鄭連姬，鄒勇，張琪，李智，費(fèi)華熙，鐘耕*

1(西南大學(xué) 食品科學(xué)學(xué)院，重慶，400715) 2(重慶食品工業(yè)研究所，重慶，400042) 3(重慶市糧油質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)站，重慶，400026)

蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、羅丹明B、對(duì)位紅、堿性橙都屬于化工染料，具有基因突變性[1]和致癌性[2-3]，歐盟國(guó)家在食品工業(yè)己禁止其作為食用色素[4-6]添加使用，2008年我國(guó)衛(wèi)生部印發(fā)的《食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)名單(第一批)》通知中已列入蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、羅丹明B、堿性橙。不法商家在食品生產(chǎn)過(guò)程中為降低成本、賦予食品誘人的外觀、穩(wěn)定色澤，違法使用非食用色素，如在辣椒粉、花椒或辣椒醬中使用蘇丹紅Ⅰ[7-8]、對(duì)位紅[8]、玫瑰紅B[9]。

重慶火鍋，又稱為毛肚火鍋或麻辣火鍋，是中國(guó)的傳統(tǒng)飲食方式，以調(diào)湯考究、麻辣鮮香醇厚見(jiàn)長(zhǎng)，具有原料多樣、葷素皆可、適應(yīng)廣泛、風(fēng)格獨(dú)特、營(yíng)養(yǎng)豐富等特點(diǎn)。重慶火鍋所需火鍋底料已實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，行銷國(guó)內(nèi)外[7-8, 10]，火鍋底料生產(chǎn)中大量使用辣椒和花椒作為麻辣呈味的主要原料，因而火鍋底料中也存在非食用色素非法添加的風(fēng)險(xiǎn)。2005年的“火鍋紅”食品安全事件[11]、2011年重慶火鍋底料羅丹明B事件[12]就是最好的例子。嚴(yán)格食品安全檢測(cè)，評(píng)估暴露風(fēng)險(xiǎn)，對(duì)保障食品安全極為重要。

目前報(bào)道的非食用色素的檢測(cè)方法有高效液相色譜紫外檢測(cè)法[9, 13-15]、高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)法[16-18]、高效液相色譜熒光檢測(cè)法[19-20]、高效液相色譜二極管陣列檢測(cè)器[21-22]、熒光光譜法[23-24]、紫外可見(jiàn)光譜法[25-26]、酶聯(lián)免疫法[27-28]、電化學(xué)法[29-30]、拉曼光譜法[31-33]、極譜法[34]和薄層色譜法[35]等。我國(guó)現(xiàn)行的非食用色素檢測(cè)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)均是針對(duì)單一物質(zhì)，不能同時(shí)測(cè)定這幾種非食用色素。范文銳等[15]用高效液相色譜法測(cè)定豆制品和肉制品中堿性嫩黃O、堿性橙、酸性橙Ⅱ、酸性金黃、玫瑰紅B、對(duì)位紅、蘇丹紅Ⅰ 7種非食用色素，高潔等[36]利用高效液相色譜法測(cè)定酸性紅一號(hào)、橙黃G、酸性紅26、酸性大紅GR、金黃粉5種非食用色素，楊琳等[37]采用高效液相色譜法測(cè)定辣椒制品中堿性橙和堿性玫瑰精含量，林黛琴等[17]采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定食品中堿性橙Ⅱ、堿性嫩黃O、酸性橙Ⅱ、酸性金黃4種黃色工業(yè)染料。這些方法主要針對(duì)不含脂肪或含脂肪少的食品或一般的辣椒制品，而火鍋底料中含有大量的油脂，為非食用色素的提取帶來(lái)困難，目前火鍋底料中除去油脂最有效的方法是采用凝膠凈化滲透色譜法[38]，但此設(shè)備價(jià)格昂貴、操作較繁瑣。

本研究采用無(wú)水乙醇、正己烷、丙酮混合溶劑分步提取堿性橙Ⅱ、羅丹明B、對(duì)位紅、蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ，用中性氧化鋁柱凈化火鍋底料中7種非食用色素，然后采用高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定這7種非食用色素，并采用此方法測(cè)定100組重慶火鍋底料。由此，基于蒙特·卡羅法(Monet Carlo method)模擬技術(shù)的Crystal ball風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估軟件對(duì)檢測(cè)的7種非食用色素進(jìn)行擬合，建立暴露模型，從此模型中隨機(jī)抽樣1 000次計(jì)算暴露評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)，評(píng)價(jià)攝食重慶火鍋底料時(shí)7種非食用色素對(duì)重慶居民帶來(lái)的危害概率，為指導(dǎo)重慶火鍋的安全食用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

