李 飛，楊添雁，沙秀芬，李 群

四川師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，成都 610101

肝癌是發(fā)生于肝細(xì)胞或肝內(nèi)膽管細(xì)胞的惡性腫瘤[1]，具有發(fā)病年齡輕、惡性程度高、起病隱匿、進(jìn)展快等特點(diǎn)[2]。目前肝癌治療手段主要包括手術(shù)、化療和放療等，但手術(shù)切除不徹底、復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率高是影響肝癌臨床治療療效的主要問題，其治療的總體療效仍不理想[3]。而天然抗腫瘤藥物因具有療效顯著、副作用小、作用獨(dú)特與研究成本低的特點(diǎn)逐漸廣泛應(yīng)用于臨床治療。

連香樹(Cercidiphyllumjaponicum)又名山白果、云義樹和五君樹，是連香樹科連香樹屬的一種古老落葉高大喬木[4]。主要分布于日本和我國山西南部、四川西部與東南部等海拔400～2 500 m的常綠和落葉闊葉混交林中[5]。連香樹果實(shí)主要治療小兒的驚風(fēng)抽搐肢冷等癥狀；樹皮煎水后飲服，對感冒、痢疾等疾病具有特殊療效[4]；其甲醇提取物能抑制蔬菜病原菌的活性[6]。雖然連香樹擁有較高藥用價(jià)值，但缺乏對其功效的系統(tǒng)科學(xué)研究。目前對連香樹的研究大多數(shù)是關(guān)于瀕危狀況、培育繁殖、群落結(jié)構(gòu)、遺傳多樣性和生態(tài)特性等方面，而針對其次生代謝和功能開發(fā)方面研究較少。本實(shí)驗(yàn)采用連香樹精油處理人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞，探究其對該細(xì)胞增殖、凋亡與自噬的影響，并檢測自噬與凋亡相關(guān)蛋白探究其可能的抗腫瘤機(jī)制，進(jìn)一步為肝細(xì)胞癌的治療提供依據(jù)，同時(shí)為連香樹的開發(fā)利用提供理論參考。

1 材料與儀器

1.1 受試細(xì)胞株

人肝癌細(xì)胞株SMMC- 7721細(xì)胞購自成都哈里生物工程有限公司，由本實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。

1.2 供試材料

連香樹葉片采自海拔1 800米的四川省廣元市旺蒼縣鹽井河采育場，經(jīng)宜賓學(xué)院魏琴教授鑒定為連香樹科連香樹屬連香樹(Cercidiphyllumjaponicum)。在實(shí)驗(yàn)室將葉片干燥后粉碎至粉末，通過水蒸氣蒸餾法提取連香樹葉片中的精油。

1.3 主要儀器

G154TW型高壓蒸汽滅菌鍋(廈門致微儀器有限公司)；飛鴿牌TGL- 16B型臺式離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)；stratos型Thermo Fisher Scientific高速冷凍離心機(jī)(上海天呈醫(yī)流科技股份有限公司)；MD/Spectra Max M2多功能細(xì)胞分析儀(美國Molecular Devices公司)；Leica DMIL LED型倒置顯微鏡(北京冠普佳科技有限公司)；Leica DM3000型熒光顯微鏡(北京瑞科中儀科技有限公司)；cytoflex流式分析儀(Beckman)。

1.4 主要試劑

吖啶橙/溴化乙錠AO/EB、碘化丙啶PI、噻唑蘭MTT(Biosharp生物公司)；二甲基亞砜DMSO(Amresco生化公司)；RMPI- 1640液體培養(yǎng)基、無支原體新生牛血清、胰蛋白酶(成都哈里生物工程有限公司)；5- 氟尿嘧啶(中國食品藥品檢定研究院)；Annexin V- FITC/PI雙染細(xì)胞凋亡檢測試劑盒(江蘇凱基生物技術(shù)股份有限公司)；JC- 1線粒體膜電位試劑檢測盒(上海碧云天生物公司)；磷酸氯喹CQ(上海陶素生化科技有限公司)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)

人肝癌細(xì)胞SMMC- 7721細(xì)胞采用含10%小牛血清的RPMI- 1640完全培養(yǎng)基，置于37 ℃，5% CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞呈貼壁生長，用含0.25% EDTA的胰酶消化傳代，取對數(shù)生長期的細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

