛替尼后，與對(duì)照組相比大鼠的體重及攝食量均顯著降低，第7天給藥組和對(duì)照組的平均體重分別為（229.8±24.1）g和（252.0±30.2）g。給藥組大鼠的平均每天攝食量為（16.7±3.9）g，顯著低于對(duì)照組（25.1±5.6）g。

A對(duì)照組及給藥組大鼠體重的變化B對(duì)照組及給藥組大鼠攝食量的變化。

2.2 厄洛替尼對(duì)熒光素鈉大鼠在體腸循環(huán)的影響

通過(guò)公式計(jì)算得到Qt，進(jìn)而將各時(shí)間點(diǎn)前所有時(shí)間段吸收量Qt累加，得到各時(shí)間點(diǎn)累積吸收量，結(jié)果見(jiàn)圖2，差異結(jié)果表示為*p＜0.05，可見(jiàn)厄洛替尼給藥組熒光素鈉的累計(jì)吸收量顯著高于對(duì)照組。熒光素鈉是細(xì)胞旁路轉(zhuǎn)運(yùn)的標(biāo)志物[2]，厄洛替尼可能主要通過(guò)增加小腸上皮細(xì)胞旁路通透性，從而增加熒光素鈉的透過(guò)率。

圖2 厄洛替尼對(duì)大鼠小腸吸收熒光素鈉的影響（n=6）

2.3 單次灌胃給予厄洛替尼對(duì)頭孢克洛藥動(dòng)學(xué)的影響

通過(guò)HPLC-UV測(cè)定得到對(duì)照組與厄洛替尼給藥組大鼠體內(nèi)頭孢克洛的血藥濃度，分別與時(shí)間作圖得平均藥時(shí)曲線見(jiàn)圖3。通過(guò)藥動(dòng)學(xué)軟件WinNonlin計(jì)算對(duì)照組與給藥組頭孢克洛的參數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表1。單次給予大鼠厄洛替尼后，頭孢克洛的t1/2、V、CL有降低的趨勢(shì)，而Tmax、Cmax、AUClast有增加的趨勢(shì)，Cmax、AUClas是反映吸收的重要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)，雖采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，顯示兩組的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但加大厄洛替尼的給藥劑量有可能導(dǎo)致吸收顯著增加。

圖3 單次給予厄洛替尼對(duì)頭孢克洛在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響（n=6）

表1 不同處理組頭孢克洛在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)

3 結(jié)論

厄洛替尼可降低大鼠體重和攝食量，顯著增加熒光素鈉的透過(guò)率，使頭孢克洛的吸收有增加的趨勢(shì)，其機(jī)制可能是增加了小腸上皮細(xì)胞旁路通透性，因此在厄洛替尼與其他藥物合用過(guò)程中應(yīng)注意藥物的相互作用。