蘇丹紅Ⅰ(純度99%)、蘇丹紅Ⅱ(純度99.66%)、蘇丹紅Ⅲ(純度97%)、蘇丹紅Ⅳ(純度99.64%)、羅丹明B(純度95.52%)、對(duì)位紅(純度97%)、堿性橙Ⅱ(純度99.5%)，德國(guó)Dr.Ehrenstorfor公司；乙腈(色譜純)、層析用氧化鋁(中性100～200目)，成都市科龍化工試劑廠；正己烷、丙酮、無(wú)水乙醇、乙酸銨等試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純，重慶特普科技有限公司。

重慶火鍋底料：來(lái)自重慶市市面上銷售的預(yù)包裝火鍋底料及重慶不同地區(qū)火鍋餐飲店抽取的火鍋底料，共100組。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 1100高效液相色譜儀附二極管陣列檢測(cè)器(DAD檢測(cè)器)，美國(guó)安捷倫公司；KQ-300DE超聲波振蕩器，昆山市超聲儀器有限公司；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；玻璃層析柱(250 mm×10 mm)，重慶特普科技有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 樣品前處理

1.3.1.1 提取

稱取5 g均質(zhì)樣品于100 mL三角瓶中，加入25 mL無(wú)水乙醇超聲提取20 min，過(guò)濾，濾液收集于圓底燒瓶中，用25 mL無(wú)水乙醇重復(fù)提取1次，合并濾液。在剩余殘?jiān)屑尤?5 mLV(丙酮)∶V(正己烷)=1∶9混合溶液，超聲提取20 min，用V(丙酮)∶V(正己烷)=1∶9混合溶液重復(fù)提取1次，合并全部的提取液于圓底燒瓶中，置于50 ℃水浴旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮至5 mL左右，備用。

1.3.1.2 層析用氧化鋁柱制備

層析用氧化鋁在105 ℃條件下干燥4 h，于干燥器中冷卻至室溫，每100 g中加入2 mL水降活，混勻后密封，放置12 h后使用。在層析柱管(250 mm×10 mm)底部塞入一層脫脂棉，干法裝入處理過(guò)的氧化鋁至3 cm高，輕輕敲實(shí)后加一層脫脂棉，備用。

1.3.1.3 凈化

制備好的氧化鋁柱先用10 mL正己烷預(yù)淋洗，待液面降至底部脫脂棉頂部時(shí)加入上述樣品提取液，用5 mL正己烷洗滌燒瓶，洗滌液一并加入氧化鋁柱中，用正己烷沖洗柱至流出液無(wú)色，再以20 mLV(丙酮)∶V(正己烷)=1∶9混合溶液洗脫，收集洗脫液，再用20 mL無(wú)水乙醇洗脫，合并洗脫液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，殘留物用正己烷溶解并定容至5 mL，經(jīng)0.45 μm有機(jī)微孔濾膜過(guò)濾后上機(jī)測(cè)定。

1.3.2 色譜條件

色譜柱：XDB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)；流動(dòng)相：A為0.02 mol/L乙酸銨(用冰醋酸調(diào)pH值為4.0)，B為乙腈；流速1 mL/min；進(jìn)樣量10 μL；柱溫30 ℃；梯度洗脫；參數(shù)見(jiàn)表1；檢測(cè)波長(zhǎng)：堿性橙Ⅱ，440 nm；羅丹明B，548 nm；對(duì)位紅、蘇丹紅Ⅰ，480 nm；蘇丹紅Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，520 nm。

表1 梯度洗脫程序Table 1 Program of gradient elution

1.3.3 測(cè)定100組樣品中7種非食用色素

按1.3.1中規(guī)定的方法處理100組火鍋底料，1.3.2規(guī)定的方法測(cè)定7種非食用色素。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

蒙特·卡羅法(Monet Carlo method)屬于統(tǒng)計(jì)試驗(yàn)的一種方法，主要通過(guò)統(tǒng)計(jì)抽樣實(shí)驗(yàn)為各種各樣的數(shù)學(xué)問(wèn)題提供近似解，也稱為隨機(jī)抽樣技術(shù)[39]。

