張莉，魏殿華，齊亞銀

（石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 新疆石河子 832000）

綿羊肺炎支原體（MO）的感染又稱綿羊傳染性胸膜肺炎，MO 是一種介于細(xì)菌與病毒之間的無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)的原核微生物，國(guó)外1963 年首次從患間質(zhì)性肺炎的綿羊中分離得到該病原，我國(guó)于1979 年首次從患肺炎的綿羊肺臟中分離得到該病原。該病主要引起綿羊的一種以咳嗽、喘氣、漸進(jìn)性消瘦以及肺間質(zhì)的增生性炎癥為主要特征的慢性呼吸道傳染病。近年來，綿羊肺炎支原體的感染在我國(guó)主要綿羊養(yǎng)殖區(qū)，例如河北、山西、內(nèi)蒙古、甘肅、寧夏、新疆等地區(qū)頻繁發(fā)生，給我國(guó)養(yǎng)羊業(yè)帶來極大的危害，且嚴(yán)重阻礙了我國(guó)養(yǎng)羊業(yè)的健康持續(xù)發(fā)展[1,2]。

免疫接種是控制綿羊支原體肺炎的重要手段之一，但目前尚無商品化疫苗，臨床生產(chǎn)中主要依靠環(huán)境控制和藥物治療來控制該病的發(fā)生，而且臨床生產(chǎn)中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)綿羊肺炎支原體和其他細(xì)菌的混合感染，增加了科學(xué)防控該病的難度[3,4]。前期調(diào)研發(fā)現(xiàn)，北疆某規(guī)模化羊場(chǎng)存在疑似綿羊肺炎支原體的感染，各種年齡階段的羊只均有零星咳嗽，體溫輕度升高，腹式呼吸比較明顯，為了查明是否存在綿羊肺炎支原體的感染及程度，本試驗(yàn)采集不同日齡的血液，分離血清，選擇綿羊肺炎支原體抗體和抗原檢測(cè)ELISA 試劑盒，進(jìn)行該病的血清流行病學(xué)調(diào)查，以給本場(chǎng)提供一個(gè)科學(xué)有效的綜合防控方案。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 樣品的采集與處理對(duì)北疆某規(guī)模化羊場(chǎng)不同年齡階段的綿羊（湖羊）進(jìn)行頸靜脈采血。分別為10～30 日齡，16 只；30～60日齡，18 只；60～120 日齡，14 只；成年雌性綿羊，24 只；成年雄性綿羊，6 只。將采集好的綿羊血液靜置于室溫自然析出血清。待血清析出后3000r/min 離心5min，取上清于離心管中，置于4℃或-20℃保存。

1.1.2 主要試劑與儀器 綿羊肺炎支原體抗體檢測(cè)試劑盒、綿羊肺炎支原體抗原檢測(cè)試劑盒均購自美國(guó)TSZ 公司；酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀購自美國(guó)GENE 有限公司；微量移液器購自德國(guó)Eppendorf 公司。

1.2 試驗(yàn)方法

綿羊肺炎支原體抗原、抗體檢測(cè)方法按照試劑盒說明書嚴(yán)格操作。綿羊肺炎支原體抗體/抗原檢測(cè)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：試驗(yàn)有效性：陽性對(duì)照孔平均值≥1.00；陰性對(duì)照平均值≤0.10；臨界值（CUTOFF）計(jì)算：臨界值=陰性對(duì)照孔平均值+0.15；陰性判定：樣品OD 值＜臨界值（CUTOFF）為肺炎支原體抗體/抗原陰性；陽性判定：樣品OD 值≤臨界值（CUT OFF）者為肺炎支原體抗體/抗原陽性。

2 試驗(yàn)結(jié)果

從圖1 可以看出，不同階段的綿羊肺炎支原體抗體陽性率平均為67.95%，最高的為成年母羊，為79.17%，最低的是10～30 日齡羔羊，為43.75%；不同階段的綿羊肺炎支原體抗原陽性率平均為41.03%，最高的為60～120 日齡的羔羊，為71.43%，該階段咳嗽、喘氣的羊只較多，最低的為成年公羊和母羊，為16.67%。

表1 不同階段綿羊血清中MO-Ab和MO-Ag檢測(cè)結(jié)果表

圖1 不同階段綿羊血清中MO-Ab 和MO-Ag 檢測(cè)結(jié)果分析圖

3 討論

剡文亮等[5]研究發(fā)現(xiàn)，新疆北疆瑪納斯、奇臺(tái)、石河子等地綿羊MO 抗體陽性率為46.66%～100%，MO 抗原的陽性率為26.66%～100%，其中個(gè)別散養(yǎng)場(chǎng)野毒感染達(dá)到100%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于本試驗(yàn)結(jié)果中該規(guī)模化羊場(chǎng)的野毒感染現(xiàn)狀，可能規(guī)?；c散養(yǎng)模式的管理、營(yíng)養(yǎng)、防疫等現(xiàn)狀有關(guān)。

本試驗(yàn)綿羊肺炎支原體抗體檢測(cè)結(jié)果表明，抗體的野毒感染率為67.95%，但抗原的陽性率為41.03%，其中成年綿羊的抗原和抗體陽性率吻合率不高，說明成年綿羊存在早期支原體野毒感染現(xiàn)象，但機(jī)體免疫系統(tǒng)已經(jīng)將病原清除；各個(gè)階段羔羊的抗體和抗原陽性率吻合率較高，存在綿羊肺炎支原體正在感染的可能。

綿羊支原體肺炎作為一種主要影響羔羊生產(chǎn)性能的疫病，目前已經(jīng)威脅到我國(guó)各個(gè)不同地區(qū)的羊場(chǎng)，有關(guān)該病的進(jìn)一步研究，尤其是疫苗的開發(fā)迫在眉睫，另外養(yǎng)殖模式、養(yǎng)殖水平的層次不齊也是導(dǎo)致該病多發(fā)的主要因素，為了科學(xué)的防控該病的發(fā)生，應(yīng)該建立一套集營(yíng)養(yǎng)保健、免疫接種、環(huán)境控制和早期干預(yù)治療的綜合防控措施[6]。