肖一紅，王玉超，彭 濤，孫法超，古金元，馬梓承，王宏宇，孟凡亮，李寶全，劉思當

（山東農(nóng)業(yè)大學動物科技學院 山東省動物生物技術(shù)與疫病防治重點實驗室，泰安 271018）

豬流行性感冒簡稱豬流感（swine influenza,SI），是由豬流感病毒(Swine influenza virus，SIV）感染豬引起的一種急性、熱性和高度接觸性呼吸道傳染病。豬流感屬于人畜共患病，并且豬的上呼吸道同時含有人流感病毒和禽流感病毒受體[1]。若人流感病毒和禽流感病毒同時感染豬，兩種流感病毒很有可能在豬的體內(nèi)發(fā)生基因重配，從而產(chǎn)生新的病毒株[2]。人群往往對重配的新病毒沒有免疫力，從而有可能導致流感大流行。因此，對豬流感進行流行病學調(diào)查具有重要的公共衛(wèi)生意義，可為動物與人流感大流行的預測和豬流感疫苗的研發(fā)提供依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 主要試劑類禽型H1N1（EA H1N1）、2009甲型H1N1（2009/H1N1）和H3N2亞型SIV抗原均由中國農(nóng)業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所國家禽流感參考實驗室提供。

1.2 樣品來源2016年7月到2017年12月在山東省各市區(qū)養(yǎng)殖場，采集未免疫豬流感疫苗的血清共7000份，具體見表1。

1.3 血凝抑制檢測（HI）參照國標GB/T27535-2011推薦的方法處理血清樣品，以去除血清中的非特異性抑制因子。根據(jù)相應抗原的HA效價配制4 HAU的抗原，以完全抑制4 HAU抗原的血清最高稀釋倍數(shù)作為HI效價[3]。HI效價≥1∶10，判定為陽性。

2 結(jié)果與討論

2.1 三種亞型豬流感病毒血清學檢測結(jié)果用類禽型豬H1N1（EA H1N1）SIV、2009甲型H1N1（2009/H1N1）SIV和H3N2亞型SIV為標準抗原，對7000份血清進行檢測。檢測結(jié)果顯示3種豬流感亞型抗體總陽性率為63.79%，其中EA H1N1亞型SIV抗體陽性率為56.31%，2009/H1N1亞型SIV抗體陽性率為24.61%，H3N2亞型SIV抗體陽性率為1.61%（表1）。

表1 2016～2017年山東省三種亞型豬流感病毒血清學抗體陽性率Table 1 Antibody positive rate of EA H1N1 SIV, 2009/H1N1 SIV and H3N2 SIV in Shandong province from 2016 to 2017

2.2 三種亞型豬流感病毒血清學抗體陽性重復率檢測過程中發(fā)現(xiàn)在同一份血清中可同時檢測到兩種或兩種以上的豬流感亞型的抗體，EA H1N1亞型SIV和2009/H1N1亞型SIV抗體陽性重復率為17.34%，EA H1N1亞型SIV和H3N2亞型SIV抗體陽性重復率為1.29%，2009/H1N1亞型SIV和H3N2亞型SIV抗體陽性重復率為0.89%，EA H1N1亞型SIV、2009/H1N1亞型SIV與H3N2亞型SIV抗體陽性重復率為0.76%。

2.3 2016年下半年至2017年各季度三種亞型豬流感抗體陽性率檢測結(jié)果顯示，EA H1N1亞型SIV抗體陽性率總體處于上升的趨勢，并且在2017年第三季度達到最高；2009/H1N1亞型SIV抗體陽性率則是先上升后下降；H3N2亞型SIV抗體陽性率也是先上升后下降，變化趨勢基本與2009/H1N1亞型SIV抗體陽性率的變化趨勢相吻合（圖1）。

圖1 2016～2017年各季度三種亞型豬流感抗體陽性率變化圖1 Seasonal changes of antibody positive rate of EA H1N1 SIV, 2009/H1N1 SIV and H3N2 SIV during 2016-2017