根據(jù)年齡性別將評(píng)估人群劃分為：兒童組(7～13歲)，青少年組(14～17歲)，成人組(18～49歲)，老年人組(50～78歲)，每一組分別按性別進(jìn)行分析。不同人群的食用油消費(fèi)量和人均體重?cái)?shù)據(jù)均來(lái)源于2009年中國(guó)健康與營(yíng)養(yǎng)調(diào)查數(shù)據(jù)庫(kù)(China Health and Nutrition Survey，CHNS)[40]。

1.4.1 暴露評(píng)估模型

暴露評(píng)估模型如公式(1)所示。

(1)

式中：CDI，平均日暴露量，mg/(kg·bw·d)；Cf，化學(xué)物質(zhì)暴露濃度；PIR，人均每日攝入量，kg/d；EF，暴露頻率，day/年；ED，暴露持續(xù)時(shí)間，年；bw，體重，kg；AT，拉平時(shí)間，d(AT=ED 年×365 日/年)；ABS，腸胃吸收系數(shù)。

1.4.2 暴露評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)[40-41]

暴露評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)如公式(2)所示。

(2)

式中：IFSC，化學(xué)物質(zhì)C的食品暴露安全指數(shù)，表示食品安全的影響程度；RfD，化合物質(zhì)C的每日安全攝入量。

以上公式可用來(lái)計(jì)算化學(xué)物質(zhì)C的食品安全指數(shù)，根據(jù)計(jì)算結(jié)果可以得出其對(duì)食品安全的影響程度?？梢灶A(yù)期的結(jié)果是：

IFSC?1，化學(xué)物質(zhì)C暴露對(duì)食品安全沒(méi)有影響；

IFSC≤1，化學(xué)物質(zhì)C暴露對(duì)食品安全影響的風(fēng)險(xiǎn)是可以接受的；

1

IFSC>10，食品安全影響的風(fēng)險(xiǎn)超過(guò)了可接受的限度，需要立即采取措施。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)品圖譜和樣品圖譜

由圖1和圖2可知,在色譜條件下標(biāo)準(zhǔn)品堿性橙Ⅱ、羅丹明B、對(duì)位紅、蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ保留時(shí)間分別為4.507、7.531、11.136、12.007、13.659、14.800、17.535 min，加標(biāo)樣品中堿性橙Ⅱ、羅丹明B、對(duì)位紅、蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ保留時(shí)間分別為4.506、7.532、11.141、12.024、13.667、14.798、17.510 min，從加標(biāo)后樣品分析圖中可以看出(因購(gòu)買的火鍋底料中未檢出非食用色素，加標(biāo)后的樣品作為本實(shí)驗(yàn)的樣品)，7種非食用色素分離完全，火鍋底料中的其他物質(zhì)對(duì)其測(cè)定不產(chǎn)生干擾。

圖1 七種非食用色素標(biāo)準(zhǔn)圖譜Fig.1 Standard chromatogram of 7 non edible pigments

圖2 七種非食用色素加標(biāo)樣品圖譜Fig.2 Chromatogram of samples with the addition of standards

2.2 吸收波長(zhǎng)的選擇

通過(guò)Agilent 1100高效液相色譜儀附二極管陣列檢測(cè)器(DAD檢測(cè)器)在200～600 nm處對(duì)7種非食用色素進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，各自最大吸收波長(zhǎng)分別為堿性橙Ⅱ 410 nm；羅丹明B 548 nm；對(duì)位紅 484 nm、蘇丹紅Ⅰ 480 nm；蘇丹紅Ⅱ 494 nm、蘇丹紅Ⅲ 505 nm、蘇丹紅Ⅳ 520 nm。本實(shí)驗(yàn)使用分時(shí)間段變波長(zhǎng)的方法，分別選擇0～7 min、440 nm；7～9 min、548 nm；9～13 min、480 nm；13～20 min、520 nm進(jìn)行檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明，各組分在上述波長(zhǎng)條件下靈敏度高，極少受到雜質(zhì)干擾。因此分別采用440、548、480、520 nm作為本實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.3 流動(dòng)相梯度條件的確定

采用0.02 mol/L乙酸銨和乙腈作為流動(dòng)相，從等度條件開(kāi)始，進(jìn)行大量的梯度洗脫條件比較，最終確定分離度和峰型較好的梯度條件，見(jiàn)表1。在上述梯度條件下20 min內(nèi)8個(gè)峰完全分離，峰型都較好，無(wú)干擾。

