張艷嬌，劉海鋒，廖小微，李柏舟，孫豐慧，代敏，郭莉娟＊

（1.成都醫(yī)學(xué)院 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院，四川成都 610500；2.成都醫(yī)學(xué)院四川省動(dòng)物源性獸藥殘留防控工程實(shí)驗(yàn)室，四川成都 610500）

金黃色葡萄球菌是一種常見(jiàn)致病菌，也是導(dǎo)致院內(nèi)感染的最主要的一種病原體，是化膿性感染的重要病原菌，其主要致病毒素為腸毒素、PVL殺白細(xì)胞毒素、中毒性休克毒素-1等[1]。金黃色葡萄球菌可導(dǎo)致創(chuàng)面?zhèn)凇⑵つw軟組織以及血液等感染[2]，極大地危害人體健康。本實(shí)驗(yàn)對(duì)從醫(yī)院取樣并分離純化的金黃色葡萄球菌進(jìn)行對(duì)十六烷基三甲基溴化銨、苯扎氯銨、十二烷基二甲基芐基溴化銨、雙十烷基二甲基氯化銨和氯代十六烷基吡啶這5種常用季銨鹽消毒劑的最低消毒劑抑菌濃度（MIC）測(cè)定，為醫(yī)院合理使用消毒劑提供有力依據(jù)。

1 材料及方法

1.1 菌株來(lái)源

樣品為從醫(yī)院采集，并經(jīng)分離鑒定的金黃色葡萄球菌共107株，實(shí)驗(yàn)室保存。質(zhì)控菌株為ATCC10536。

1.2 試劑

培養(yǎng)基：營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（NA），由北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司生產(chǎn)；水解酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（MHA），由OXOID公司生產(chǎn)。

消毒劑：十六烷基三甲基溴化銨（Cetyltrimethy Ammonium Bromide，CTAB），苯扎氯銨（Benzalkonium chloride，BC）98%，十二烷基二甲基芐基溴化銨（Dodecy Dimethyl Benzyl Ammonium Bromide，DDBAB）氯代十六烷基吡啶（Cetylpyridinium Chloride Monohydrate，CTPC），雙十烷基二甲基氯化銨（Didecyl Dimethyl Ammonium Chloride，DDAC）99%，以上消毒劑均為成都市科龍化工試劑廠產(chǎn)品。

1.3 消毒劑最低抑菌濃度（MIC）測(cè)定[3]

1.3.1 菌懸液制備

將金黃色葡萄球菌增菌平板從恒溫培養(yǎng)箱中取出，用無(wú)菌棉簽蘸取3～5個(gè)單菌落加入3mL無(wú)菌生理鹽水中，充分混勻，制備菌懸液，菌懸液濁度相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)媳葷?。取充分混勻后的菌懸?00μL加入1.8mL生理鹽水中，稀釋完成，并于分光光度計(jì)在625nm處檢查吸光度在0.08～0.10，菌液再稀釋10倍。

1.3.2 制備消毒劑平板

采用二倍稀釋法將消毒劑稀釋為10240mg/L、5120mg/L、2560mg/L、1280mg/L、640mg/L、320mg/L、160mg/L、80mg/L、40mg/L、20mg/L、10mg/L、5mg/L和2.5mg/L。每個(gè)平皿加2mL消毒劑以及18mL MHA培養(yǎng)基并將其充分混勻，冷卻凝固即可得到分別含有不同濃度消毒劑的MHA培養(yǎng)基平板（終濃度為0.25mg/L、0.5mg/L、1mg/L依次遞增到1024mg/L），每個(gè)濃度做3個(gè)平行組。

1.3.3 接種培養(yǎng)

吸取按照上述操作制備的金黃色葡萄球菌菌液1mL，用多點(diǎn)接種儀從毒劑低濃度平皿依次至高濃度進(jìn)行接種。接種完成后，將平板正向靜置10 min后置于恒溫培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)18～24h。

1.3.4 結(jié)果觀察與記錄

培養(yǎng)完成后，取出MHA平板并放置于暗色且無(wú)反光的桌面上，仔細(xì)觀察消毒劑平板上各金黃色葡萄球菌菌斑的生長(zhǎng)情況，以剛好完全不見(jiàn)某金黃色葡萄球菌樣品生長(zhǎng)的MHA平板所對(duì)應(yīng)的消毒劑最低濃度為試驗(yàn)終點(diǎn)，即該金黃色葡萄球菌樣品的消毒劑最低抑菌濃度。詳細(xì)記錄各消毒劑濃度平皿上接種的金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度，以供實(shí)驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 消毒劑MIC值測(cè)定結(jié)果

107株金黃色葡萄球菌在不同消毒劑濃度下的菌株分布情況見(jiàn)表1。由表1可知，107株金黃色葡萄球菌對(duì)BC的MIC值為0.5～256mg/L。其中，對(duì)BC的MIC值為1mg/L的菌株有22株（20.56%），MIC值為2mg/L的菌株有16株（14.95%），MIC值為4mg/L的菌株有13株（12.15%），MIC值為8mg/L的菌株有19株（7.48%），MIC值為128mg/L的菌株有21株（19.63%）。

