馮雪，李帥，劉華，李婷婷，趙琳，蒼鵬，耿雪瑩，楊紅育

（長(zhǎng)春生物制品研究所有限責(zé)任公司，吉林長(zhǎng)春 130012）

氣相色譜儀是利用試樣中各組分在色譜柱中氣相和固定相間的分配及吸附系數(shù)不同，由載氣把氣體試樣或氣化后的試樣帶入色譜柱中進(jìn)行分離，并通過(guò)檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)的儀器。根據(jù)各組分的保留時(shí)間和響應(yīng)值進(jìn)行定性和定量分析。儀器由氣路系統(tǒng)、進(jìn)樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、溫控系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)組成[1]。

本實(shí)驗(yàn)依據(jù)JJG700-2016《氣相色譜儀檢定規(guī)程》及2015年版《中國(guó)藥典》，與WHO對(duì)氣相色譜儀性能驗(yàn)證要求進(jìn)行比較，在滿足國(guó)家檢定規(guī)程技術(shù)指標(biāo)的基礎(chǔ)上，加入柱溫精度和頂空進(jìn)樣器殘留限度及檢測(cè)方法，建立氣相色譜儀-頂空自動(dòng)進(jìn)樣器性能確認(rèn)的方法，為確保該儀器在確認(rèn)周期內(nèi)符合檢驗(yàn)要求及檢驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性提供參考。

1 氣相色譜儀性能確認(rèn)指標(biāo)要求

中華人民共和國(guó)國(guó)家計(jì)量檢定規(guī)程JJG700-2016《氣相色譜儀檢定規(guī)程》是由中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院起草，于2016年12月27日由國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局發(fā)布，該規(guī)程適用于配有熱導(dǎo)檢測(cè)器（TCD）、火焰離子化檢測(cè)器（FID）、火焰光度檢測(cè)器（FPD）、電子捕獲檢測(cè)器（ECD）、氮磷檢測(cè)器（NPD）的氣相色譜儀的首次檢定、后續(xù)檢定和使用中檢查[1]。歐洲官方藥品控制實(shí)驗(yàn)室網(wǎng)絡(luò)《質(zhì)量保證文件》主要根據(jù)藥品檢測(cè)的特點(diǎn)，從氣相色譜儀的進(jìn)樣、柱溫箱、檢測(cè)器3個(gè)模塊和儀器整體技術(shù)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)[2-3]。2015年版《中國(guó)藥典》在符合國(guó)家檢定規(guī)程的基礎(chǔ)上，提出柱溫箱控溫精度應(yīng)在±1℃，且溫度波動(dòng)小于0.1℃/h[4]。根據(jù)上述文件及文獻(xiàn)[5]總結(jié)氣相色譜儀性能確認(rèn)指標(biāo)要求，具體內(nèi)容見(jiàn)表1。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 主要儀器及用具

7890A型氣相色譜儀，配FID檢測(cè)器（Agilent）；7697A型頂空進(jìn)樣器（Agilent）；GA-3000型低噪音空氣泵（北京中興匯利科技發(fā)展有限公司）；GH-400型高純氫發(fā)生器（北京中興匯利科技發(fā)展有限公司）；溫度記錄器（德國(guó)ebro）。

2.2 試劑

100 ng/μL正十六烷-異辛烷，購(gòu)自北京海岸鴻蒙標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)技術(shù)有限責(zé)任公司。

2.3 環(huán)境條件

環(huán)境溫度：5～35℃，環(huán)境相對(duì)濕度：20%～85%，室內(nèi)不得存放與實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的易燃、易爆和強(qiáng)腐蝕性的物質(zhì)，應(yīng)無(wú)機(jī)械振動(dòng)和電磁干擾。

2.4 實(shí)驗(yàn)步驟

2.4.1 頂空進(jìn)樣器加熱溫度測(cè)試

將頂空平衡溫度分別設(shè)置為60℃、70℃、100℃，每個(gè)溫度連續(xù)測(cè)量60min，每10min記錄一個(gè)數(shù)據(jù)。

2.4.2 頂空進(jìn)樣器殘留測(cè)試

2.4.2.1 頂空條件

頂空平衡溫度100℃，定量環(huán)溫度110℃，傳輸線溫度120℃；頂空平衡時(shí)間5min；壓力平衡時(shí)間0.1min，進(jìn)樣時(shí)間0.5min；定量環(huán)體積1mL。

2.4.2.2 色譜條件

色譜柱：HP-5（30m×0.250mm，0.25μm）；進(jìn)樣口溫度230℃，檢測(cè)器溫度230℃；柱溫160℃，保持時(shí)間10min；恒定流量1.0mL/min；分流進(jìn)樣，分流比30∶1；空氣流量400mL/min，氫氣流量35mL/min，尾吹流量25mL/min；載氣為高純氮?dú)猓兌炔恍∮?9.999%）。

