趙 亮 王曉明 呂春燕

拓?fù)洚悩?gòu)酶(TOPO)是參與DNA復(fù)制、染色體分離及基因表達(dá)等多種細(xì)胞生物學(xué)過程的重要核蛋白酶[1]，其中TOPOⅡ酶由TOP2A基因表達(dá)，其表達(dá)水平變化可引發(fā)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)及結(jié)構(gòu)的改變。近年來研究表明，TOP2A在包括乳腺癌、直腸癌、胃癌等諸多惡性腫瘤中存在表達(dá)失?，F(xiàn)象，可能與腫瘤的發(fā)生發(fā)展及對治療及新輔助化療耐藥性相關(guān)[2-3]。目前TOP2A在直腸癌中的研究主要集中于其與患者臨床病理資料的相關(guān)性，關(guān)于其與后期直腸癌化療療效及預(yù)后之間的關(guān)系研究尚較為缺乏[4]。本研究采用免疫組化方法對直腸癌患者組織中的TOP2A表達(dá)水平進(jìn)行分析，探究TOP2A基因表達(dá)及蛋白表達(dá)與直腸癌患者化療效果的關(guān)系?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2014年6月至2016年7月我院收治的直腸癌患者作為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡18～75歲；經(jīng)手術(shù)及病理證實(shí)為結(jié)直腸癌患者；臨床資料完整；MRI分期為局部進(jìn)展期T3或T4直腸癌；擬行新輔助放化療治療；具有可評價的病灶；患者及家屬對本研究知情且簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：既往有放化療治療史；合并嚴(yán)重心、肝、腎等器質(zhì)性病變患者；經(jīng)檢查有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者。符合上述標(biāo)準(zhǔn)患者共75例，其中男性39例，女性36例，年齡35～66歲，平均(46.32±3.95)歲；直腸癌TNM臨床分期[5]：T3期61例、T4期14例；所有患者均具有可測量病灶，病灶直徑為2.5～4.7cm；平均(3.22±0.28)cm。

1.2 方法

化療方法：所有患者術(shù)后給予奧沙利鉑聯(lián)合5-FU/CF治療方案治療：奧沙利鉑130 mg/m2靜脈滴注3 h(1 d)，CF 200 mg/m2，靜脈滴注2 h(5 d)，5-FU 500 mg/m2，靜脈滴注4 h以上(5 d)。每3周給藥1次，化療4～6個周期。療效評估：化療前后采用影像學(xué)方法測定腫瘤大小，分析治療前后變化情況并評估療效。按照實(shí)體瘤評價標(biāo)準(zhǔn)(RICIST)[6]分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)及疾病進(jìn)展(PD)；所有患者均接受隨訪，隨訪主要包括電話隨訪及門診隨訪。

免疫組化方法：收集術(shù)中收集的病理組織置于4%多聚甲醛固定，經(jīng)脫水、透明、包埋、切片、展片、烘片等步驟制備石蠟切片。免疫組化采用SP染色法，兔抗人TOP2A抗體購自英國Abcam公司；染色試劑及顯色試劑盒由北京中山公司提供，實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。免疫組化結(jié)果分析采用半定量法，在高倍鏡下隨機(jī)選擇10個視野(×400)，每個視野計數(shù)100個陽性細(xì)胞數(shù)，計算切片中陽性細(xì)胞百分比。其中陽性細(xì)胞<10%記為0級；1級，10%≦陽性細(xì)胞數(shù)<25%；2級，25%≦陽性細(xì)胞數(shù)<50%；3級，50%≦陽性細(xì)胞數(shù)<75%；4級，75%≦陽性細(xì)胞數(shù)≦100%。根據(jù)細(xì)胞染色程度：0級，無著色；1級，淺棕色；2級，棕色；3級，深棕色。根據(jù)陽性細(xì)胞比例評級及染色程度評級的乘積評價表達(dá)情況，0～3分為陰性表達(dá)(-)；4～6分為弱陽性表達(dá)(+)；7～9分為陽性表達(dá)(++)；9～12分為強(qiáng)陽性表達(dá)(+++)。所有結(jié)果分別為2名資深病理醫(yī)師獨(dú)立判讀，不同意見時經(jīng)討論達(dá)成一致后定論。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS 22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計學(xué)分析，計數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)；采用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，以P<0.05表示差異具統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TOP2A基因在進(jìn)展期直腸癌患者組織中的表達(dá)情況

75例直腸癌患者腫瘤組織中，陰性表達(dá)(-)患者38例，弱陽性(+)患者25例，陽性(++)患者12例。

2.2 TOP2A基因表達(dá)與患者臨床資料之間的關(guān)系分析

經(jīng)比較，TOP2A基因表達(dá)與患者性別組成、年齡、腫瘤大小、浸潤程度、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等情況均無相關(guān)(P>0.05)。見表1。

表1 TOP2A基因與患者臨床資料之間的關(guān)系/例

2.3 TOP2A基因表達(dá)與直腸癌近期療效的關(guān)系

75例患者均接受化療后療效評定，其中CR 1例，PR 39例，SD 20例，PD 15例，客觀有效率為53.33%，客觀緩解率為80.00%。經(jīng)分析，患者TOP2A基因表達(dá)情況與DCR相關(guān)，差異具統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2 TOP2A基因表達(dá)與直腸癌近期療效的關(guān)系