2.2 MTT法檢測人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞增殖活性

取對數(shù)生長期的SMMC- 7721細(xì)胞100 μL(1×104個(gè)/mL)接種于96孔板。培養(yǎng)24 h后，分別加入98 μL培養(yǎng)基和2 μL 終濃度為0.0375、0.075、0.15、0.3、0.6 mg/mL 的連香樹精油，并設(shè)置空白對照、陰性對照、陽性對照(80 μg/mL 5- 氟尿嘧啶)和溶劑對照(DMSO)。培養(yǎng)12、24、48 h后，加入20 μL MTT，4 h后吸去上清液，加入150 μL DMSO，用酶標(biāo)儀檢測480 nm處的吸光度，計(jì)算細(xì)胞抑制率：

2.3 流式細(xì)胞儀檢測人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞周期

取對數(shù)生長期的SMMC- 7721細(xì)胞2 mL(1×106個(gè))接種于6孔板。預(yù)培養(yǎng)24 h后，分別加入0.15、0.3、0.6 mg/mL的連香樹精油20 μL，并以DMSO作為溶劑對照。培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞。加入預(yù)冷的70% 的乙醇2 mL置于4 ℃冰箱固定24 h。PBS洗滌后加入1 mg/mL的RNAnase和碘化丙啶(PI)各25 μL，避光染色30 min，用ACEA NovoCyte流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期變化。

2.4 人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞凋亡檢測

2.4.1 細(xì)胞凋亡率檢測

參照2.3細(xì)胞前期處理方法，培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞。參照AnnexinV- FITC/PI凋亡檢測試劑盒說明書操作，用ACEA NovoCyte流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。

2.4.2 細(xì)胞凋亡形態(tài)觀察

參照2.3細(xì)胞前期處理方法，培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞。PBS重懸細(xì)胞，加入100 mg/mL的AO/EB染液5 μL，取混勻后的細(xì)胞懸液10 μL于載玻片，用Leica DM3000型熒光顯微鏡下觀察形態(tài)并拍照。

2.4.3 線粒體膜電位檢測

參照2.3細(xì)胞前期處理方法，培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞。重懸細(xì)胞，加入1 mL JC- 1染色工作液，二氧化碳培養(yǎng)箱孵育40 min。離心5 min，棄上清液，JC- 1染色緩沖液(1×)洗滌2次，加入2 mL培養(yǎng)基。取150 μL細(xì)胞懸液于黑色96孔板，測定JC- 1聚合體和JC- 1單體的吸光度。

2.5 人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞自噬檢測

參照2.3細(xì)胞前期處理方法，在透射電子顯微鏡下觀察細(xì)胞自噬體形態(tài)并拍照，用Western blot法測定SMMC- 7721細(xì)胞中LC3- Ⅰ、LC3- Ⅱ、Beclin- 1蛋白表達(dá)水平。

2.6 人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞凋亡與自噬的聯(lián)系

參照2.3細(xì)胞前期處理方法，培養(yǎng)24 h后收集細(xì)胞。棄上清液，用Western blot方法檢測SMMC- 7721細(xì)胞中LC3- Ⅰ、LC3- Ⅱ、Bcl- 2蛋白表達(dá)水平。

2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 22.0處理，Probit 法計(jì)算 IC50值，單因素方差分析顯著性差異，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各實(shí)驗(yàn)組均重復(fù)3次。

3 結(jié)果與分析

3.1 連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞增殖的影響

連香樹精油對SMMC- 7721細(xì)胞增殖的影響結(jié)果見圖1，由圖1可知，精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞有明顯抑制作用，且呈劑量依賴性。處理12、24、48 h后的IC50值分別為0.108、0.104、0.132 mg/mL，可得出24 h處理后IC50值為最小，因此選取24 h作為后續(xù)試驗(yàn)的處理時(shí)間。

圖1 連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞活力的影響Fig.1 Effect of C.japonicum oil on the viability of human hepatoma SMMC- 7721 cells注：與溶劑對照組相比，*P<0.05，顯著差異；**P<0.01，極顯著差異。Note:Compared to the solvent control group, *P<0.05,significant difference;**P<0.01,extremely significant difference.

3.2 連香樹精油使人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞阻滯在G2 /M期

圖2 連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞周期的影響Fig.2 Effect of C.japonicum oil on the cell cycle of human hepatoma SMMC- 7721 cells注：a，b，c，d依次為0、0.15、0.3、0.6 mg/mL的連香樹精油。Note:a:control group;b:0.15 mg/mL;c:0.3 mg/mL;d:0.6 mg/mL.