2.4 不同豬場中三種亞型豬流感血清學檢測結(jié)果2016年下半年至2017年累計檢測117個豬場的豬流感血清抗體。檢測結(jié)果顯示，EA H1N1亞型SIV在不同豬場間的抗體陽性率為0～97.78%；2009/H1N1亞型SIV在不同豬場的抗體陽性率為0～100%；H3N2亞型SIV在不同豬場的抗體陽性率為0～16.67%（表2）。檢測到EA H1N1亞型SIV抗體存在的豬場為115個，占所檢測豬場的98.29%；檢測到2009/H1N1亞型SIV抗體存在的豬場為107個，占所檢測豬場的91.45%；檢測到H3N2亞型SIV存在的豬場為49個，占所檢測豬場的41.88%。在所檢測的117個豬場當中，有21個豬場的2009/H1N1亞型SIV抗體陽性率高于EA H1N1亞型SIV的抗體陽性率。

在調(diào)查的117個豬場中，EA H1N1亞型SIV抗體陽性率在60%以上的豬場為38個，占所調(diào)查豬場的32.48%；EA H1N1亞型SIV抗體陽性率在40%以上的豬場有74個，占所調(diào)查豬場的63.25%；EA H1N1亞型SIV抗體陽性率小于20%的豬場有13個，占所調(diào)查豬場的11.11%，說明絕大部分的豬場EA H1N1的抗體陽性率處于一個相對較高的水平。在調(diào)查的117個豬場中，2009/H1N1亞型SIV抗體陽性率在40%以下的豬場有94個，占所調(diào)查豬場的80.34%，說明絕大部分豬場中，2009/H1N1的抗體陽性率處于一個相對較低的水平。

對采集的樣品用EA H1N1、2009/H1N1和H3N2亞型SIV抗原進行檢測，結(jié)果顯示，EA H1N1亞型SIV的抗體陽性率最高，其次為2009/H1N1亞型SIV，而H3N2亞型SIV的抗體陽性率較低，表明山東省豬群中H1亞型毒株具有一定的流行優(yōu)勢，這與其他文獻報道的檢測結(jié)果基本一致[4-6]。

表2 各豬場H1N1抗體陽性率分布情況Table 2 Distribution of antibody positive rate of H1N1 SIV

不同國家和地區(qū)流行的豬流感病毒類型不盡相同。自從1918年豬流感首次爆發(fā)以來，一直到20世紀90年代，北美地區(qū)流行的豬流感毒株都是以古典豬流感病毒為主，基本沒有變異情況的發(fā)生。1979年研究人員發(fā)現(xiàn)EA H1N1的亞型SIV，歐洲SIV的進化速度開始發(fā)生變化。在北美地區(qū)則是從1998年發(fā)現(xiàn)1株三源重配H3N2亞型SIV開始，并且大部分的變異情況都是以基因重配為主。美國近年來發(fā)生多次人感染豬流感的事件，并且多以禽-人-豬三源重配的H1和H3亞型為主[7-9]。經(jīng)過基因重配的SIV，含有禽、豬或人流感病毒的基因，在選擇優(yōu)勢和跨種傳播能力明顯比單純的豬流感病毒更強。在我國，豬群中流行的豬流感毒株主要是H1和H3亞型。本次調(diào)查結(jié)果表明，EA H1N1亞型SIV是目前臨床上的優(yōu)勢流行毒株，這種流行不僅表現(xiàn)在同一個豬場中，也表現(xiàn)在不同的豬場中以及不同季節(jié)中。研究發(fā)現(xiàn)2017年第4季度EA H1N1亞型SIV抗體有上升趨勢，而2009/H1N1和H3N2亞型SIV抗體有下降趨勢，這些抗體變化意味著臨床上毒株流行情況發(fā)生變化，給SIV的監(jiān)控提供了重要的線索。

在目前我國豬群尚未普遍使用豬流感疫苗的情況下，對其進行血清學監(jiān)測很有必要。通過對豬流感流行情況的調(diào)查，對于追溯SIV的來源以及疫苗的研發(fā)生產(chǎn)具有十分重要的意義。豬流感的血清學監(jiān)測需要持續(xù)采集大量的樣品，掌握各個亞型豬流感的流行比例。將SIV的監(jiān)測同人流感病毒與禽流感病毒的監(jiān)測結(jié)合起來，密切關(guān)注其流行動態(tài)，對于動物健康和預防人流感的流行具有十分重要的意義。