2.4.2.3 測(cè)試

取10mL頂空瓶作為空白，按上述條件進(jìn)樣確認(rèn)系統(tǒng)。再量取10μL正十六烷-異辛烷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（100ng/μL）于10mL頂空瓶中作為供試品溶液，同法進(jìn)樣1次，記錄正十六烷峰面積；另取10mL頂空瓶作為空白對(duì)照，同法進(jìn)樣1次，按公式（1）計(jì)算進(jìn)樣器殘留。

2.4.3 柱溫箱溫度穩(wěn)定性測(cè)試

把溫度計(jì)的探頭固定在柱箱中部，設(shè)定柱箱溫度為70℃。待儀器溫度穩(wěn)定后，連續(xù)測(cè)量10min，每分鐘記錄一個(gè)數(shù)據(jù)。重復(fù)測(cè)試3次。

2.4.4 程序升溫重復(fù)性

把溫度計(jì)的探頭固定在柱箱中部，選定初溫60℃，終溫200℃，升溫速率10℃/min。待初溫穩(wěn)定后，開(kāi)始程序升溫，每分鐘記錄數(shù)據(jù)一次，直至達(dá)到終溫。重復(fù)測(cè)試3次。

2.4.5 柱溫箱控溫精度測(cè)試

把溫度計(jì)的探頭固定在柱箱中部，設(shè)定柱箱溫度為70℃。待儀器溫度穩(wěn)定后，連續(xù)測(cè)量48h，每分鐘記錄一個(gè)數(shù)據(jù)。

2.4.6 基線噪音及漂移測(cè)試

按照2.4.2.2色譜條件，記錄基線30min，選取基線中噪聲最大峰-峰高對(duì)應(yīng)的信號(hào)值為儀器的基線噪聲；基線偏離起始點(diǎn)最大的響應(yīng)信號(hào)值為儀器的基線漂移。

2.4.7 檢測(cè)限

按照2.4.2.2色譜條件，待基線穩(wěn)定后，量取10μL正十六烷-異辛烷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（100ng/μL）于10mL頂空瓶中作為供試品溶液，連續(xù)測(cè)量7次，記錄正十六烷色譜峰面積。按公式（2）計(jì)算檢測(cè)限。

式中：DFID為FID檢測(cè)限，g/s；N為基線噪聲，A（mV）；W為正十六烷的進(jìn)樣量，g；A為正十六烷峰面積的算術(shù)平均值，A·s（mV·s）。

2.4.8 定性和定量重復(fù)性測(cè)試

按照2.4.2.2色譜條件，待基線穩(wěn)定后，量取10μL正十六烷-異辛烷溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（100ng/μL）于10mL頂空瓶中作為供試品溶液，連續(xù)測(cè)量7次，記錄正十六烷色譜峰面積。以正十六烷保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差作為定性重復(fù)性，正十六烷峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差作為定量重復(fù)性。

3 結(jié)果

利用上述方法，對(duì)氣相色譜儀開(kāi)展性能確認(rèn)，頂空進(jìn)樣器殘留結(jié)果為0，樣品瓶加熱溫度結(jié)果為1.6℃，柱箱溫度穩(wěn)定性（10min）結(jié)果為0.3%，程序升溫重復(fù)性結(jié)果為0.308%，柱溫箱控溫精度結(jié)果為0.7℃，基線噪聲結(jié)果為0.3pA，基線漂移結(jié)果為0.9 pA，檢測(cè)限結(jié)果為0.045ng/s，定性重復(fù)性結(jié)果為0.052%，定量重復(fù)性結(jié)果為2.85%，以上測(cè)試項(xiàng)目均符合相關(guān)指標(biāo)要求。具體結(jié)果見(jiàn)表1，色譜圖見(jiàn)圖1。

4 結(jié)論

隨著科學(xué)技術(shù)的迅速發(fā)展，氣相色譜儀在違禁藥物檢測(cè)、藥物中殘留溶劑檢測(cè)、藥物分析、藥物研究等方面應(yīng)用廣泛[6-9]。在藥品檢驗(yàn)領(lǐng)域，隨著藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的不斷提高，藥品檢驗(yàn)工作越來(lái)越倚重于儀器設(shè)備，儀器的性能確認(rèn)能夠?yàn)闄z驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性提供重要保障，證明儀器能達(dá)到預(yù)期的檢驗(yàn)分析效果[10]。

筆者在符合國(guó)家檢定規(guī)程的基礎(chǔ)上，結(jié)合WHO預(yù)認(rèn)證要求，對(duì)氣相色譜儀-頂空自動(dòng)進(jìn)樣器性能確認(rèn)項(xiàng)目，內(nèi)容及要點(diǎn)進(jìn)行總結(jié)，并對(duì)確認(rèn)項(xiàng)目進(jìn)行了測(cè)試，測(cè)試結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)。此方法成本低、操作簡(jiǎn)單，能夠?yàn)闅庀嗌V儀-頂空自動(dòng)進(jìn)樣器性能確認(rèn)提供技術(shù)參考。

表1 氣相色譜儀（FID）性能確認(rèn)指標(biāo)要求及結(jié)果

圖1 正十六烷色譜圖