3.3 連香樹精油誘導(dǎo)人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞凋亡

3.3.1 連香樹精油對SMMC- 7721細(xì)胞凋亡率的影響

用流式細(xì)胞儀檢測連香樹精油誘導(dǎo)SMMC- 7721細(xì)胞凋亡率的結(jié)果見圖3，隨著連香樹精油濃度的升高，細(xì)胞凋亡率呈劑量依賴性升高。當(dāng)處理濃度為0 mg/mL時(shí)，細(xì)胞凋亡率(早凋+晚凋)為4.19%；當(dāng)處理濃度為0.6 mg/mL時(shí)，細(xì)胞凋亡率(早凋+晚凋)為20.58%。

3.3.2 AO/EB染色觀察人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞凋亡形態(tài)

AO/EB染色后SMMC- 7721細(xì)胞凋亡形態(tài)結(jié)果見圖4，由圖4可知，隨著連香樹精油濃度的升高，綠色熒光的活細(xì)胞數(shù)目減少，呈桔紅色或紅色熒光的凋亡細(xì)胞數(shù)增多。

圖3 連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞凋亡率的影響Fig.3 Effect of C.japonicum oil on the apoptosis rate of human hepatoma SMMC- 7721 cells注：a，b，c，d依次為0、0.15、0.3、0.6 mg/mL的連香樹精油。與溶劑對照組相比，*P<0.05，顯著差異；**P<0.01，極顯著差異。Note:a:control group;b:0.15 mg/mL;c:0.3 mg/mL;d:0.6 mg/mL.Compared to the solvent control group, *P<0.05,significant difference;**P<0.01,extremely significant difference.

圖4 AO/EB染色觀察連香樹精油誘導(dǎo)人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞凋亡Fig.4 AO/EB staining observe the apoptosis of human hepatoma SMMC- 7721 cells induced by C.japonicum oil注：a、b、c、d依次為0、0.15、0.3、0.6 mg/mL的連香樹精油。Note:a:control group;b:0.15 mg/mL;c:0.3 mg/mL;d:0.6 mg/mL.

3.3.3 連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞線粒體膜電位的影響

經(jīng)JC- 1法測定連香樹精油處理人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞后胞內(nèi)線粒體膜電位的變化情況結(jié)果見表1，由表1可知，隨著連香樹精油濃度的升高，SMMC- 7721細(xì)胞內(nèi)的膜電位比值呈劑量依賴性下降。表明連香樹精油誘導(dǎo)人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞線粒體膜電位下降。

表1 連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞的線粒體膜電位的影響

Note：Mean±STDEV,n=3;Different letters in the same column show significant difference atP=0.05 level.

3.3.4 連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞Caspase1和8的影響

在預(yù)制裝配式住宅建筑過程中，施工人員時(shí)常會(huì)用到超薄無機(jī)的預(yù)制外墻，相比較傳統(tǒng)的建筑結(jié)構(gòu)，利用這種新型的外墻解決了固有的穩(wěn)定性差的問題，并且在施用這項(xiàng)技術(shù)之前，項(xiàng)目施工人員將銜接性和保溫問題都列為考慮因素之內(nèi)，不僅有效地提高了預(yù)制裝配式項(xiàng)目的使用年限，而且還減少了在使用過程中出現(xiàn)的脫落或者剝離的惡劣現(xiàn)象，為現(xiàn)場工人提供了保護(hù)傘，提升了項(xiàng)目的安全性能[2]。

連香樹精油對凋亡與焦亡相關(guān)蛋白的影響如表2所示，由表2可知，隨著連香樹精油濃度的升高，SMMC- 7721細(xì)胞內(nèi)Caspase8相比對照組無明顯上調(diào)趨勢，Caspase1相比對照組先下降后上升但無明顯升高趨勢，表明連香樹精油沒有明顯通過誘導(dǎo)死亡受體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和活化Caspase1介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡兩條途徑來誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。

表2 連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞中Caspase8和Caspase1的影響

3.4 連香樹精油誘導(dǎo)人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞自噬

3.4.1 透色電鏡觀察自噬體形態(tài)

透色電鏡下自噬體形態(tài)如圖5所示，由圖可知，當(dāng)連香樹精油濃度為0 mg/mL時(shí)，細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整，核膜清晰；當(dāng)連香樹精油濃度為0.3 mg/mL時(shí)，細(xì)胞內(nèi)染色質(zhì)呈無規(guī)律的塊狀分布，出現(xiàn)許多明顯的雙層膜結(jié)構(gòu)或者包裹著需要降解的細(xì)胞器的自噬體，說明連香樹精油誘導(dǎo)人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞自噬。

圖5 透射電鏡觀察連香樹精油誘導(dǎo)人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞自噬Fig.5 Transmission electron microscopy observe the autophagy of human hepatoma SMMC- 7721 cells induced by C.japonicum oil注：a (5.0 μm)、b (5.0 μm)、c (1.0 μm)依次為0、0.3、0.3 mg/mL的連香樹精油。Note:a (5.0 μm):control group;b (5.0 μm):0.3 mg/mL;c (1.0 μm):0.3 mg/mL.