2.4 TOP2A基因表達(dá)與直腸癌遠(yuǎn)期療效的關(guān)系

75例患者均接受隨訪，隨訪時間截止至2017年12月，隨訪時間為14～29個月。生存分析示，TOP2A基因表達(dá)陽性患者生存率顯著高于陰性患者(P<0.05)。見圖1。

圖1 不同TOP2A基因表達(dá)直腸癌患者生存曲線

3 討論

TOP2A基因是TOPOⅡ酶的編碼基因，定位于第17號染色體上，廣泛存在于增殖細(xì)胞中，其編碼產(chǎn)物可通過結(jié)合并水解ATP，催化細(xì)胞DNA不斷發(fā)生解構(gòu)及重新組合，從而調(diào)控細(xì)胞DNA復(fù)制、染色體分離及基因表達(dá)等重要生物學(xué)過程[7]。近年來，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，TOP2A在腫瘤發(fā)生及發(fā)展中的研究逐漸增多，但大多集中于乳腺癌方向，且關(guān)于該基因在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及化療耐藥等方面存在許多爭議。諸多研究表明，食管癌、胃癌、肺癌及乳腺癌及一些頭頸部腫瘤組織均可伴有TOP2A陽性表達(dá)增高的趨勢，TOP2A表達(dá)產(chǎn)物被認(rèn)為是腫瘤細(xì)胞增殖的特異性產(chǎn)物[8-9]。但關(guān)于TOP2A與腫瘤發(fā)展的相關(guān)關(guān)系，臨床上存在一定爭議。Panousis等[10]研究證實(shí)，在TOP2A高表達(dá)的乳腺癌患者中，腫瘤組織學(xué)分化程度低，腫瘤體積大且預(yù)后較差，TOP2A是判斷乳腺癌患者預(yù)后的獨(dú)立指標(biāo)；Gao等[11]研究證實(shí)結(jié)腸癌患者TOP2A高表達(dá)是腫瘤預(yù)后不良的獨(dú)立預(yù)測因素；趙麗輝[12]及鐘科等[13]研究證實(shí)，TOP2A基因表達(dá)與年齡、腫瘤部位及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等資料無相關(guān)?；谝陨蠣幾h，本研究對直腸癌患者TOP2A表達(dá)情況及臨床資料進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，TOP2A表達(dá)量與患者性別組成、年齡、腫瘤大小、浸潤程度、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等情況均無相關(guān)。分析與前人研究有較大差異的原因：①研究對象差異及腫瘤類型不同；②檢測方法及判斷標(biāo)準(zhǔn)的差異：本研究采用免疫組化方法，既往部分研究多針對轉(zhuǎn)錄組水平的研究，因存在蛋白翻譯受多因素調(diào)控等原因，TOP2A在轉(zhuǎn)錄及蛋白水平存在較低的相關(guān)性[14]。對于TOP2A表達(dá)量與癌癥發(fā)展的關(guān)系仍需進(jìn)一步進(jìn)行研究。

近年來的乳腺癌相關(guān)研究顯示，TOP2A表達(dá)情況與蒽環(huán)類藥物術(shù)后化療效果相關(guān)，可直接影響機(jī)體對藥物的敏感性。Ejlertsen等[15]研究結(jié)果表明，乳腺癌患者TOP2A拷貝數(shù)改變可使表柔比星獲得更高的療效；蔣奕等[16]研究證實(shí)，經(jīng)新輔助化療后TOP2A基因擴(kuò)增的患者病理完全緩解的比例顯著高于基因無擴(kuò)增患者；而也有研究認(rèn)為早期乳腺癌患者TOP2A表達(dá)正?；颊邚妮飙h(huán)類藥物化療中收效甚微[17]，因此目前關(guān)于蒽環(huán)類藥物與癌癥化療效果的關(guān)系尚需考證。除廣泛報道的蒽環(huán)類藥物，替尼泊苷、玫瑰樹堿、新阿霉素等均為以TOPOⅡ?yàn)樽饔冒悬c(diǎn)的藥物，這些藥物療效也可能與TOP2A表達(dá)存在一定關(guān)系。TOP2A表達(dá)情況與腫瘤化療相關(guān)的原因主要為：①TopoⅡ作為諸多抗癌藥物的重要靶酶，酶量水平與抗癌藥物毒性效應(yīng)相關(guān)，TopoⅡ水平直接與抗腫瘤活性相關(guān)；②藥物耐藥作為一種復(fù)雜的多因素調(diào)控過程，其耐藥網(wǎng)絡(luò)極為復(fù)雜，臨床研究證實(shí)，TOPOⅡ酶與其他耐藥相關(guān)基因存在關(guān)聯(lián)，參與其他耐藥基因表達(dá)及調(diào)控，誘導(dǎo)其他耐藥基因的表達(dá)，從而介導(dǎo)藥物耐藥[18]。本研究比較了不同TOP2A表達(dá)情況的患者術(shù)后近期及遠(yuǎn)期療效，結(jié)果顯示，TOP2A表達(dá)與DCR及遠(yuǎn)期生存率相關(guān)，具體表現(xiàn)為TOP2A表達(dá)陽性的患者DCR及遠(yuǎn)期生存率較好；提示TOP2A表達(dá)陽性患者可獲得更好的化療效果。但既往關(guān)于TOP2A表達(dá)與直腸癌患者化療效果研究較少，且腫瘤耐藥機(jī)制復(fù)雜，TOP2A與直腸癌化療效果的結(jié)論尚需進(jìn)一步考證。

綜上，TOP2A基因表達(dá)與直腸癌化療療效相關(guān)，表達(dá)陽性患者具有更好的化療效果。