2.4 樣品前處理?xiàng)l件的確定

2.4.1 提取

提取非食用色素的溶劑有乙醇、正己烷、乙醇和丙酮、甲醇等，研究發(fā)現(xiàn)單獨(dú)使用一種溶劑同時(shí)提取7種色素時(shí)，提取效果較差，回收率低。堿性橙Ⅱ和羅丹明B極易溶于乙醇和甲醇溶液，因乙醇無(wú)毒，故采用無(wú)水乙醇提??；對(duì)位紅和蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ不溶于乙醇，且溶于正己烷溶液，但火鍋底料中含有大量的油脂，油脂不分散于正己烷中從而降低色素的提取效果，因此用V(正己烷)∶V(丙酮)=9∶1混合溶液提取對(duì)位紅和蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ。

2.4.2 凈化

非食用色素的檢測(cè)中經(jīng)常采用固相萃取柱凈化提取液，但固相萃取柱成本較高，為了節(jié)約成本，本實(shí)驗(yàn)采用自制中性氧化鋁柱凈化提取液，有研究表明[42]中性氧化鋁柱凈化油脂及雜質(zhì)的效果較好，回收率高。

2.5 檢出限

配制7種混合標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為0.10～0.50 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定峰面積，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作曲線，在此質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)量濃度與峰面積值均有良好的線性關(guān)系，檢出限以1/3信噪比評(píng)估法計(jì)算得出。具體線性方程及相關(guān)系數(shù)，檢出限見(jiàn)表2。

表2 七種非食用色素的線性方程、相關(guān)系數(shù)(r)、檢出限(S/N=3)Table 2 The linear equation, correlation coefficient (r) and detection limit of 7 non edible pigments

2.6 回收率及精密度

采用添加回收的方法，在不含分析物本底的火鍋底料基質(zhì)中測(cè)定回收率，按表3中添加高、中、低水平做7次平行樣品，測(cè)定精密度，結(jié)果見(jiàn)表3。結(jié)果表明，各非食用色素的回收率在 86%～97%，精密度(RSD)為0.1%～5.2%。

2.7 100組火鍋底料中7種非食用色素檢測(cè)結(jié)果

檢測(cè)結(jié)果均為未檢出，即小于檢出限(LOD值)。為了建立統(tǒng)計(jì)模型，檢測(cè)結(jié)果最大值以1/2檢出限(LOD)、最小值以0表示。

2.8 火鍋底料中危害因子膳食暴露評(píng)估

2.8.1 火鍋油脂膳食數(shù)據(jù)和人群體質(zhì)量數(shù)據(jù)

火鍋底料中50%～70%成分為油脂，7種非食用色素易溶于油脂中，此評(píng)估數(shù)據(jù)采用油脂膳食數(shù)據(jù)為依據(jù)。通過(guò)分析CHNS 2009年的調(diào)查數(shù)據(jù)庫(kù)，獲得的不同人群的油脂膳食人群和體質(zhì)量數(shù)據(jù)，考慮重慶地區(qū)的特殊油脂膳食的情況，本實(shí)驗(yàn)火鍋油脂膳食的消費(fèi)量采用表4中的最高消費(fèi)量數(shù)據(jù)，體質(zhì)量為平均分布(表5)。

表3 七種非食用色素加標(biāo)回收率及精密度Table 3 Spike recovery and precision of 7 non edible pigments

注：ND表示低于檢出限(LOD值)。

表4 不同年齡組的油脂膳食水平及體質(zhì)量數(shù)據(jù)[40]Table 4 Data of fat intake and body weight in different age groups

表5 不同年齡組的火鍋油脂膳食水平及體質(zhì)量數(shù)據(jù)Table 5 Data of hot pot oil consumption level and body weight in different age groups

2.8.2 暴露評(píng)估模型其他參數(shù)確定

利用基于Monte Carlo模擬技術(shù)的Crystal Ball軟件，對(duì)100組火鍋底料樣品中各檢測(cè)參數(shù)的測(cè)定值進(jìn)行分布擬合，確定最佳擬合分布。7種非食用色素均低于檢出限，為了統(tǒng)計(jì)分析檢測(cè)結(jié)果以1/2檢出限，均勻分布(Uniform)處理,暴露評(píng)估模型的相關(guān)參數(shù)見(jiàn)表6。

表6 暴露評(píng)估模擬參數(shù)表Table 6 Table of parameters for simulated exposure assessment