3.4.2 連香樹精油對自噬相關(guān)蛋白的影響

連香樹精油對自噬相關(guān)蛋白的影響如圖6所示，結(jié)果表明，隨著連香樹精油濃度的升高，細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白LC3- Ⅰ逐漸向LC3- Ⅱ轉(zhuǎn)化，造成LC3- Ⅱ蛋白的大量積累，Beclin- 1的蛋白水平明顯上調(diào)，表明連香樹精油誘導(dǎo)了人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞發(fā)生較高水平的自噬。

圖6 連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白的影響Fig.6 Effect of C.japonicum oil on autophagy- associated protein in human hepatoma SMMC- 7721 cells注：1、2、3、4依次為0.6、0.3、0.15、0 mg/mL的連香樹精油。Note:1:0.6 mg/mL;2:0.3 mg/mL;3:0.15 mg/mL;4:control group.

3.5 連香樹精油誘導(dǎo)的自噬抑制人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞凋亡

為研究連香樹精油誘導(dǎo)SMMC- 7721細(xì)胞自噬在凋亡中的作用，將自噬抑制劑氯喹和連香樹精油共同孵育SMMC- 7721細(xì)胞，自噬相關(guān)蛋白表達(dá)結(jié)果如圖7所示。由圖7可知，LC3- Ⅰ蛋白積累較多，LC3- Ⅱ蛋白減少，表明自噬受到抑制。抑制連香樹精油誘導(dǎo)SMMC- 7721細(xì)胞的自噬后，蛋白表達(dá)結(jié)果如圖8所示，Bcl- 2抗凋亡蛋白隨連香樹精油濃度的增大而明顯下調(diào)，表明在抑制了連香樹精油誘導(dǎo)人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞的自噬后促進(jìn)了連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞的凋亡作用。

4 結(jié)論

近年來，植物來源的天然提取物及其次生代謝產(chǎn)物生物活性的研究備受關(guān)注[7]，特別是植物抗腫瘤藥物領(lǐng)域發(fā)展迅猛。目前已篩選出具有抗腫瘤活性的植物提取物多達(dá)3萬種，應(yīng)用于臨床的抗腫瘤藥物已有80多種[8]。具有生理或者藥理活性的植物提取物能夠通過阻滯細(xì)胞周期，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡和自噬等方式來抑制并殺死腫瘤細(xì)胞[9]。本研究也從這幾個(gè)方面研究了連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞的作用情況。

圖7 抑制自噬后連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞中自噬相關(guān)蛋白的影響Fig.7 Effects of C.japonicum oil on autophagy- related proteins in human hepatoma SMMC- 7721 cells after autophagy inhibition注：CQ1、CQ2、CQ3、CQ4依次為自噬抑制劑氯喹與0.6、0.3、0.15、0 mg/mL的連香樹精油共同孵育。Note:CQ1:0.6 mg/mL+CQ;CQ2:0.3 mg/mL+CQ;CQ3:0.15 mg/mL+CQ;CQ4:control group+CQ.

圖8 抑制自噬后連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞中Bcl- 2蛋白的影響Fig.8 Effect of C.japonicum oil on Bcl- 2 protein in human hepatoma SMMC- 7721 cells after autophagy inhibition注：CQ1、CQ2、CQ3、CQ4依次為自噬抑制劑氯喹與0.6、0.3、0.15、0mg/mL的連香樹精油共同孵育。Note:CQ1:0.6mg/mL+CQ;CQ2:0.3mg/mL+CQ;CQ3:0.15mg/mL+CQ;CQ4:control group+CQ.