表1 107株金黃色葡萄球菌在不同消毒劑濃度下的菌株分布情況

107株金黃色葡萄球菌對(duì)DDBAB的MIC范圍為0.5～256mg/L：MIC值為2mg/L的菌株有24株（22.43%），MIC值為4mg/L的菌株有25株（23.36%），MIC值為64mg/L的菌株有22（20.56%）株，MIC值為256mg/L的菌株有11株（10.28%）。

107株金黃色葡萄球菌對(duì)DDAC的MIC值與以上兩種相近，為0.25～256mg/L，其中：MIC值為0.5mg/L的菌株有20株（18.69%），MIC值為2mg/L、4 mg/L的菌株均有16株（14.95%），MIC值為32mg/L的菌株有24株（22.43%）。

107株金黃色葡萄球菌對(duì)CTAB的MIC值為2～1024mg/L，其中：MIC值為2mg/L的菌株有12株（11.21%），MIC值為4mg/L的菌株有27株（25.23%），MIC值為8mg/L的菌株有24株（22.43%），MIC值為512mg/L的菌株有12株（11.21%）。

107株金黃色葡萄球菌對(duì)CTPC的MIC值為1～1024mg/L，其中：MIC值為2mg/L的菌株有45株（42.06%），MIC值為4mg/L的菌株有23株（21.5%），MIC值為512mg/L的菌株有13株（12.15%）。

2.2 金黃色葡萄球菌對(duì)季銨鹽類消毒劑的MIC90和MIC50

107株臨床金黃色葡萄球菌對(duì)CTAB、BC的MIC50都為8 mg/L，對(duì)DDBAB、CTPC、DDAC的MIC50都為4mg/L；對(duì)CTAB的MIC90為512mg/L、BC的MIC90為128mg/L、DDBAB的MIC90為256mg/L、DDAC的MIC90為64mg/L這三種消毒劑的MIC90均為256mg/L，CTPC的MIC90可達(dá)1024mg/L。從MIC90來(lái)比較，CTPC＞CTAB＞DDBAB＞BC＞DDAC。由此可見(jiàn)，DDAC的消毒劑效果最好。

3 討論

金黃色葡萄球菌在臨床標(biāo)本中的分離率呈逐年遞增的趨勢(shì)[4]，已成為醫(yī)院感染的重要致病菌之一。鹿桂乾等[5]研究認(rèn)為，季銨鹽消毒劑的取代烷基為十二烷基和十六烷基時(shí)對(duì)金黃色葡萄球菌的殺滅效果較好，而當(dāng)消毒劑為帶短烷基鏈的季銨鹽消毒劑時(shí)，其對(duì)金黃色葡萄球菌的殺滅能力較弱。也有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，部分金黃色葡萄球菌對(duì)苯扎溴銨（BC）產(chǎn)生了一定抗性[6]。高文鳳等[7]采用懸液定量殺菌試驗(yàn)法，測(cè)得BC在濃度為200mg/L時(shí)即可對(duì)金黃色葡萄球菌產(chǎn)生較好的滅菌效果；而李春梅等[8]則測(cè)得BC在濃度為1000mg/L時(shí)可對(duì)金黃色葡萄球菌產(chǎn)生較好的滅菌效果。

季銨鹽類消毒劑使用歷史已十分長(zhǎng)久，其性能溫和，對(duì)人體皮膚黏膜無(wú)刺激性[9]，且毒性低、對(duì)被消毒物品無(wú)損害[10]，但其屬于一類低效消毒劑。近年來(lái)，復(fù)合季銨鹽消毒劑發(fā)展較快，但實(shí)際功效仍待考慮。張利平等[11]認(rèn)為，復(fù)合季銨鹽消毒劑對(duì)金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的殺滅作用，而李長(zhǎng)青等[12]認(rèn)為復(fù)合季銨鹽類消毒劑雖性能穩(wěn)定，腐蝕性較低，但仍屬于低效消毒劑，在消毒實(shí)踐中應(yīng)該合理地選擇和使用。在醫(yī)院、單位等進(jìn)行消毒時(shí)，應(yīng)注意消毒劑的使用量，按照正確用量使用，切勿濫用消毒劑導(dǎo)致細(xì)菌產(chǎn)生抗性或用量過(guò)低導(dǎo)致滅菌不完全而導(dǎo)致的耐藥性增強(qiáng)，同時(shí)應(yīng)避免消毒劑殘留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致細(xì)菌耐藥性增強(qiáng)。除此之外，應(yīng)定期更換使用的消毒劑種類，避免細(xì)菌長(zhǎng)期頻繁接觸同種消毒劑導(dǎo)致對(duì)消毒劑產(chǎn)生耐藥性。