2.8.3 7種非食用色素日均暴露量

利用基于Monte Carlo模擬技術(shù)Crystal Ball風(fēng)險(xiǎn)分析軟件，從暴露評(píng)估模型(表6)含量數(shù)據(jù)庫(kù)中隨機(jī)抽取數(shù)值計(jì)算我國(guó)不同年齡階段人群通過(guò)重慶火鍋底料攝入7種非食用色素日暴露量的概率分布，單個(gè)模擬過(guò)程循環(huán) 1 000次，得出模擬結(jié)果及平均值，結(jié)果見(jiàn)表7。

表7 火鍋底料中7種非食用色素在不同人群中不同百分位概率下的日均暴露量(CDI)單位：mg/(kg·bw·d)

Table 7 Average daily exposure of 7 non-edible pigments in CDI at different percentile probabilities in different populations

續(xù)表7

百分位數(shù)7～13歲14～17歲18～49歲50～78歲男女男女男女男女蘇丹紅Ⅲ平均值9.90E-067.15E-067.23E-066.52E-069.49E-068.97E-066.82E-066.94E-066.49E-065.80E-066.65E-065.79E-0610%1.94E-061.82E-061.68E-061.52E-061.30E-061.20E-061.37E-061.25E-0630%5.75E-065.17E-064.27E-064.33E-063.83E-063.46E-064.02E-063.49E-0650%9.49E-068.95E-066.81E-066.94E-066.47E-065.79E-066.65E-065.78E-0670%1.34E-051.30E-059.86E-069.72E-061.00E-058.32E-069.42E-068.32E-0690%1.89E-051.84E-051.30E-051.29E-051.60E-051.34E-051.27E-051.15E-0595%2.53E-052.50E-051.52E-051.48E-052.44E-052.02E-051.60E-051.45E-05100%3.18E-053.17E-051.73E-051.67E-053.27E-052.71E-051.94E-051.75E-05蘇丹紅Ⅳ平均值2.35E-062.08E-062.11E-061.88E-062.76E-061.72E-062.11E-061.99E-061.94E-061.61E-061.94E-061.67E-0610%5.35E-073.84E-074.25E-074.26E-074.35E-073.44E-073.47E-073.07E-0730%1.69E-061.02E-061.37E-061.24E-061.16E-069.93E-071.16E-061.02E-0650%2.76E-061.72E-062.10E-061.98E-061.94E-061.61E-061.94E-061.67E-0670%3.91E-062.41E-062.94E-062.82E-062.94E-062.39E-062.70E-062.41E-0690%5.40E-063.26E-063.77E-063.67E-064.72E-063.87E-063.76E-063.23E-0695%7.07E-064.24E-064.35E-064.26E-067.33E-066.34E-064.97E-064.09E-06100%8.74E-065.22E-064.93E-064.85E-069.94E-068.81E-066.19E-064.94E-06堿性橙Ⅱ平均值7.47E-055.40E-055.60E-054.95E-057.83E-057.11E-055.48E-055.31E-056.14E-055.06E-055.35E-054.55E-0510%1.32E-051.34E-059.49E-061.09E-059.44E-068.60E-061.08E-057.77E-0630%4.24E-053.93E-053.29E-053.19E-053.05E-052.55E-053.29E-052.47E-0550%7.41E-056.50E-055.38E-055.16E-055.43E-054.29E-055.22E-054.38E-0570%1.06E-049.49E-057.66E-057.47E-057.70E-056.54E-057.25E-056.15E-0590%1.47E-041.36E-049.86E-059.46E-051.23E-041.00E-049.66E-058.47E-0595%2.09E-041.82E-041.14E-041.10E-042.01E-041.54E-041.29E-041.13E-04100%2.70E-042.27E-041.30E-041.25E-042.79E-042.08E-041.61E-041.41E-04對(duì)位紅平均值4.38E-063.10E-063.19E-062.89E-064.52E-064.24E-063.18E-063.03E-063.47E-062.91E-063.07E-062.71E-0610%7.57E-077.99E-076.32E-076.17E-075.38E-074.83E-076.22E-075.45E-0730%2.71E-062.32E-061.89E-061.68E-061.68E-061.48E-061.74E-061.54E-0650%4.27E-063.97E-063.18E-062.96E-062.97E-062.52E-062.94E-062.66E-0670%5.90E-065.57E-064.35E-064.21E-064.44E-063.72E-064.14E-063.69E-0690%8.51E-068.13E-065.67E-065.47E-067.10E-065.74E-065.72E-064.91E-0695%1.12E-051.05E-056.55E-066.47E-061.21E-059.52E-067.27E-066.55E-06100%1.40E-051.29E-057.43E-067.47E-061.70E-051.33E-058.82E-068.19E-06