細(xì)胞有絲分裂的正常運(yùn)行對細(xì)胞的增殖和生長有著重要的調(diào)控作用，阻滯細(xì)胞周期導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂已經(jīng)成為藥物作用于腫瘤細(xì)胞的新靶點(diǎn)[10]。研究表明，蛇床子通過阻滯N87胃癌細(xì)胞G2/M期從而抑制細(xì)胞增殖[11]；SHIP2 同樣阻滯喉癌Hep- 2細(xì)胞的G2/M期[12]。在本研究中，連香樹精油處理人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞24 h后，細(xì)胞中G0/G1期的比例由73.47%下降到66.27%，G2/M期的比例由7.14%升高至11.14%，推測連香樹精油通過將部分人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞阻滯在G2/M期達(dá)到抑制細(xì)胞分裂的作用。

細(xì)胞凋亡是一個(gè)在相關(guān)基因調(diào)控下進(jìn)行高度程序化的過程，遵循固有的程序性自殺機(jī)制，細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)可以形成凋亡小體，最后被鄰近的細(xì)胞或吞噬細(xì)胞所吞噬[13]。在本實(shí)驗(yàn)中，連香樹精油處理人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞24 h后誘導(dǎo)了腫瘤細(xì)胞的凋亡，表現(xiàn)為線粒體膜電位的下降。細(xì)胞外源死亡受體介導(dǎo)的凋亡主要的三條Fas/FasL、TRAIL和TNFR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路都需要Caspase8的活化。本研究中測定了連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞中Caspase8蛋白的影響，發(fā)現(xiàn)Caspase8蛋白水平相比對照組無顯著上調(diào)，推測連香樹精油沒有通過外源死亡受體途徑誘導(dǎo)人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞凋亡。

細(xì)胞焦亡是近年來新的一種依賴于炎癥小體半胱天冬酶- 1(Caspase- 1)的細(xì)胞死亡方式。Wei等[14]的研究表明半夏凝集素通過激活MAPKs/NF- κb通路釋放IL- 1β，IL- 1β依賴于Caspase1發(fā)揮促炎作用。本研究中，通過測定連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞中Caspase1蛋白的水平發(fā)現(xiàn)Caspase1與對照組相比先下調(diào)后上升，無明顯上調(diào)趨勢，推測連香樹精油沒有誘導(dǎo)人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞焦亡。

細(xì)胞自噬是細(xì)胞通過自噬溶酶體途徑從而降解細(xì)胞內(nèi)自身物質(zhì)的過程，與細(xì)胞凋亡都屬于細(xì)胞程序性死亡。二者間存在緊密的聯(lián)系，主要表現(xiàn)為：第一，自噬和凋亡共同促進(jìn)細(xì)胞死亡；第二，自噬與凋亡互為拮抗作用，自噬為腫瘤細(xì)胞提供生存所須的原料或ATP，抑制細(xì)胞凋亡；第三，自噬促進(jìn)細(xì)胞向凋亡的轉(zhuǎn)化[15]。Li等[16]的研究發(fā)現(xiàn)藥用植物遠(yuǎn)志中的甌黃酮誘導(dǎo)SKOV3和OVCAR3人卵巢癌細(xì)胞發(fā)生的自噬抑制了其誘導(dǎo)的凋亡作用；還有研究表明饑餓誘導(dǎo)K562/ADM白血病細(xì)胞發(fā)生保護(hù)性自噬，抑制其凋亡的發(fā)生[17]。本研究發(fā)現(xiàn)連香樹精油誘導(dǎo)了人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞自噬，推測自噬過程抑制了腫瘤細(xì)胞的凋亡作用。在加入自噬抑制劑后，Bcl- 2抗凋亡蛋白水平顯著下調(diào)，促進(jìn)了SMMC- 7721細(xì)胞的凋亡作用，表明連香樹精油處理SMMC- 7721細(xì)胞后誘導(dǎo)的自噬作為一種保護(hù)機(jī)制存在，二者表現(xiàn)為拮抗作用?？梢钥紤]通過抑制細(xì)胞的自噬過程來促進(jìn)連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞的凋亡作用來殺死腫瘤細(xì)胞。

綜上所述，連香樹精油對人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞具有顯著的細(xì)胞毒性作用，顯著降低了細(xì)胞活力并破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)；通過阻滯部分G2/M期的細(xì)胞影響細(xì)胞周期；降低細(xì)胞中的線粒體膜電位誘導(dǎo)SMMC- 7721細(xì)胞發(fā)生凋亡。同時(shí)連香樹精油能夠強(qiáng)烈人肝癌SMMC- 7721細(xì)胞發(fā)生自噬，而自噬在精油誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡中作為一種保護(hù)機(jī)制存在。