表7結(jié)果顯示，7～13歲(男、女)通過(guò)火鍋油攝入羅丹明B、蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ、堿性橙Ⅱ、對(duì)位紅日均暴露量最高，18～49歲(男、女)次之，然后14～17歲(男、女)、50～78歲(男、女)最低。同一年齡組相比，除14～17歲(女)蘇丹紅Ⅲ日均暴露量高于14～17歲(男)，其余男性日均暴露量高于女性。

2.8.4 暴露評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)

參考劑量(reference dose, RfD)是指?jìng)€(gè)人可以長(zhǎng)時(shí)間持續(xù)暴露在這個(gè)水平而不受到危害的劑量，通常以每千克體重毫克表示[41]。中國(guó)疾病預(yù)防中心2005年對(duì)蘇丹紅的危害性評(píng)估中，動(dòng)物試驗(yàn)誘發(fā)腫瘤所用劑量蘇丹紅I、蘇丹紅Ⅱ?yàn)?0 mg/kg，蘇丹紅Ⅲ為80 mg/kg，蘇丹紅Ⅳ為5 mg/kg[43]。2005年歐盟規(guī)定，在歐盟成員國(guó)，任何工業(yè)燃料(蘇丹紅、對(duì)位紅等)含量超標(biāo)的產(chǎn)品必須撤出市場(chǎng)，檢測(cè)限設(shè)在0.5 ～1 mg/kg[44]。國(guó)家統(tǒng)計(jì)局頒布的2010年國(guó)家統(tǒng)計(jì)年鑒，2009年我國(guó)居民食用植物油和動(dòng)物油共攝入量為41.4 g/(標(biāo)準(zhǔn)人·日)，即0.041 4 kg/(標(biāo)準(zhǔn)人·日)[45]。假設(shè)油脂中含有非食用色素的含量為2005年歐盟規(guī)定的檢出限最小值0.5 mg/kg、標(biāo)準(zhǔn)體重60 kg的人每天攝入0.041 4 kg食用油，計(jì)算每日攝入量為3.45E-04 mg/(kg·bw·d)，遠(yuǎn)低于蘇丹紅危害評(píng)估中誘發(fā)腫瘤所用劑量，因此本文采用3.45E-04 mg/(kg·bw·d)為7種非法食用色素暴露風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估中RfD。如風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)低于1就表明無(wú)風(fēng)險(xiǎn)。

表8為不同百分位數(shù)概率下的風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)，7種非食用色素的不同年齡組，不同百分位數(shù)(P10、P30、P50、P70、P90、P95、P100)下均小于1，通過(guò)攝入重慶火鍋底料對(duì)兒童、青少年、青壯年、中老年居民帶來(lái)7種非食用色素危害的概率為0%。

表8 不同百分位數(shù)概率下的風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)Table 8 Risk indices with different percentile probabilities

3 結(jié)論

本文采用乙醇和V(正己烷)∶V(丙酮溶液)=9∶1分步提取火鍋底料中7種非食用色素堿性橙Ⅱ、羅丹明B、對(duì)位紅、蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ，經(jīng)氧化鋁柱凈化提取液中雜質(zhì)和大量油脂，分時(shí)間段變波長(zhǎng)條件下(0～7 min, 440 nm；7～9 min, 548 nm；9～13 min, 480 nm；13～20 min, 520 nm)，0.02 mol/L乙酸銨(pH 4.0)和乙腈為流動(dòng)相，梯度洗脫，用二極管陣列檢測(cè)器(DAD)檢測(cè)，外標(biāo)法峰面積定量。數(shù)據(jù)表明，本方法操作較為簡(jiǎn)便、快捷、精密度高，樣品分離度好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，靈敏度高，所用試劑成本低，能滿足火鍋底料中7種非食用色素含量的一次性檢測(cè)。利用Monte Carlo模擬技術(shù)的Crystal Ball軟件，對(duì)100組重慶火鍋底料進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的結(jié)果不同百分位數(shù)(P10、P30、P50、P70、P90、P95、P100)下均小于1，表明此次調(diào)查、評(píng)估攝食重慶火鍋底料對(duì)不同年齡段居民帶來(lái)7種非食用色素(羅丹明B、蘇丹紅Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、堿性橙Ⅱ、對(duì)位紅)危害概率為0%。